巴什拜羊不同发育阶段骨骼肌中miR-486靶基因的研究

【目的】为了深入挖掘巴什拜羊不同发育阶段骨骼肌中miR-486的靶基因,为最终阐明巴什拜羊优良肉质性状形成的分子调控机制奠定基础,同时为巴什拜羊的持续选育提供理论依据。【方法】分别采集了巴什拜羊胎儿期40,50,60,80,100和120 d,以及出生当天,出生后30,60和90 d共计10个不同发育阶段的骨骼肌组织,分别利用胎儿期6个阶段的混合mRNA和出生后4个阶段的混合mRNA构建了胎儿期和出生后骨骼肌中miR-486调控靶基因的cDNA文库,并利用高通量测序技术对cDNA文库中的靶基因信息进行了深入挖掘。在对所得候选靶基因功能分析的基础上,选择10个候选靶基因,使用qRT-PCR检测其在巴什拜羊上述10个不同发育阶段骨骼肌中表达量的变化,结合课题组前期获得的miR-486在巴什拜羊不同发育阶段骨骼肌中的表达规律,对其靶向调控关系及生物学功能进行初步验证和分析。进而选择其中的4个候选靶基因使用荧光素酶报告载体试验和巴什拜羊骨骼肌卫星细胞中的靶向调控试验最终确认其靶向调控关系。【结果】通过对两个cDNA文库高通量测序数据的分析,胎儿期和出生后分别获得了123个和118个miR-486的靶基因,因其靶向调控关系未经实验验证,故暂称为候选靶基因。其中有96个为两个阶段共表达的候选靶基因,其余27个和22个分别为胎儿期和出生后骨骼肌中特异表达的候选靶基因。GO和KEGG分析结果表明所得候选靶基因显著富集于与肌肉分化和肌纤维发育相关的代谢和信号转导通路,诸如PI3k-Akt、MAPK、Wnt、Adherens junction和Regulation of actin cytoskeleton等。qRT-PCR检测结果表明所选10个候选靶基因在不同发育阶段巴什拜羊骨骼肌中均有表达,但其表达变化规律有所不同。PTEN、Foxo1、Dock3、PAX7、IGF1R、PIK3I1和FBN1在胎儿期巴什拜羊骨骼肌中呈高表达,出生后其表达量显著下调,而OLFM4的表达量则呈相反的变化趋势,ARHGAP5和PDCD4在胎儿期和出生后巴什拜羊骨骼肌中的表达量未见显著变化。对其中4个候选靶基因的进一步试验验证,双荧光素酶报告载体试验结果表明,miR-486可以高效结合在其候选靶基因PTEN、Foxo1、IGF1R和PIK3R1的靶位点上,进而极显著抑制其后萤火虫荧光素酶的活性;巴什拜羊骨骼肌卫星细胞中的靶向调控试验结果亦表明miR-486可以显著下调上述4个候选靶基因的mRNA水平,抑制其生物学功能。所以可以确证在巴什拜羊骨骼肌中miR-486可以靶向调控PTEN、Foxo1、IGF1R和PIK3R1的表达。【结论】对巴什拜羊不同发育阶段骨骼肌中miR-486的靶基因进行了深入挖掘,全面解析了miR-486及其靶基因在巴什拜羊骨骼肌发育过程中参与的生物学过程和信号通路,所得候选靶基因数据可靠性高,可为阐明巴什拜羊优良肉质性状的分子调控机制奠定基础。     

奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定及其药敏试验

<正>乳腺炎是当今困扰乳牛生产的主要疾病之一。据有关资料报道〔1〕,国外乳牛乳腺炎临床发病率约为25%~60%。据我国有关部门不完全统计,我国乳牛乳腺炎发病率达20%~70%,个别牛群发病率甚至更高。乳牛乳腺炎不仅影响产奶量,而且影响乳的品质,甚至危及人的健康。引起乳牛乳腺炎的主要原因是病原微生物感染,其中以金黄色葡萄球     

静脉滴注犬高免血清治疗犬细小病毒病的体会

犬细小病毒病是犬的一种常见传染病,兽医工作者经常在临床中遇到此类病例。在临床治疗过程中,经常使用犬细小病毒高免血清进行治疗,但在给药途径上一般使用皮下或肌肉注射。笔者在多年临床经验的基础上,对10例犬细小病毒病病例采用静脉滴注犬高免血清进行治疗,并分析其治疗效果。     

背膘厚度对约克夏妊娠母猪繁殖性能的影响

为了探讨妊娠母猪不同背膘厚度对其窝产仔数、死胎数和初生窝重的影响,对120头3胎次的约克夏母猪在分娩前进行背膘测定,根据背膘厚度分为薄组(16mm)、适中组(16~22mm)和厚组(22mm)3组,同时记录母猪产仔数、产活仔数、死胎数、死胎率和初生窝重。结果表明,背膘厚度适中组的产仔数11.62头,显著高于背膘厚度薄组产仔数9.83头和厚组9.61头(P0.05);背膘厚度适中组的窝产活仔数为11.62头,显著高于背膘厚度薄组窝产活仔数8.82头和厚组8.00头(P0.05);背膘厚度适中组初生窝重为17.71kg,极显著高于背膘厚度薄组初生窝重14.36kg和厚组12.54kg(P0.01);背膘厚度适中组的死胎数和死胎率分别为0.10头和0.01%均极显著低于背膘厚度薄组和厚组(P0.01)。研究结果表明,妊娠母猪膘情适中对于提高窝产仔数、窝产活仔数和初生窝重以及降低死胎数和死胎率有积极作用,在生产中应积极加强对妊娠母猪的饲养管理,确保妊娠母猪膘情使用,从而提高经济效益。     

影响动物福利的主要因素分析

正国际上公认的动物福利主要是动物享受五大自由:不受饥渴的自由、生活舒适的自由、不受痛苦危害和疾病威胁的自由、生活无恐惧的自由、表达天性的自由。随着社会的不断进步,人们对动物福利的关注日渐增强。动物福利是指动物所处的环境满足其基本自然需求的适应程度。业已证明,如果动物健康、感觉舒适、营     

基于项目化教学的高职畜禽场环境控制课程改革与实践

项目化教学的思想很好地契合了我国高等职业教育的现实需求,近年来在我国高职院校得到了迅速推广,并取得了很好的效果。笔者在前期实践的基础上,以畜禽场环境控制课程为例,从项目化教学课程实施的先决条件、设计理念和思路、教学设计以及效果评价四个方面对该课程项目化教学的实施情况进行了总结,以期促进项目化教学的开展,提高高等职业教育水平,培养出高素质的技能型人才。     

绵羊let-7c前体序列突变及其对前体二级结构的影响

为了研究碱基突变对miRNA成熟加工的影响,以绵羊let-7c(oar-let-7c)为研究对象,探讨了其前体序列在阿勒泰羊和中国美利奴羊(军垦型)群体中的突变情况,及相关突变对oar-let-7c前体二级结构和稳定性的影响。结果表明:oar-let-7c前体序列在阿勒泰羊和中国美利奴羊(军垦型)群体中可检测到1处CT突变,该突变位于oar-let-7c成熟序列下游,且在阿勒泰羊群体中以C等位基因为主,而在中国美利奴羊(军垦型)群体中则以T等位基因为主,该突变改变了oar-let-7c前体二级结构且使其自由能值升高了46.89 kJ/mol,推测该突变将对oar-let-7c成熟加工产生影响,进而影响oar-let-7c在阿勒泰羊和中国美利奴羊(军垦型)体内的水平。     

猪精液常温保存稀释液的应用研究

为了筛选适宜的猪精液常温保存稀释液配方,在对稀释液pH、渗透压及缓冲指数进行理论控制的基础上,设计9个稀释液配方,以进口BTS稀释液为对照,通过分析精液有效保存时间和生存指数筛选出最佳配方,然后进行母猪输精试验。结果表明,稀释液pH、渗透压及缓冲指数进行理论控制方法的准确性分别达到97.1%~99.42%、98.7%~99.68%和98.48%~99.16%,可以满足精液稀释液配方设计的要求。9号极显著地高于5、6、7、8号稀释液(P0.01),稀释液有效保存时间160.8h,生存指数49.46,显著高于8号液(P0.05),极显著高于5、6、7号液(P0.01)。9号液精液有效保存时间、生存指数、母猪情期受胎率和平均窝产仔数分别达到160.8h、49.46、80.5%和9.5头,与进口BTS液差异不显著(P0.05),可用于实际生产。     

一例加菲猫误食尖针的诊治

宠物犬、猫发生胃内异物时,临床上常表现为不饮、不食、呕吐,如果异物未被发现,会发展为排血便、脱水、高烧、精神不振直至死亡。此病主要靠X光诊断确诊,根据胃内异物的情况选择保守疗法和手术治疗方法。X光诊断是确诊此病的主要方法。笔者就一例加菲猫误食尖针的病例进行介绍,供同行参考。1病例介绍奥利奥,黑色雌性加菲猫,2岁,体重2.3 kg。