猪戊型肝炎病毒双重RT-PCR检测诊断方法的建立及其应用

猪戊型肝炎(HE)是近年来颇受人们关注的一种人畜共患传染病.人普遍易感.急性戊型肝炎病情较重,病死率为2.5%,明显高于甲型(0.1%)和乙型(0.9%)肝炎,孕期妇女死亡率可高达15%～20%[1],尤其是怀孕最后3个月的孕妇病死率更高.1986～1988年我国新疆南部地区曾发生HE水源性大流行,共计有119 280人发病,死亡707人,是迄今世界上最大、最严重的一次戊型肝炎流行[2].     

猪繁殖与呼吸综合征研究进展

猪繁殖与呼吸综合征是目前养猪业中一种严重的病毒性传染病,分布广泛且对养猪业造成巨大损失.本文就病毒的病原学,病毒的基因变异,流行病学及其致病机制,临床症状及病理变化,诊断防制及疫苗研究作一综述.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GS株结构蛋白基因的克隆及结构特征分析

根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)VR-2332毒株基因序列设计合成了6对引物,应用RT-PCR方法对PRRSVGS株部分片段进行基因的扩增、克隆和测序,将测序结果应用Blast和DNAStar软件进行拼接,并与国内外分离毒株进行核苷酸以及推导氨基酸序列同源性比较.结果发现PRRSVGS毒株结构蛋白基因全长3819bp,包括ORF2、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7共6个阅读框,分别编码GP2、GP3、GP4、GP5、M和N蛋白;与BJ-4、CH-1a、HB-2(sh)/2002和VR-2332美洲株等核苷酸的同源性在87.9%～97.1%,推导的氨基酸同源性在88.3%～97.1%;而与LV和Euro毒株的同源性差异显著,核苷酸同源性在56.0%～70.0%,氨基酸同源性在54.9%～77.6%.构建的系统发育树证明该毒株在基因型上属于美洲型.     

猪链球菌2型mrp基因ORF1序列的克隆及原核表达

根据猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白基因（mrp）的序列,设计并合成了1对特异性引物,以青海株的基因组DNA为模板扩增了mrp基因ORF1序列。将PCR产物进行了T/A克隆,转化大肠杆菌,鉴定成功获得目的片段后,将其定向亚克隆到pET-28a（＋）中,构建了原核表达质粒pET-28a-mrp,并将其转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,经1 mmol/L IPTG诱导和SDS-PAGE分析,出现了与预期目的蛋白一致的外源蛋白带（27.0 ku）。Western-blot分析表明,该融合蛋白具有MRP的抗原表位。研究结果为今后开展该病的免疫学研究奠定了一定基础。     

亚洲1型口蹄疫病毒反义核酸双向表达载体的构建

用RT-PCR法得到针对FMDV基因组5′非编码区反义基因片段及P12A结构蛋白基因和3C蛋白酶,分别克隆到T载体,测序分析正确后,再将它们分别亚克隆到逆转录病毒载体pQCXIX的克隆位点Ⅰ和Ⅱ中,经酶切和PCR鉴定与测序分析,表明目的基因已正确插入表达载体,构建成了口蹄疫双向表达载体pQC-AS-P12A3C。     

鸡传染性法氏囊病蜂胶灭活苗的研究：疫苗制造安全性与免疫效力试验

用分离自甘肃兰州和天水的鸡传染性法氏囊病病毒Ｌ２株和Ｔｓ株，以对倍的蜂胶水乳剂为佐剂，制备鸡传染性法氏囊病蜂胶灭活疫苗。用该苗０．５ｍｌ接种５日龄或７日龄雏鸡，免疫后２１天ＡＧＰ抗体阳性率可达５０％－６０％；免疫后２８天，ＡＧＰ抗体阳性率可达１００％。用该苗１ｍｌ免疫产蛋鸡，免疫后２１天ＡＧＰ卵黄抗体效价可达１：６４以上。     

狂犬病的分子生物学诊断

从攻击咬伤人并致其死亡的犬脑组织中提取总RNA，用特异性引物通过反转录聚合酶链反应(RT—PCR)获得了长度约为1423bp的核酸片段，与预期的片段大小相符；将扩增产物连接到pMD18-T载体中，转化大肠埃希氏菌JM109，筛选氨苄青霉素抗性菌落，提取质粒，经酶切鉴定、PCR分析及测序，证明所克隆的1423bp片段含有完整的狂犬病病毒N基因，与国外参考毒株的序列相比同源性较高，从而做出正确的诊断。试验表明，用RT—PCR技术检测狂犬病病毒灵敏度高、特异性强，适合于实验室应用。     

家蚕杆状病毒表达系统及其在口蹄疫疫苗研究中的应用

口蹄疫(Foot and mouth disease,FMD)是由FMD病毒(FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性人兽共患传染病.世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须通报的动物传染病,我国将其列为一类动物传染病.该病传播途径多,传播速度快.目前除了北美、澳洲等地区外,世界范围内多次暴发流行.最近几年,一些已经消灭FMD的国家又再次爆发,FMD防制形势依然严峻.在FMD防制中,加强流行病学监测和采取疫苗免疫是防制其发生的主要措施和关键环节.因此,特异性诊断抗原的制备和新型疫苗的开发就显得尤为重要.     

口蹄疫病毒3C蛋白酶的结构及功能研究进展

口蹄疫病毒能引起牛、羊等偶蹄动物发生高度接触性的传染病口蹄疲,该病常常影响着全球畜牧业的发展.FMDV是小RNA病毒科口蹄疫病毒属的成员,口蹄疫病毒为单股正链RNA病毒,病毒基因组全长约8.5 kb,基因组分为5'非编码区、3'非编码区和一个开放阅读框(ORF).基因组的中部是一大的开放阅读框,编码一多聚蛋白,多聚蛋白在翻译的同时,经二级裂解后,形成3种病毒结构蛋白(VP0,VP3和VP1)和8种非结构蛋白(L,2A,2B,2C,3A,3B,3C和3D).其中3C全长639 bp,编码213个氨基酸.3C蛋白酶是小RNA病毒的共同裂解酶,在多聚蛋白成熟过程中起着极为重要的作用,且在抗病毒药物打靶方面具有一定研究价值.因此,对3C蛋白酶的结构及功能研究进展进行综述很有必要.     

狂犬病毒CVS株G基因和IFN-a基因共表达重组腺病毒载体的构建

通过RT-PCR方法扩增得到狂犬病毒G基因,PCR方法得到IFN-Αa基因并亚克隆入pIRES获得pIRES-a质粒.双酶切G基因和pIRES-a质粒并回收目的基因与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接,再与pAdEasy-1质粒在BJ5183菌中同源重组产生腺病毒载体质粒.线性化后的重组腺病毒质粒转染人胚肾293细胞,通过观察报告基因绿色荧光蛋白的表达鉴定重组的腺病毒.结果表明:该重组病毒质粒经酶切鉴定与预期结果一致;转染293细胞后观察到绿色荧光蛋白的表达,说明成功构建了G和IFN-a双基因共表达重组腺病毒载体.