琥珀酰化修饰对甘油醛-3-磷酸脱氢酶活性的影响

通过定点突变和生物学分析,研究了赖氨酸琥珀酰化对GAPDH活性的影响。结果表明：发菜GAPDH基因全长为1 014 bp,由338个氨基酸组成,其中K264位点在藻类中高度保守。将K264位点的氨基酸K(AAA)突变为R(AGA),野生型和突变型GAPDH在大肠杆菌中表达,获得一个36.61 ku的外源蛋白。纯化后蛋白活性测定发现,发生琥珀酰化修饰比未发生琥珀酰化修饰的GAPDH(K264)活性显著降低,表明琥珀酰化修饰参与发菜GAPDH活性的调节。研究结果为深入研究发菜GAPDH的分子信息和生物学功能提供理论参考。     

款冬营养器官的解剖学研究

对款冬营养器官解剖结构研究表明：根为典型的双子叶植物根的结构,初生木质部四原型;茎由表皮、皮层和维管柱组成,维管束二环,具皮层维管束;叶为异面叶,栅栏组织细胞排列疏松,海锦组织具大量气隙,叶脉维管束较发达,叶上下表皮均具有气孔器,气孔器为不规则型。     

龙眼胚胎发育过程中胚珠内核酸、蛋白质和淀粉含量的变化

对龙眼胚胎发育过程中胚珠内核酸、蛋白质和淀粉含量的变化进行了研究.结果表明:以每克胚珠鲜重计,核酸含量在花后10-17 d达到最大值,以后逐渐降低,至45 d左右达最低值后又平稳回升;以每胚珠鲜重计,DNA含量随胚珠的发育而逐渐增加.RNA的含量变化总体趋势与DNA相似,但DNA含量的变化先于RNA.以每克胚珠鲜重计,蛋白质含量变化与核酸的变化基本相似;以每胚珠鲜重计,蛋白质的积累基本上与RNA的积累同步进行.胚珠内淀粉含量的变化趋势与DNA、RNA、蛋白质略有不同.以每克胚珠鲜重计,淀粉含量的变化表现为先降低后升高的变化趋势;以每胚珠鲜重计,则随着胚珠的发育含量不断增加,其中52 d后急剧增加.龙眼胚胎的发育状况与胚珠内核酸、蛋白质和淀粉含量的变化密切相关.     

龙眼成花逆转不同时期花芽差异蛋白的研究

利用2-DE差异显示和质谱分析研究了龙眼(Dimocarpus longan Lour.)成花逆转3个不同时期花芽的蛋白质组变化.在花穗叶片尚未展开期(Ⅰ期)共检测到1 012个蛋白点,花穗叶片展开但未转绿期(Ⅱ期)1 034个蛋白点,花穗叶片转绿期(Ⅲ期)1 098个蛋白点.发现19个差异表达的蛋白质,其中15个上调表达,4个下调表达.经MALDI-TOF-TOF/MS质谱分析和蛋白质数据库检索,有11个差异表达的蛋白质得到鉴定,分别为异黄酮还原酶相似蛋白(No.1)、二硫键异构酶前体相似蛋白(No.2)、拟南芥同源的某未知蛋白(No.3)、脱落胁迫成熟相似蛋白(No.4)、ATP合酶庋腔、真核翻译起始因子(No.9)、DNA结合蛋白MNB1B(No.10)、胞质磷酸甘油酸激酶(No.14)、过氧化物酶(No.16/17)和晚期胚胎丰富相似蛋白(No.19).这些蛋白分别在能量代谢、转录翻译、物质运输、信号转导以及胁迫生理等方面与龙眼成花逆转密切相关.     

龙眼转醛醇酶基因的克隆与原核表达

转醛醇酶作为磷酸戊糖途径非氧化阶段的关键酶,在调节植物PPP对环境胁迫的应答中起重要作用.该研究应用RACE方法克隆了龙眼(Dimocarpus longan Lour.)花芽中转醛醇酶的基因,获得一段长度为1 655 bp的cDNA,其中包括一个1 320 bp的开放阅读框,已登陆GenBank,登陆号为FJ472991(GI:217795375).将转醛醇酶全长cDNA在大肠杆菌中表达,获得一个约55 kD带有组氨酸标签的外源蛋白.RT-PCR结果显示,TAL mRNA在龙眼成花逆转花芽中有较明显的表达量上调,说明TAL在一定程度上影响了龙眼正常成花.     

‘乌叶’荔枝胚胎发育过程特异蛋白的变化

 应用改进的IEF2SDS2PAGE 技术比较分析了荔枝胚胎分化发育过程中蛋白质组分 的变化。结果表明, 大多数蛋白质组分在各发育时期的图谱相似, 但不同发育时期存在变化。 试验共发现了前期鱼雷胚的43. 7 kD、pI 3. 5 和55 kD、pI 9. 4 , 后期鱼雷胚的23. 4 kD、pI 6. 6和25. 1 kD、pI 6. 8 以及前期子叶胚的25. 1 kD、pI 9. 3 和64. 6 kD、pI 5. 9 等6 个新出现的特异蛋白。后期心形胚的图谱上蛋白质点数最多, 可分辨蛋白质斑点数约300 个, 这与蛋白质含量的测定结果一致。以上特异蛋白在多次重复中均显示出良好的重现性。因此认为, 这些特异蛋白在胚胎分化发育中可能起重要作用。     

马蹄金(Dichondra repens Forst.)组织培养和快速繁殖

为了探究马蹄金组织培养及快繁技术,本研究以马蹄金为材料,使用75%的酒精和10%NaClO对不同外植体(胚根,下胚轴,子叶)进行消毒处理,在不同激素浓度配比的MS培养基中进行丛生芽诱导、愈伤组织诱导及分化,成功建立了马蹄金的组培快繁体系。结果表明:利用马蹄金下胚轴为外植体直接诱导不定芽效果较好,其最适程序为:流水冲洗30 min+75%酒精30 s+10%NaClO 9 min,污染率为5%,成活率为75%;下胚轴不定芽诱导的最适培养基为MS+1 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,诱导率为93.55%,出芽指数为8.86;胚根愈伤组织诱导的最适培养基为MS+1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,诱导率为100%,下胚轴愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+1 mg/L NAA,诱导率为95.24%,子叶愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.3 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,诱导率为100%;愈伤组织不定芽分化的最适培养基为1/2MS+1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,芽诱导率为20%,平均芽数为12.83;组培苗诱导生根的最适培养基为不加激素的1/2MS培养基;生根苗以瓶盖全开的炼苗方式移栽到以河沙为基质的育苗盒中成活率为100%,且添加蒸馏水与自来水对植株生长并无明显影响。本研究成功建立了马蹄金组织培养与快繁体系,为马蹄金种质资源改良及优质种苗生产提供了技术参考。     

龙眼成花逆转相关基因表达的cDNA-AFLP分析

摘要：以龙眼正常成花花芽和成花逆转花芽为试材,应用cDNA-AFLP技术,研究龙眼正常成花与成花逆转花芽cDNA的差异表达,并利用RT-PCR技术验证,探讨了龙眼成花逆转的分子机制。通过64对引物组合的cDNA-AFLP分析获得了2 560条扩增片段。选择其中有明显差异的片段进行回收、测序,获得了14条核苷酸序列。其中有13个片段在GenBank数据库中发现同源序列,1个功能未知。通过核酸和氨基酸比对分析,与龙眼成花逆转相关的112基因片段同源于银灰杨（Populus tremula x Populus alba）中编码Nek激酶家族(NIMA related protein kinases)基因（83 ％）, 331的核苷酸序列（80％）同源于与拟南芥（Arabidopsis thaliana）中编码内切-1,4-β-葡聚糖酶(EGases)的基因,313的核苷酸序列（78%）同源于与柑橘（Citrus sinensis）中的几丁质酶（chitinase CHI1）基因。     

普通念珠藻(Nostoc commune Vauch.)藻蓝蛋白的提取

[目的]为普通念珠藻藻蓝蛋白的提取及开发提供试验及理论基础。[方法]以普通念珠藻为材料,比较藻体及细胞的破碎方法、提取液类型及饱和硫酸铵浓度对藻蓝蛋白提取的影响。[结果]结果表明:利用发酵法破碎藻体和细胞,0.05 mol/L的KP缓冲液(pH值7.2)作为提取液,经过30%~50%饱和硫酸铵盐析和DEAE-Toyopeal 650 S离子交换柱层析后,藻蓝蛋白纯度达2.51,最大紫外-可见吸收峰位于616 nm。[结论]普通念珠藻藻蓝蛋白分离提取较为理想的程序为:藻粉→0.05 mol/L KP缓冲液(pH值7.2)浸泡→发酵法破碎细胞→35%~50%饱和硫酸铵盐析→DEAE-Toyopeal 650 S柱层析→较纯的藻蓝蛋白。