尾蚴抗原特异性的T细胞克隆的建立及其功能测定——Ⅱ.T细胞克隆的功能测定

从早期感染曼氏血吸虫的C_(57)BL/6小鼠纵隔淋巴结细胞建立七株T细胞克隆。H~3-标记的淋巴细胞转化实验显示可溶性曼氏血吸虫尾蚴抗原、ConA和重组的人IL-2可促进这些T克隆细胞增殖,可溶性曼氏血吸虫虫卵抗原、成虫抗原及非特异性抗原PPD、纯化的老鼠IL-4均不起作用;体外实验显示T克隆细胞可诱导和增强对血吸虫尾蚴抗原特异性的肉芽肿反应;体内实验证实它们可调节血吸虫尾蚴抗原特异性的迟发型超敏反应。本文的结果为加深理解血吸虫病的免疫机制提供了一些实验依据。     

日本血吸虫新基因SjPP的筛选、克隆及对小鼠的免疫效果

【目的】筛选克隆东方田鼠血清识别的日本血吸虫靶抗原基因，并研究其免疫保护效果。【方法】利用东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫（中国大陆株）成虫cDNA表达文库获得阳性克隆，以5′ RACE技术扩增获基因全长序列，构建含目的基因的核酸疫苗并研究在小鼠中的免疫保护效果。【结果】（1）获得4个日本血吸虫新的EST序列，即mfs-1（GenBank登录号BE974942）、mfs-3（GenBank登录号BE974944）、mfs-4（GenBank登录号BE974945）和mfs-5（GenBank登录号BE974946）。（2）mfs-5进行全长序列克隆，获得的日本血吸虫新基因SjPP(GenBank登录号AY902477)长1311 bp, 编码302个氨基酸，理论分子量为34.7 kD，等电点为5.51；其氨基酸序列具有丝/苏氨酸蛋白磷酸酶（serine/threonine specific protein phosphatase，简称PP）的保守序列LRGNHE，并且含有该酶特异性抑制剂冈田酸的作用位点SAPNYC，与人的PP6、鼠PP6、果蝇PPⅤ等蛋白的氨基酸序列具有高度同源性，分别达72%、70%和70%。（3）成功构建核酸疫苗pCMV-Script／SjPP，免疫BALB/c小鼠诱导产生肝组织减卵率为23.91%，粪便减卵率为31.91%。【结论】（1）获得日本血吸虫新的抗原基因SjPP。（2）含SjPP基因的核酸疫苗在小鼠中诱导了部分免疫保护效果。     

一例山羊暴发多种寄生虫混合感染及其防控思考

近年来,上海某羊场饲养的山羊先后暴发疾病,造成较严重的死亡和较大的经济损失,其中成年山羊的死亡率达8.67%～13.23%,羔羊的死亡率高达27.52%～48.13%。经流行病学调查、临床症状观察、病理学检测和实验室病原学诊断,确诊为多种寄生虫混合感染。通过采取综合防控措施,控制了病情,     

银染mRNA差异显示法克隆柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)抗药性相关基因

以柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）敏感株、地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株孢子化卵囊为材料，用银染mRNA差异显示方法筛选和克隆与球虫抗药性相关的基因。首先提取这3个虫株孢子化卵囊的总RNA为模板．用Oligo（dT）12GG为锚定引物和2个10碱基随机引物组合进行RTPCR，产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染。分别切取5务差异条带，进行2次PCR扩增，产物回收后与PGEM—T—easy Vector连接转化。经PCR鉴定正确后，再进行斑点杂交试验、序列分析和同源性比较。结果发现，地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株分离的差异片段中都有2个cDNA片段（可能为新的基因片段），这为克隆全长cDNA和探索球虫抗药性产生的分子机理奠定了一定的基础。     

中国家畜血吸虫病防治

本文对家畜血防在中国血吸虫病防控中的作用与地位、家畜/农业血防发展历程以及中国血吸虫病防治科研进展、面临的主要难点与挑战等方面进行了论述,并对今后家畜血防工作提出了建议。     

日本血吸虫精氨酸酶的克隆表达及酶活性分析

为解析日本血吸虫精氨酸酶的功能,本研究克隆了SjARG基因、长度为1095 bp,并将该基因克隆一到原核表达载体pET-28a,获得重组质粒pET-28a-SjARG,并在大肠杆菌中成功表达,Western blot显示重组蛋白具有良好的抗原性;通过酶活性分析显示,重组蛋白SjARG在添加Mn2+后活性得到提高,酶活性大小为502 U/mg,Km值为82.7mM。该研究结果为进一步深入研究该基因的表达特性、酶学性质以及候选疫苗分子研究方面提供了基础。     

日本血吸虫mago nashi基因的克隆表达及其功能研究

以日本血吸虫18 d虫体的cDNA为模板,PCR获得影mago nashi编码基因的全长cDNA,其开放阅读框为441 bp,将该序列提交至NCBI,登录号为GQ403668;应用荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况.结果表明:该基因在不同发育阶段均有表达,在13日龄童虫表达量相对最高,3...     

东方田鼠IgG和IgG3对日本血吸虫抗原反应特性的研究

本文对东方田鼠(Microtus fortis)总IgG和IgG3对日本血吸虫抗原的反应特性进行了研究.纯化东方田鼠IgG,用间接ELISA法检测不同浓度东方田鼠总IgG和IgG3对日本血吸虫童虫可溶性抗原(soluble schistosomula antigen,SSA)、成虫可溶性抗原(soluble adult worm antigen,SWA)、虫卵可溶性抗原(soluble egg antigen,SEA)、童虫不可溶性抗原(insoluble schistosomula antigen,ISSA)、雄虫不可溶性抗原(insoluble male worm antigen,ISMA)、雌虫不可溶性抗原(insoluble female worm antigen,ISFA),以及基因工程抗原rSj14、rSj23-HLD、rSJ28GST、rSjPP的反应情况.结果显示,HRP标记免抗东方田鼠IgG抗体和羊抗小鼠IgG3抗体作为二抗,A值变化规律一致.该结果显示东方田鼠总IgG和IgG3与日本血吸虫抗原可能存在非特异性反应.     

日本血吸虫还原性辅酶I(SjNADH)基因的克隆表达及其免疫保护效果分析

为了评估日本血吸虫还原性辅酶I(SjNADH)在小鼠体内诱导的免疫保护效果,应用PCR获得SjNADH基因片段,其开放阅读框为474 bp,编码157个氨基酸,并在大肠杆菌中成功表达,纯化得到该重组蛋白。Western blot结果显示,SjNADH在日本血吸虫童虫和成虫中的表达量稳定,SjNADH融合蛋白也能被免疫血清识别,具有较好的免疫原性。应用重组蛋白免疫小鼠能诱导产生较高的特异性抗体水平,并诱导了20.13%的减虫率和23.06%的肝脏减卵率。结果表明,获得的SjNADH重组蛋白在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护,有作为血吸虫疫苗候选抗原分子的潜力。     

农业部家畜血吸虫病流行病学观测点2011年观测结果情况

2011年对8个家畜血吸虫病观测点血吸虫感染、野粪污染情况以及螺情进行了调查.全年共检测了21091头牛、1425只羊以及1760头(匹)其他家畜,血吸虫病感染率分别为0.42％、0.63％和0％.在97头(只)感染家畜中,90.72％(88头)为牛,9.28％(9只)为羊.江西省吴城镇和湖南省南大膳镇的牛血吸虫感染率超过4％.在湖南省和江西省的观测点中发现家畜粪便有血吸虫虫卵污染,其中96.15％阳性野粪为牛粪.所有观测点都有钉螺分布,但阳性钉螺主要分布在湖南省和江西省的观测点.观测结果显示湖南省洞庭湖和江西省鄱阳湖地区是目前防控家畜血吸虫病的重点地区,且病牛依然是血吸虫病疫区(尤其是湖沼型地区)的主要传染源.