不同方法提取狗脊蕨叶片总RNA的比较分析

[目的]为构建狗脊蕨叶cDNA文库,保存珍贵基因资源,克隆和研究与有效成分合成相关的基因等提供技术参考。[方法]以狗脊蕨叶片为材料,采用CTAB法、一步法、酚-SDS法和RNA试剂盒提取分离法提取总RNA,通过比较分析确定最优方法。[结果]这4种方法都能提取出182、8 S的RNA,但CTAB法和试剂盒提取分离法的总RNA质量较高,CTAB法还提取出清晰的5S RNA。一步法和SDS法带型模糊,有降解现象。CTAB法提取的狗脊蕨叶片总RNA质量较好,28S1、8S和5S条带清晰,且无明显降解。CTAB提取法OD260/OD280的值在1.93~2.06,试验中其OD260/OD280值为2.012,接近2.0,纯度较高。一步法和SDS法OD260/OD280>2.0,试剂盒法OD260/OD280<2.0。[结论]CTAB法适合提取的狗脊蕨叶片总RNA,质量较好,可用于cDNA合成、文库构建等后续分子生物学试验。     

昆明红粘土的基本特征及工程效应影响机理的探讨*

 通过对昆明市区红粘土进行了野外勘察，确定了昆明市区红粘土的分布特征及形成条件。利用X-荧光光谱仪、激光粒度分析仪和扫描电子显微镜（SEM），对昆明市区50多个红粘土土样进行了分析，从土样的化学成分、粒度分布和表面形貌上研究了它们的基本物理特征。同时研究了昆明市区红粘土的力学特性，并与黔桂地区红粘土的力学性质进行了比较。     

大白菜抗霜霉病同源基因的筛选与亚克隆文库的构建

根据植物抗霜霉病基因保守区设计简并引物,利用三维PCR方法对大白菜(Brassica campestris ssp.pekiensis)‘85-1'BAC文库进行筛选,从19 200个BAC克隆中筛选到含有目的基因的10个阳性克隆.利用HindⅡ对其中的94一G-17克隆进行酶切,回收1～5 kb的DNA片段并连接到载...     

府河－白洋淀沉积物中重金属污染特征及潜在风险评价

沉积物重金属污染是水环境污染评价的重要内容,重金属含量水平常被作为水环境质量的重要指标之一。为了掌握华北平原的府河和白洋淀中沉积物重金属的污染水平,研究了19个沉积物样品和3个土壤样品中7种重金属的污染特征,利用地积累指数法、潜在生态危害指数法及生物效应浓度法评估了重金属的环境风险,并初步分析了污染来源。结果表明,府河和白洋淀沉积物受多种重金属复合污染,其中Zn、Pb、Cu和Cd污染较为严重,府河沉积物的潜在生态环境危害强于白洋淀。相关分析显示府河和白洋淀重金属污染具有相似污染源,保定市工业废水、生活污水及府河沿岸金属冶炼企业很可能是白洋淀地区重金属的主要来源。从城市环境管理、生态环境修复、宣传教育等方面提出白洋淀区域重金属污染控制对策与建议,为白洋淀区域生态环境保护提供科技支撑。     

小麦白粉病菌空中孢子量与气象因子的关系及病害预测模型的建立

对小麦白粉病菌空中孢子量进行了监测,并分析了孢子量与气象因子的关系.利用SPSS统计软件对试验数据进行相关和回归分析,建立了病害预测模型.结果表明,孢子量与温度呈负相关,相关系数为-0.070 1;与降水量呈正相关,相关系数为0.3194:与相对湿度呈负相关,相关系数为-0.438 9;与风速呈负相关,相关系数为-0....     

放线菌A4产淀粉酶发酵条件的优化

为给工业化生产放线菌产淀粉酶提供一定的理论依据,根据产淀粉酶放线菌菌株A4的营养需要和生长特性,分析了不同因素对放线菌A4产淀粉酶发酵的影响。结果表明:放线菌A4产淀粉酶的最佳发酵条件为玉米粉3.00%、装液量80.17mL、pH 7.75、牛肉膏0.5%和蛋白胨0.49%,在此条件下,产淀粉酶放线菌菌株A4的平均酶活力达1.939U/mL。     

云南通海蔬菜区土壤和蔬菜中重金属及农药残留分析

[目的]为云南省蔬菜安全生产和可持续发展提供科学依据。[方法]采用单因子指数法和综合污染指数法,分析云南省通海县蔬菜区土壤样品和蔬菜样品中重金属及农药残留,评价环境质量。[结果]蔬菜种植区大部分土壤中Pb、Hg、As、Cr含量在评价标准范围内,个别区域Cr含量在警戒线范围内。总体上,土壤Pb、Hg、As、Cr多因子综合污染指数为0.64,小于0.70,污染等级属于安全级别。土壤农药残留检出氯氰菊酯和氯氰戊酯浓度分别为0.063 6、0.017 4 mg/kg。蔬菜农药残留检出百菌清浓度0.037 mg/kg。蔬菜亚硝酸盐含量低于国家标准(4 mg/kg)。[结论]通海县蔬菜地土壤环境和蔬菜的农药残留情况较理想。     

Cdc42蛋白在牛卵母细胞中的表达分布及对其成熟的影响

【目的】探明Cdc42蛋白在牛卵母细胞成熟过程中的表达及分布规律,并且研究抑制Cdc42活性对于牛卵母细胞成熟的影响。【方法】首先通过收集体外成熟不同时间（0-24 h）的牛卵母细胞,用Western blotting的方法检测Cdc42蛋白在牛卵母细胞中的表达量变化情况,通过免疫细胞化学的方法检测Cdc42蛋白在牛卵母细胞中的分布及定位情况。根据GenBank公布的牛Cdc42基因（GenBank登录号：NM_001046332.1）的mRNA序列设计引物,并在正向和反向引物的末端分别加上KpnⅠ和EcoRⅠ酶切位点,用PCR的方法扩增牛Cdc42基因的CDS区,将PCR产物和pMD19T载体连接得到野生型的克隆载体pMD19T-Cdc42WT。用定点突变引物以pMD19T-Cdc42WT为模板进行PCR反应,得到Cdc42的显性负性突变体Cdc42T17N的克隆载体pMD19T-Cdc42T17N。将pMD19T-Cdc42WT和pMD19T-Cdc42T17N分别酶切后,将Cdc42WT（775 bp）和Cdc42T17N（775 bp）片段分别连接到pcDNA3.1（+）的多克隆位点区域,得到相应的原核表达载体pcDNA3.1（+）-Cdc42WT和pcDNA3.1（+）-Cdc42T17N。用体外转录的方法分别得到Cdc42WT和Cdc42T17N的cRNA,用显微注射的方法将相应的cRNA分别注入到牛GV期卵母细胞质内,检测其成熟率的变化。【结果】①Cdc42蛋白分别在牛卵母细胞中成熟培养0、4、8、12、16、20以及24 h时表达量没有明显差异,但是其分布规律随着减数分裂的进行发生着动态的变化：Cdc42蛋白在卵母细胞皮质区域集中分布的模式在生发泡（germinal vesicle,GV）期卵母细胞中很少出现,而在第一次减数分裂中期（metaphase Ⅰ,MⅠ）卵母细胞中出现得最多也最为明显;Cdc42蛋白在染色体附近的皮质富集的现象开始出现于前中期（pro-metaphase Ⅰ,pMⅠ）,并且出现频率从pMⅠ期到第2次减数分裂中期（metaphase Ⅱ,MⅡ）逐渐增多;Cdc42蛋白和纺锤体重叠定位的现象在第1次减数分裂后期（anaphase Ⅰ,AⅠ）到末期（telophaseⅠ,TⅠ）的卵母细胞中占有有很高比例,而到MⅡ期时这种现象又很少出现。②从牛卵母细胞的总cDNA中扩增Cdc42基因得到785 bp的片段,构建的牛Cdc42的野生型及其显性负性突变体的克隆载体pMD19T-Cdc42WT和pMD19T-Cdc42T17N经酶切鉴定和以及测序比对后,符合预期结果,即成功克隆了牛野生型Cdc42基因并得到其显性负性突变体Cdc42T17N;③构建的相应的原核表达载体pcDNA3.1（+）-Cdc42WT和pcDNA3.1（+）-Cdc42T17N经酶切鉴定和测序比对,符合预期结果,经过体外转录均得到一个3079 bases和987 bases的RNA片段,符合预期结果,即成功构建了相应的原核表达载体并获得相应的cRNA;④与正常成熟培养组和注射Cdc42WTcRNA的牛卵母细胞相比,注射Cdc42T17NcRNA的成熟率显著降低（P<0.05）。【结论】卵母细胞在卵泡发育过程中就已经积累了足够的Cdc42蛋白,而在减数分裂过程中Cdc42可以在卵母细胞的皮质以及纺锤体的位置发挥作用,而且正常的Cdc42活性是牛卵母细胞完成成熟过程并排出第一极体所必需的。     

兔抗灭多威多克隆抗体的制备

根据灭多威结构特征将其改造成的新半抗原,分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)共价偶联作为免疫原和包被原进行抗体制备及ELISA试验,抗血清效价达2.56×105。建立了间接竞争ELISA方法并优化了工作条件,方阵测定确定了包被抗原最佳浓度为10μg/ml,抗血清最佳稀释度为1∶51 200,建立了ELISA标准工作曲线,表明在50~5 000 ng/ml浓度范围内抑制率与灭多威浓度的对数值呈线性关系,检测限为100 ng/ml。     

球孢白僵菌孢子悬乳剂及其混配剂在甘蓝叶面的残留分析*

 采用生化检测法（酶快速检测）和生物检测法（敏感家蝇检测）检测分析了球孢白僵菌孢子悬乳剂、孢子悬乳剂与1%（W/V）10%吡虫啉可湿性粉剂混配剂（EM1）、孢子悬乳剂与3%（W/V）10%吡虫啉可湿性粉剂混配剂（EM2）、10%吡虫啉可湿性粉剂、2.5％高效氯氟氰菊酯乳油、20%灭多威乳油、50%抗蚜威在田间甘蓝叶片上的残留。抑制率检测结果表明,纯菌剂处理后的抑制率低于2.5％高效氯氟氰菊酯乳油、20%灭多威乳油、50%抗蚜威化学农药的抑制率。敏感家蝇法检测结果表明,纯菌剂、混配剂I(EM1)饲喂后家蝇幼虫的累积死亡率之间无显著差异,但2.5％高效氯氟氰菊酯乳油、20%灭多威乳油、50%抗蚜威、3%(W/V)吡虫啉(10%可湿性粉剂)、混配剂II(EM2)饲喂后家蝇的累积死亡率则略高于其纯菌剂。因此,在菌药混用中,低剂量药剂的加入对残留的影响不明显,而高剂量的化学农药的加入则会引起残留的出现。由此表明,球孢白僵菌孢子乳悬剂及其与低剂量的吡虫啉混配剂在蔬菜上无残留现象存在,符合无公害蔬菜生产的要求。