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【目的】构建不同组成型启动子的乳酸菌表达载体系统,评价不同启动子驱动外源基因表达的活性,筛选出强表达的启动子,为后续研究乳酸菌作为活菌载体表达外源抗原或功能性蛋白提供理论依据。【方法】以大肠杆菌-乳酸菌穿梭载体pPG为骨架,将表达载体中启动子序列分别替换为组成型强启动子Pldh、PHH和Phce,利用PCR方法扩增报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和氨苄青霉素抗性基因(Ampr),并在下游多克隆位点中分别插入荧光素酶(LUC)、EGFP和Ampr报告基因,构建9种乳酸菌表达质粒,电转入副干酪乳杆菌HLJ-27感受态细胞,筛选获得9株重组乳酸菌。通过实时荧光定量PCR检测报告基因在重组菌中的mRNA转录水平,利用Western blotting和间接ELISA检测蛋白的表达量,并检测表达蛋白的活性,以评估3个启动子的活性强弱。【结果】PCR成功扩增出大小约720 bp的EGFP基因和850 bp的Ampr基因。Western blotting结果显示,在9株重组乳酸菌中,分别成功表达出了58 ku的LUC蛋白、26 ku的EGFP蛋白和28 ku的Ampr蛋白。实时荧光定量PCR和间... 相似文献
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挑选繁缕嫩梢,就其速冻保鲜工艺进行了研究,以期为繁缕嫩梢产业化发展提供科学的试验理论依据。试验结果表明:在烫漂温度为(98±2)℃、时间为45~55S及预冷温度为4~6℃、时间为12~13min的工艺条件下,能有效地保证繁缕嫩梢品质特征和风味特性,进而提高产品的附加值。 相似文献
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为探究高寒草甸不同退化程度生态系统多功能性的变化,本研究综合考虑了植物物种多样性和多种生态系统功能如生产力、养分循环和固存能力、土壤涵养水分能力等,运用降维因子分析的方法计算了生态系统多功能性,综合分析了植物物种多样性与生态系统功能和多功能性间的关系。结果表明:高寒草甸退化显著降低了Margalef指数、Shannon-weiner指数、Simpson指数和Pielou指数(P<0.05),各生态系统功能趋于恶化。高寒草甸退化导致生态系统多功能性的下降,综合统计量结果为轻度退化(21.9955)>中度退化(8.7295)>重度退化(—30.7245)。植物物种多样性与生态系统多功能性之间均存在正相关关系,其中Simpson指数与生态系统多功能性指数拟合的结果最好,说明高寒草甸生态系统多功能性受植物物种多样性的制约。本研究可为青藏高原草地退化及恢复的过程和机理研究提供理论依据。 相似文献
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喷钙与1-MCP处理对提高猕猴桃耐贮性的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
对“丰悦”“沁香”猕猴桃果实进行采前喷钙、喷GA(赤霉素)、喷锰,采后1—MCP(1-甲基环丙烯)处理,试验分析了其生理指标变化。结果表明:喷钙与1-MCP处理均能降低果实软果率、延缓果肉硬度和VC含量下降速度,同时能延缓淀粉酶活性的增加;喷钙结合1-MCP处理能降低淀粉酶活性峰值;采后使用1-MCP处理能显著降低果实内源乙烯释放量,降低乙烯释放高峰峰值,延缓呼吸高峰到来。试验分析发现,以采前喷钙和GA并结合采后1-MCP处理对提高猕猴桃果实的耐贮藏性效果最好。 相似文献
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采用正交设计法分别用乙醇回流法和冷浸法提取胜红蓟黄酮类物质,以芦丁为对照作标准曲线,通过紫外分光光度计检测考察提取的胜红蓟总黄酮的量,确定最佳的提取工艺为乙醇冷浸法A2B3C1D2,即乙醇浓度为60%,提取时间为24 h,提取次数为1次,料液比为1:30。 相似文献
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<正>农机安全生产事关国家和人民群众生命财产安全,事关农村经济健康发展、事关社会稳定以及党和政府的形象。近年来,拖拉机、变型拖拉机已成为盘江镇农村的主要运输工具。这对促进城乡物资交流,加快农村经济的发展起着举足轻重的作用。但是,随着其数量大幅度地增加,拖拉机违章载客现象屡禁不止,挂照率、持证率、年审率以及车辆完好率逐年下降。使我镇的拖拉机运输秩序混乱,无法保证红车的正常运营,干扰了农村经济发展的正常秩序。在这种不公平的竞争下,红车被 相似文献