对虾Taura综合症病毒Taqman实时定量RT-PCR检测方法的建立与应用

建立了Taqman实时定量RT-PCR方法检测对虾的Taura综合症病毒(Taura syndrome virus,TSV).选取TSV基因组的保守序列,利用Primer Express 2.0软件设计引物和探针,扩增产物长度为73 bp.以含有TSV目的扩增片段的质粒为标准品,进行实时定量RT-PCR反应,结果表明质粒DNA在6～6×106个拷贝,共7个数量级的范围内有"S"型扩增曲线.根据病毒拷贝数与Ct值制备了标准曲线,可以用于病毒的定量分析.该方法的检测灵敏度为6个病毒粒子.该方法的重现性好,组内的实验变异系数为0.04%～2.70%,组间实验变异系数为0.92%～4.67%.引物和探针对于对虾基因组RNA、黄头病毒RNA都没有扩增反应,表现出良好的特异性.实时定量RT-PCR检测TSV方法的建立,对于虾病的临床诊断及流行病学研究具有重要意义.     

A型禽流感病毒通用型核酸检测标准样品的研制及不确定度分析

利用基因克隆和体外转录技术,制备A型禽流感病毒通用核酸检测阳性标准样品。根据禽流感基质蛋白基因M的序列,设计全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至pGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准样品候选物。采用实时荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验,并委托外部实验室采用外标实时定量RT-PCR方法对转录的RNA片段进行定值。通过绘制荧光定量标准扩增曲线和协作标定的方式,计算标准物质含量（拷贝）,并进行不确定度的估算。均一性结果显示瓶间差异小于5%,稳定性试验表明室温20~25℃（相对湿度20%~50%）14d,2~8℃3个月以及-20℃保存1年的含量均无明显变化。核酸标准物质定值为（3.120±0.345）×10^8拷贝数,可用作禽流感病毒通用核酸检测的标准质控品。     

无疫小区国际发展概况

受多种重大动物疫病的影响,为保障相关农产品的安全卫生质量,促进动物产品贸易的顺利进行,无疫小区的建立得到了世界动物卫生组织（OIE）及各国政府的认可。本文从无疫小区的概念以及世界各国对无疫小区的研究作一综述。     

马动脉炎病毒血凝抑制试验与微量中和试验的对比研究

195 5年在美国俄亥俄州 Bucyrus地区某牧场的马群暴发急性马病毒性动脉炎 ,主要发生于妊娠母马并引起流产 ,其特征性病理变化为病变器官小动脉膜变性和坏死 [1]。随后 Doll等从流产的胎儿组织中分离出病毒 ,并命名为马动脉炎病毒 (EquineViral Arteritis,EAV) ,后该分离株 (Bucyrus株 )被称为马动脉炎病毒的原型病毒。目前 ,从血清学调查来看 ,该病分布于世界各国 ,严重影响养马业的发展 ,甚至造成严重的经济损失 [2～ 4 ]。马动脉炎病毒是一种有囊膜的负链 RNA病毒 ,在分类上与猪繁殖与呼吸综合征病毒 (Porcine Reproductive andResp…     

马动脉炎病毒血凝抑制试验研究及其应用

用马动脉炎病毒（EAV）免疫SPF豚鼠，4周后采血做血凝抑制试验（HI），其抗血清可以抑制血凝抗原对小鼠红细胞的凝集反应，抗原和抗血清在4℃感作24h后可以检测到最高的HI抗体效价，同时结果显示HI抗体与中和抗体产物呈正相关。对561份来自新西兰、吉尔吉斯、沙特阿拉伯及内蒙古、新疆的马血清用HI试验和微量血清中和试验（NT）进行EAV抗体检测，HI和NT阳性符合率为94．7％，血凝抑制抗体与中和抗体效价呈显著的正相关。     

猪流感病毒山东分离株H1N1亚型HA基因的克隆与序列分析

采用RT-PCR技术对分离的H1N1亚型猪流感病毒的HA基因进行了扩增,将获得的PCR产物与pMD18-T载体连接,进行序列测定.同源性分析结果表明.分离毒株与其他H1N1亚型猪流感病毒的HA基因核苷酸同源性为70.7%～90.8%,与A/swine/Zhejiang/1/2007的同源性最高,与其他毒株的同源性相对较低.系统进化树分析结果表明.山东分离株的HA基因与欧洲谱系猪流感病毒进化关系最近,证明该分离株可能来源于北美谱系和欧亚谱系猪流感病毒的重组.     

幼鸵鸟肠炎

幼鸵鸟肠炎马丰忠梁成珠徐彪朱来华马佐喜（青岛动植物检疫局２６６００２）幼鸵鸟肠炎是由多种因素引起的肠道炎症，表现为腹泻、腹痛、脱水、精神不振，６周龄以内的鸵鸟最易发生。该病分为原发性肠炎和继发性肠炎。１病因１．１营养因素鸵鸟对某些饲料消化不良，尤其是...