H5亚型AIV的HA1基因与鸡IL-18成熟蛋白基因的杆状病毒共表达载体的构建

参考GenBank上发表的H5亚型禽流感(AIV)血凝素(HA)基因序列及鸡白细胞介素18成熟蛋白(mChIL-18)的cDNA基因序列,分别设计了HA1和mChIL-18的cDNA的2对引物。然后以pMD18-T-HA质粒和pGEX-mChIL-18质粒为模板,扩增出了H5亚型AIV的HA1基因和mChIL-18的cDNA片段。再以杆状病毒pFastBacTM dual为载体,将H5亚型AIV HA中的HA1基因和mChIL-18基因分别插入到双表达载体pFastBacTM dual的p10启动子(PP10)和多角体蛋白启动子(PPH)的下游,构建携带HA1基因和mChIL-18基因的重组pFastBacTM dualH-A1-mChIL-18真核表达质粒。最后将构建的真核表达质粒转座入大肠杆菌DH10Bac,为下一步进行昆虫细胞的转染奠定了基础。这个重组载体的构建为考察mChIL-18作为免疫增强剂的作用及下一步AIV疫苗的研究奠定了坚实的基础。     

进境种猪繁殖与呼吸综合征病毒的快速检测

采用ELISA方法对812头份进境种猪血清进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体检测,结果发现编号213的血清呈阳性反应,其余呈阴性反应。对213号血样进行实时荧光RT-PCR扩增和凝胶RT-PCR扩增,结果显示荧光RT-PCR扩增呈阳性,凝胶RT-PCR扩增获得374 bp大小特异性片段,与已知的美洲株片段大小相符。该研究建立的先采用ELISA法检测血样,对可疑或阳性样本提取总RNA后进行荧光RT-PCR和凝胶RT-PCR的检疫模式,为PRRSV的快速检测和鉴定提供了新的技术手段,可满足大批量进境种猪快速检疫的需要,同时,该模式的建立,也为其他疫病的检疫提供了借鉴。     

一步法RT-PCR快速检测鸡新城疫病毒强毒株

本文参照NDV融合蛋白(F)基因序列设计引物，通过一步法RT-PCR扩增到NDV强毒株的170bp大小的特异条带。试验中未检出NDV弱毒株、IBV、AIV、IBDV的RNA，能够检出NDV尿囊液毒的最低滴度为10^-5稀释度(相当于10^3.7EID50病毒量)。对山东省不同地区于1997至2003年所分离的21个NDV强毒株检测全为阳性，而6个NDV弱毒株全为阴性。整个实验操作从病毒核酸提取到判定结果，在5h内即可完成。实验结果表明，该方法特异、敏感，适用于NDV强毒感染鸡群的快速检测。     

出口禽肉风险分析研究

根据我国近十几年出口禽肉发生的有关案例与各主要进口国的兽医卫生要求，依据《国际动物卫生法典》的有关规定，对影响我国出口禽肉安全卫生质量的家禽疫病病原、各种食源性致病菌、农兽药物残留、放射性残留等因素进行风险分析，确定影响出口禽肉安全卫生的关键因素，由此制定保障出口禽肉安全卫生的管理措施。这是我国首次对出口禽肉进行风险分析研究。     

荷斯坦奶牛脊椎畸形综合征PCR-DHPLC检测方法建立与应用

为建立一种快速高通量的荷斯坦奶牛脊柱畸形综合征(Complex vertebral malformation,CVM)变性高效液相色谱(DHPLC)的分子检测方法,根据CVM是由于SLC35A3基因第4外显子559位处发生G→T突变的遗传学基础,设计了1对引物对3种不同基因型的基因材料PCR扩增,利用Navigator软件分析确定检测温度、洗脱浓度及梯度等条件,建立检测方法。对55份进境荷斯坦奶牛血样进行检测,发现有1例为隐性基因携带者,将PCR产物送测序,结果与DHPLC检测结果一致。研究表明,PCR-DHPLC是一种可有效用于荷斯坦奶牛脊椎畸形综合征检测的新方法。     

基于量子点标记技术的鸡新城疫病毒sFLISA检测技术研究

本研究建立了基于量子点的鸡新城疫病毒(NDV)sFLISA检测方法。该方法以抗NDV多克隆抗体为捕捉抗体、以生物素标记抗NDV单克隆抗体为检测抗体、以量子点标记的链霉亲和素为荧光探针。该方法与其它有关禽类病毒(产蛋下降综合征病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、禽白血病病毒)无交叉反应,比血凝试验灵敏,为临床早期快速检测NDV提供了行之有效的方法。     

马鼻肺炎的检疫

马鼻肺炎(Equine Rhinopneuminitis，ER)，是马的一种急性、发热性传染病的统称，病原为马疱疹病毒Ⅰ／Ⅳ型(Equine Herpesvims 1／4。EHV1／4)。临床症状表现为呼吸道疾病，头部和上呼吸道粘膜卡他性炎症以及白细胞减少；神经性疾病后肢共济失调和虚弱。妊娠母马感染本病时，易发生流产；新生马驹发生肺炎或脑脊髓炎。     

在进口塞马中检出马病毒性动脉炎病

１９９５年１０月，新疆喀什某公司从吉尔吉斯进口６匹赛马，根据条款进行了马病毒性动脉炎应用微量中和试验检查，发现５匹马血清ＥＡＶ抗体阳性，抗体从１：８－１：３２。而条款要求ＥＡＶ血清抗体滴度１：４为阳性。