禽肉产品中禽流感与新城疫多重PCR-DHPLC检测方法的建立

应用多重RT-PCR反应(mRT-PCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立禽产品中禽流感病毒和新城疫病毒的快速检测方法。以禽流感病毒NP基因和新城疫病毒F基因各设计1对引物,经优化单相RT-PCR(sRT-PCR)反应体系,建立多重RT-PCR(mRT-PCR)同时检测禽流感和新城疫,其PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测分析后,检测极限分别达10-0.5ELD50/0.1mL和10-1.5ELD50/0.1mL。与普通凝胶电泳比较,敏感性高2个数量级。特异性试验表明,mRT-PCR-DHPLC仅检测到禽流感病毒与新城疫病毒,而对其他5种禽类病原体和SPF鸡胚尿囊液均未检测到阳性吸收峰。所建立的方法检测不同亚型禽流感病毒29株、不同来源及不同毒力的新城疫病毒16株,结果与实时荧光定量PCR检测结果完全一致;与病原分离法同时检测人工感染鸡的组织脏器,两种方法检测禽流感的符合率为94.4%(34/36),检测新城疫的符合率为95.4%(21/22)。病原分离法的检出率虽高于DHPLC方法,但经统计学分析两者差异不显著,两种方法同时对27份进口鸡胗样品与90份棉拭子样品进行检测,阴性符合率为100%,可适用于进出口禽肉产品的检测。     

马病毒性动脉炎

一、概述 马动脉炎病毒是一种单股小RNA病毒,为披膜病毒科的瘟病毒属。该病毒主要引起怀孕母马流产,公马感染后很快康复,但成为长期带毒者,并能通过精液传播病毒。该病于1953年在美国的OHIO州的BUCYRUS暴发,DOLL等人从流产为特征的病马中分离到病毒,称为马病毒性动脉炎并定为BUCYRUS株。此后美国的McCollum等用马肾细     

抗草甘膦转基因大豆及加工品LAMP检测研究

将环介导的等温核酸扩增技术应用于转基因大豆及加工品检测.针对抗草甘膦Roundup Ready转基因大豆及加工品外源基因EPSPS设计2对特异性引物进行扩增,成功建立起定性检测转基因大豆及加工品的LAMP检测方法.优化LAMP反应条件,反应温度为65℃,反应时间为1h.结果表明:该体系能快速、灵敏、有效地检测转基因大豆及加工品中整合的EPSPS基因,检测限为0.01%,低于国际现行最低检测量0.5%的要求.检测EPSPS基因操作简单,成本低、特异性强、灵敏度高.LAMP检测结果可信,稳定性好,可对目前批准的抗草甘膦RoundupReady转基因大豆及加工品进行定性检测.     

基于TaqMan探针的虎制品实时荧光定量PCR的特异性鉴定

根据虎线粒体细胞色素b核苷酸保守序列设计引物和探针,建立了一种快速鉴定虎制品的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,5.0×10⁵~ 5.0×10¹拷贝/μL范围内定量PCR均有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为50拷贝/μL。对豹、狮子、猫等7种非虎哺乳动物DNA样本的检测结果均为阴性。本研究建立的实时荧光定量PCR方法具有灵敏度高、特异性和重复性好、方便经济的特性,在虎制品的检测与鉴定中具有良好的应用前景。     

猪流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

本研究选取猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)的NP基因序列设计引物和探针,建立了检测SIV的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有SIV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量PCR反应以确定检测灵敏度。2.0×10⁸至2.0×10²拷贝/μL 7个数量级的范围内定量PCR有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为20个拷贝/μL。根据病毒拷贝数与Ct值的关系绘制了标准曲线。该方法具有特异性,对猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、口蹄疫病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸都没有扩增反应。本研究建立的实时定量PCR方法,灵敏度高、特异性好,可以进行定量分析,在猪流感的快速检测上具有重要意义。     

酶联免疫吸附试验(ELISA)与补体结合试验(CFT)诊断牛亚临床型副结核病的比较与评估

本文对ELISA与标准CFT诊断牛亚临床型副结核病进行了比较和评估。在ELISA试验中,对用草分枝杆菌(MycobacteriumPhlei)和高岭土(Kaolin)上清液预吸收过的牛血清对副结核分枝杆菌粗制抗原(Crude pro-toplasmic antigen简称CP抗原)的抗体活性进行了分析。ELISA抗体滴度用ELISA抗体指数(EAI)表示,EAI=(At-An)/(Ap-An)。At、Ap、An分别表示1∶200未知待检血清,1∶400阳性对照血清和1∶200阴性对照血清吸收值。确定EAI≥0．6为ELISA抗     

鸵鸟异物性肺炎

鸵鸟异物性肺炎朱来华梁成珠马佐喜徐彪朱咏梅陈净吴德茂（青岛动植物检疫局１９９６年１１月山东某鸵鸟场一只进口种用母鸵鸟，因外伤而卧地不起，后灌药（抗生素）治疗不当，鸵鸟吸入异物引起异物性肺炎，病程２个月，最后衰竭而死。１临床症状临床可见慢性进行性消瘦，...     

马疱疹病毒1型gD基因主要中和抗原区在大肠埃希氏菌中的表达

利用PCR技术扩增马疱疹病毒1型（EHV-1）gD基因主要中和抗原编码区,将其克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,获得的重组质粒pGEX-EHV-gD用IPTG诱导表达.SDS-PAGE电泳分析显示,重组gD蛋白以不溶性包涵体形式表达,与预期大小（43 ku）相符;Western-blotting分析表明,表达产物均能与抗EHV-1和EHV-4阳性血清发生反应.用重组蛋白免疫家兔获得的超免疫血清能中和EHV-1和EHV-4,且中和抗体效价较高,说明原核表达产物具有良好的免疫原性,可以用作ELISA包被抗原或重组基因疫苗.     

马病毒性动脉炎的研究进展

马病毒性动脉炎（EquineViralArteritis,EVA）是马属动物之间通过呼吸道或生殖道传染的病毒性传染病。美国Doll等在1953年在俄亥俄州的Bucyrus地区首次从马流产胎儿中分离出病毒,称为马病毒性动脉炎病毒。该病毒与造成马流产的疤疹病毒具有不同生物学特征。已报道分离到病毒的国家有瑞士、波兰、奥地利、美国、英国、加拿大等,目前分离的毒株有美洲株和欧洲株,其抗原性与Bucyrus的基本一致。该病的传播主要通过呼吸系统和生殖系统,EVAIM床主要特征为：发热,马驹和弱马死亡率高,怀孕母马繁殖障碍;公马感染后康复较快,但成为长…     

应用复合PCR方法检测沙门菌的研究

参照文献报道的沙门菌Repeat se和hisJ基因片段的引物序列，设计并合成了2对引物，对沙门菌属和非沙门菌属的标准菌株及分离菌株进行了复合PCR扩增反应。结果，沙门菌PCR产物均出现199bp与495bp的特异性DNA扩增条带．而非沙门菌均未出现扩增条带，证明这2对引物具有沙门菌属特异性。将提取的沙门菌DNA做梯度稀释，测定该复合PCR体系的敏感度。结果表明，此体系可检出10^3CFU／mL菌液提取的DNA模板。应用上述方法，对进境鱼粉阳性样品进行了检测，均出现阳性结果。本研究表明，复合PCR是一种特异、敏感、快速的沙门菌检测方法，可应用于口岸系统鱼粉、肉骨粉的日常检测。