鸡单核细胞增生性李斯特菌病诊断与病原鉴定

通过临床观察、病理剖检、细菌学检测、生化试验、动物试验及低温培养试验,确诊一例鸡李斯特菌病,并鉴定一株鸡源单核细胞增生性李斯特菌,药敏试验结果表明该分离菌对氯霉素敏感性最高。     

两株ALV-K重组病毒感染性克隆的构建及病毒拯救

【目的】为探明引起禽白血病病毒K亚型(ALV-K)两不同毒株之间致瘤性差异的原因,进一步探索ALV-K的致病机理,实现两株ALV-K重组病毒感染性克隆的构建及病毒拯救。【方法】以前期构建的ALV-K毒株HB2018003和HB2015032的感染性克隆为模板,PCR扩增分别获取两毒株单独的5′-端长末端重复序列(5′-LTR)基因片段和剩余目的基因片段。切胶回收目的片段后将两毒株的5′-LTR互换,通过同源重组的方法获得连接产物。将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞后涂布Amp抗性平板过夜培养,挑取PCR鉴定为阳性的菌落提取重组质粒TOPO-003-032和TOPO-032-003并送检测序。将PCR和测序鉴定正确的重组质粒转染至易感细胞DF-1中盲传3代,使用群特异性抗原P27 ELISA、多重PCR和间接免疫荧光等方法对拯救的病毒进行检测。【结果】测序和重组感染性克隆PCR鉴定的结果表明成功构建了5′-LTR互换的重组质粒,多重PCR结果显示在目的片段大小处出现ALV-K预期条带,未出现ALV-A和ALV-J条带,间接免疫荧光试验结果显示接种拯救病毒的DF-1细胞出现明显的亮绿...     

荆江麻鸭THRSPα基因内含子酶切多态性及其与屠体性状的研究

采用PCR-RFLP法检测96只荆江麻鸭THRSPα基因内含子的多态性,并对基因多态性与屠体性状进行关联分析。结果发现,本试验群体中未检测到AA基因型,仅有CC和CA2种基因型。其中C等位基因频率为0.9792,为优势等位基因。χ2检验表明,该多态位点处于Hardy-Weinberg遗传平衡状态。结果表明:荆江麻鸭THRSPα基因内含子多态位点CA基因型个体活重极显著高于CC基因型(P0.01),C基因C型个体全净膛率、胸肌率和瘦肉率极显著高于CA基因型(P0.01),其他性状差异不显著(P0.05)。     

不同产地待宰生猪的非洲猪瘟病毒检测

2019年广西玉林地区报告首例非洲猪瘟疫情,为探明当地防控政策措施实施以来对非洲猪瘟的阻断效果,本研究对辖区内某屠宰企业不同产地的待宰生猪采集全血制成混合血液样本,应用荧光PCR技术检测样本中是否含有非洲猪瘟病毒。检测结果得出均为阴性,说明当地有关政策的贯彻落实对防控非洲猪瘟起到了积极作用。     

表达A亚群禽白血病病毒Gp85蛋白的乳酸菌的构建

本研究旨在构建乳酸菌表达载体以研制A亚群禽白血病病毒（Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A）的活菌疫苗,用于预防禽白血病。使用锚定表达载体构建2株分别表达gp85和gp85-DCpep基因的重组植物乳杆菌,以感染ALV-A的DF-1细胞的基因组DNA为模板,使用PCR方法扩增ALV-A Gp85蛋白的编码基因gp85,将树突状细胞靶向肽（DC-targeting peptide,DCpep）编码基因与gp85基因进行融合,获得gp85-DCpep基因;使用乳酸菌锚定表达载体pSIP409-pgsA’通过同源重组的方法构建重组质粒pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和pSIP409-pgsA’-gp85;经测序正确后将上述质粒分别电转化植物乳杆菌NC8感受态细胞,获得重组植物乳杆菌;使用SppIP诱导重组植物乳杆菌的表达,收集处于对数生长期的菌体,通过反复冻融获取细胞膜的蛋白样,采用Western blotting技术检测pgsA’-gp85-DCpep和pgsA’-gp85蛋白的表达情况。结果显示,试验成功获得基因片段gp85和gp85-DCpep,构建的重组质粒pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和pSIP409-pgsA’-gp85测序无突变和丢失情况,并成功电转到植物乳杆菌NC8感受态细胞中,使用SDS-PAGE和Western blotting技术在细胞膜蛋白样中检测到蛋白的表达,大小分别为48.3（pgsA’-gp85-DCpep）和47 ku （pgsA’-gp85）。本试验成功构建了重组质粒pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和pSIP409-pgsA’-gp85,获得的重组植物乳杆菌NC8-pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和NC8-pSIP409-pgsA’-gp85中的蛋白均成功表达,且具有反应原性,为后期深入研究重组植物乳杆菌在抗ALV-A感染中的保护机制奠定良好的基础。     

内源性禽白血病病毒ev/J基因克隆与分析

用位于内源性禽白血病病毒ev/J 5′和3′长末端序列(LTR)上的引物,对我国的灵山麻鸡、江汉鸡、肉鸡和SPF鸡正常基因组中内源性ev/J进行扩增,结果扩增出长约为4 kb、2.2 kb和2 kb 3种大小的片段。测序分析表明,这些片段分属于Ⅱ型和Ⅳ型ev/J以及另一类具有更大缺失的ev/J基因。ev/J在这几个品系鸡中分布并不完全相同,肉鸡和SPF鸡均具有Ⅱ型和Ⅳ型ev/J,江汉鸡只含Ⅱ型ev/J,而灵山麻鸡则含有另一类具有更大缺失的ev/J基因。此次获得的Ⅳ型ev/J序列不仅相互之间高度同源,而且其env基因与外源性ALV-J原型株HPRS-103env基因以及我国外源性ALV-J主要分离株env基因也高度同源,表明内源性ev/J在宿主正常基因组中高度保守。     

鸭巴氏杆菌病理学诊断方法

<正>多杀性巴氏杆菌,寄生在健康动物的扁桃体和上呼吸道内,属于条件性致病菌。正常情况下,鸭巴氏杆菌侵染机体后,刺激机体防御系统产生免疫反应,但当机体免疫力低下或治疗不彻底时,致病菌在短时间内不能被清除,在机体内持续存在或反复作用,不断损伤组织,导致机体免疫细胞过度增生,进而促使免疫器官产生功能性障碍,影响其功能。同时,致病菌可不断繁殖,并直接沿组织间隙向周围组织、器官蔓延或向全身散播。致病菌侵入机体后,产生的外毒素或内毒素随血液循环到达各组织器官,由于肝、肾的解毒功能逐渐退化,毒力因子直接损伤细胞,导致     

禽白血病病毒A亚群分离株感染性克隆的构建

为探究A亚群禽白血病病毒(ALV-A)的致病机理,对本实验室分离到的一株命名为HB2015012的ALV-A进行感染性克隆构建。采用PCR方法将基因组分为重叠的3段分别扩增该分离株的cDNA,经酶切按顺序连接至pTOPO-Blunt Simpie构建重组质粒TOPO-012-ABC,进而转染易感的DF-1细胞,进行病毒的拯救。经禽白血病抗原检测试剂盒检测,PCR及间接免疫荧光(IFA)鉴定,均表明拯救出了具有感染性的重组A亚群禽白血病病毒(rALV-A),命名为rHB2015012。     

单增李斯特菌双元调控系统hssS/hssR缺失株的构建及其生物学特性

单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种重要的食源性人畜共患病原菌,可抵抗外界多种不利因素的影响,如酸、碱、渗透压和氧化应激.双元调控系统(two-component system,TCS)是细菌适应环境的重要调控系统,为了探明双元调控系统HssS/HssR对单增李斯特菌抗应激能力及毒力...