山羊c-Myc原癌基因克隆、原核表达和GST-Myc融合蛋白纯化

本研究的目的是通过分子克隆、原核表达和蛋白纯化技术获得山羊GST-Sox2融合蛋白.用RT-PCR方法从山羊(Capra hircus)肠组织克隆了c-Myc基因,通过TA克隆,构建了pMD18-T-Myc质粒.DNA测序证明,山羊c-Myc全长cDNA约1320 bp,该序列包含一个完整的开放阅读框,编码439个氨基酸,经分析该序列与绵羊(Ovis aries)的c-Myc序列同源性为99.2%.将该cDNA片段亚克隆至pGEX-KG载体,构建了重组质粒pGEX-KG-Myc.经酶切鉴定和测序,将重组质粒导入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,由IPTG诱导表达,以谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和纯化GST-Myc融合蛋白.SDS-PAGE分析表明,纯化的GST-Myc融合蛋白约75 kD,与预期值相符,且呈现清晰的单一条带.Western blot检测证实,该融合蛋白能够被GST抗体所识别.本实验克隆了山羊c-Myc基因,获得了高纯度的GST-Myc融合蛋白,为其多克隆或单克隆抗体的制备提供了基础资料,为山羊iPS细胞(induced pluripotent stem cells)检测创造了条件.     

通径分析在水稻辐射育种单株选择中的应用

对５０个ＩＲ１５２９ ６８ ３ ２早熟突变体进行了通径分析,并结合辐射诱变品种实际选育结果,对通径系数在突变单株选择中的应用价值加以论证,指出了通径分析不仅能够用于确定优良单株的选育方向,而且可提高单株选育效率。     

对我国粮食安全与可持续发展的思考

粮食安全问题一直是全社会关注的重大问题。随着国内经济转型和经济发展,城市化、工业化的推进,开发力度不断加大和人均收入的增长及生活方式的变化,导致的粮食需求增加及土地、劳力、资本、技术等生产要素的转移,使我国粮食安全面临严峻的挑战。应对挑战,要从以下六个方面入手:一是发展低碳农业;二是稳定耕地和粮播面积与质量;三是提高种粮比较效益;四是优化粮食产业结构与区域布局;五是加强农田水利基础设施建设;六是加快推进农业科技创新步伐。     

完善我国个人信用制度的建议

我国个人信用制度总体缺失较多,且地区间不平衡,主要表现为缺乏针对个人信用制度专项法律法规和统一的评价标准和操作规范,缺乏个人信用基础信息专业评估机构,信用评估的监督和管理机制不完善。加强个人信用制度建设,建立信用制度基本法与相关法规配套的模式,完善个人信用评估体系等,对于提高个人诚信度,改善和优化信用环境,促进社会经济协调发展具有重要意义。     

广东东江流域村镇饮用水模式及卫生质量现状调查分析

为摸清广东东江流域村镇饮用水卫生安全现状,对惠州、河源和增城地区46个村镇的饮用水模式及水质卫生质量进行了调查分析。结果表明,东江流域村镇饮用水水质较差,水质状况堪忧,井水和山泉水是村镇居民生活饮用水的主要来源,且不具备相应的水质净化设施,水源地周边环境相对较差。水质分析结果显示,80%以上的水样pH偏低、总大肠菌群和菌落总数两项微生物指标超标严重;部分村镇饮用水中铁、锰和砷含量超标,与当地自然地理环境条件有一定关系,而井水硝酸盐污染可能主要来源于附近农田氮肥的淋失。     

信宜市农业生产现状及发展对策

信宜市是广东省50个山区市（县）之一,位于广东省西南部。全市总面积3080km2,总人口133万人,其中农业人口约98．4万人。有耕地3．25万hm2,水田2,43万hm2,山地23-33万hm2。信宜市属南亚热带气候,高温多雨,热量充足,少受台风为害,无霜期300天左右。     

模拟氮沉降对水稻生长、产量及光合特性的影响

田间试验研究4种水平的模拟氮沉降(即N0、N1、N2、N3、N4,施氮量分别为0、3、6、12、24 g/(m2.a)对早稻品种"岳优463"不同生长发育阶段的影响。结果表明,氮沉降对水稻的生长、产量及光合作用有一定的促进作用。经高氮沉降(N4)处理,水稻株高、光合速率在分蘖期分别比对照(N0)增加了45.6%和49.5%,在乳熟期比对照增加了6.4%和28.9%。氮沉降对水稻叶绿素a、叶绿素b和叶绿素(a+b)含量均表现为促进作用。乳熟期N1、N2、N3、N4的叶绿素(a+b)比N0增加了34.9%、51.5%、111.3%和143.6%。中高氮处理(N3,N4)对水稻产量的促进作用较为显著,N1、N2、N3、N4的产量分别比N0增加了1.3%、6.2%、13.0%和42.6%。随施氮水平的增加,秕谷率也增加,而产量指数和籽粒大小呈下降趋势。     

液相阻断ELISA在奶牛A型口蹄疫抗体水平检测中的应用

用液相阻断ELISA(酶联免疫吸附试验)方法对奶牛进行A型口蹄疫抗体水平进行调查,液相阻断ELISA方法在现实应用中对亚洲I型口蹄疫已经成熟,用同样的方法对A型口蹄疫抗体检测,探寻奶牛体内抗体消长规律,制定合理的免疫程序,从而指导奶牛A型口蹄疫的免疫。根据以往免疫经验来看,结果发现90日龄首免后,抗体滴度开始回升,免后21d回升到最高1:324(1:128),之后开始下降,28d后免疫抗体滴度回落至1:204,说明首免抗体维持时间较短,需要进行2免,2免后免疫抗体保护率可维持4个月,再进行3免,抗体滴度又很快回升,且维持较长时间。说明A型口蹄疫间隔28d进行2免,再间隔4个月进行3免,以后每隔4个月免疫1次。适时地加强免疫有利于牛群抵抗A型口蹄疫;FMD疫苗对育成、青年和成年期都有理想的免疫效果。     

牛轮状病毒VP4基因与LTB基因的融合表达及免疫原性研究

PCR扩增轮状病毒VP4基因和大肠杆菌LTB基因编码区,将其克隆至pET32a载体上,构建pET32a-VP4-LTB质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),PCR、酶切鉴定后进一步测序,测序结果表明融合基因片段由2637 bp组成,为编码879个氨基酸残基的多肽。经IPTG诱导和SDS-PAGE检测发现表达产物分子量约为118.9 KD,以包涵体的形式存在。融合蛋白经镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化后免疫小鼠,结果所产生的抗体效价高于单独VP4蛋白的免疫结果但差异不显著(P0.5),但与对照组相比差异显著。表明所表达的融合蛋白具有较好的免疫原性,为研制牛轮状病毒亚单位疫苗奠定了基础。     

牛源金黄色葡萄球菌突变株的筛选、鉴定及其免疫原性的研究

 【目的】诱变牛源金黄色葡萄球菌山东分离株(zfb),筛选、鉴定弱毒性突变株,并研究其在鼠上的免疫交叉保护性。【方法】牛源金黄色葡萄球菌山东分离株zfb,经N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)化学诱变,经生长特性、回复突变、毒力检测、LD50、多种特征性酶检测、小鼠中免疫保护性等实验比较研究了突变株与亲本株的生物学特性,筛选得到遗传性状稳定β－溶血素缺失的弱毒性突变株。【结果】弱毒性突变株Hx与亲本株相比：其β－溶血性状完全缺失,生长缓慢,耐热核酸酶、血浆凝固酶等胞外蛋白的产量减少,在活体条件下可产生荚膜,半数致死量(LD50)10－1.83•mL-1远低下于亲本株的10－4.33•mL-1。亲本株保护检测,免疫接种过的鼠的半数致死量是未接种过的6—50倍。非亲本株保护检测,免疫接种过的鼠的半数致死率是未接种过的5—60倍。【结论】突变株Hx的β－溶血素缺失,毒性减弱,对金黄色葡萄球菌攻击具有较高免疫保护性。