汽车电器设备理实一体化教学改革与探索

为适应现代社会人才培养需求、培养出适合社会发展的现代技术人才,根据职业教育特点提出了以改善教学内容、改建实践平台、改变考核方法为核心的理实一体教学模式。汽车电气设备是汽车检测与维修专业的重要专业课程,其理论性和实践性强。通过课程改革,证实理实一体化教学符合职业教育的规律和特点,是一种成功的教学方法。     

黑曲霉发酵柑橘皮产蛋白工艺优化研究

为了改善柑橘皮的营养价值,试验以粗蛋白提高幅度为衡量标准,采用单因素试验设计探讨黑曲霉发酵柑橘皮的最适宜发酵时间、接种比例、底物组合以及水的添加量。结果表明:当底物红薯与柑橘皮添加比例为1∶1,加水10 mL,接种10%的黑曲霉孢子悬液,发酵第4天时发酵产物的粗蛋白含量最高(8.23%),较发酵前提高了41.17%;发酵产物的粗脂肪含量从1.71%提高到2.13%,提高了24.56%。说明通过黑曲霉固态发酵可以增加柑橘皮的粗蛋白含量。     

1株猪腺病毒3型的分离培养及其fiber蛋白多克隆抗体的制备

本研究旨在对临床1份腹泻病料进行病原的分离培养并探究该病原编码的主要抗原蛋白的生物学特点。采用巢式PCR检测病料猪腺病毒3型（Porcine adenovirus type 3,PADV3）核酸并进行病毒分离培养,采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法（IPMA）进行病毒血清学鉴定,PCR扩增fiber基因,将其ORF区克隆至pET-28a（+）载体并转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,IPTG诱导重组fiber蛋白表达,采用SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白,将纯化的重组蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体并测定抗体免疫活性。结果表明,病料为PADV3核酸阳性,感染ST细胞产生典型的"葡萄串"细胞病变效应（CPE）,P5~P11代次中的PADV3核酸稳定,分离的毒株P5代为PADV3型血清学阳性,fiber基因开放阅读框（ORF）为1 296 bp（GenBank登录号：MT774498）,与PADV3毒株的核苷酸相似性最高（86.1%）,与其他毒株相似性均低于40%;原核表达的重组fiber蛋白分子质量为45.2 ku,fiber蛋白多克隆抗体与PADV3感染的细胞呈特异性的细胞核染色。本试验成功分离得到1株PADV3毒株,命名为PADV3-HY1812,所制备的fiber蛋白多克隆抗体具有良好的免疫活性。     

海口美孝村古村落防御系统解读

通过对美孝村走访探查,从村落布局、院落格局、历史背景、宗教文化等方面进行研究,推演并还原出美孝村原初村落的可能形态,在此基础上研究其防御系统,发现美孝村古村落在空间上形成了"植物—围墙—村口—石门—道路—院落—建筑"的多方面多层次防御系统。解析美孝村防御系统特点,并探究其形成原因。     

犬冠状病毒S1蛋白特异性小分子抗体Fab的制备

为表达犬冠状病毒(canine coronavirus, CCV)S1蛋白，制备其特异性小分子抗体Fab,为CCV的防治提供新材料。采用PCR扩增CCV S1基因全长及其截短片段，分别克隆到原核表达载体pET28a或pGEX4T-1中，转到BL21(DE3)或Rosetta(DE3)感受态细胞构建重组表达菌株；用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达，通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot鉴定分析重组蛋白；纯化蛋白分别与ISA71AVG或ISA201VG佐剂配伍乳化后制备免疫原，免疫蛋鸡，用聚乙二醇(PEG)沉淀法提取得到CCV S1蛋白的卵黄抗体，通过Western blot检测抗体滴度，用胃蛋白酶水解卵黄抗体制备小分子抗体Fab。结果显示，S1蛋白全长无表达，CCV S1-a和CCV S1-b分子量分别为79 ku和68 ku。在免疫后第35天2种佐剂组的卵黄抗体滴度可达1∶128 000。制备小分子抗体Fab最佳酶切条件为卵黄抗体与胃蛋白酶混合质量比20∶1、pH值4.1、37℃酶切8 h。完整的IgY可以与CCV呈...     

猪圆环病毒2a型和2b型Cap蛋白的原核表达及鉴定

为制备猪圆环病毒2a型（PCV2a）和2b型（PCV2b）Cap蛋白，用生物信息学软件优化PCV2a Cap基因和PCV2b Cap基因密码子、克隆至p ET28a载体中、转化BL21(DE3)、构建重组蛋白表达菌株，通过优化原核表达的温度、IPTG浓度等条件进行蛋白表达，采用SDS-PAGE和Western blot进行蛋白鉴定。结果显示：重组PCV2a-Cap蛋白和PCV2b-Cap蛋白的分子量约为30 k Da，在不同温度下都以包涵体形式存在，在37℃下以终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导表达的Cap蛋白表达量最高。试验成功制备了PCV2a-Cap蛋白和PCV2b-Cap蛋白，为制备PCV2二价疫苗及其诊断方法的研究提供了基础材料。