斑节对虾天门冬氨酸转氨酶基因的克隆及氨氮胁迫条件下的表达分析

为了探索天门冬氨酸转氨酶(AST)在斑节对虾(Penaeus monodon)氨氮(NH3-N)解毒代谢中的作用,该研究利用RACE技术获得了斑节对虾AST基因(PmAST)的cDNA全长序列,进行了相关生物信息学分析,在此基础上采用荧光定量与氨氮胁迫实验的方法研究了PmAST基因在斑节对虾的不同组织以及不同浓度氨氮胁迫过程中差异表达情况。该序列全长1 957 bp,开放阅读框(ORF)为1 242 bp,3'非编码区(UTR)为584 bp,包括含有30个碱基的poly(A)尾,5'非编码区(UTR)为131 bp。ORF可编码413个氨基酸,预测分子量为45.852 kD,理论等电点为8.85。序列含有1个AAT-like超家族结构域、15个磷酸化位点和2个糖基化位点。PmAST的mRNA在斑节对虾各组织中都有表达,在肝胰腺中表达量最高,其次为鳃组织,在胃和脑组织中的表达量最低。96 h氨氮胁迫后荧光定量PCR分析结果表明,PmAST在肝胰腺和鳃组织中都具有不同程度的表达上调,显著高于对照组(P0.05)。研究结果表明斑节对虾的PmAST基因在氨氮胁迫条件下会出现表达上调,并且氨氮浓度越高其上调幅度也越大,所以PmAST参与了斑节对虾的急性氨氮胁迫应答。     

养殖密度对斑节对虾存活·生长和能量收支的影响

[目的]研究斑节对虾（Penaeus monodon）不同养殖密度对其存活、生长和能量收支的影响。[方法]设置养殖密度分别为20、40、80、120、160屋／m^2（相当于20、40、80、120、160万尾／hm^2）的不同试验组,测定斑节对虾在试验条件下存活、生长及能量收支情况。[结果]20尾／m^2情况下对虾存活率最高,160尾／m^2最低,其他3个密度水平存活率差异不显著。湿重特定生长率除20尾／m^2外,随密度增加而下降,160尾／m^2最低。增重量（湿重）与密度的回归关系为：Y=-0．1954In（x）＋1．4132（R^2=0．7268）。生长能占食物能的比例和密度的回归关系为y=-3．2836In（x）＋30．5480（R^2=0．7865）。[结论]该研究从体重生长、能量收支及环境负荷角度探讨了不同养殖密度下斑节对虾生长情况,为斑节对虾的科学养殖提供了依据。     

斑节对虾relish基因的克隆及免疫刺激对其mRNA表达水平的影响

relish是Rel/NF-κB家族的重要成员之一。本研究在构建的斑节对虾(Penaeus monodon)肝胰腺转录组文库中克隆得到PmRelish基因,其全长5 112 bp,包括3 561 bp的ORF,推测编码1个含1 186个氨基酸的蛋白。PmRelish的蛋白具有Rel/NF-κB蛋白家族的典型结构特征,包括N端的RHD结构域,核定位信号,C端的6个锚蛋白重复序列以及死亡结构域,表明该蛋白是NF-κB1亚型。该基因在所检测组织中呈组成型表达,并在血细胞表达量最高。使用定量PCR检测PmRelish基因在不同免疫刺激条件下在肝胰腺中的mRNA表达情况,结果显示,肝胰腺PmRelish基因是诱导型表达,并被创伤弧菌、金黄色葡萄球菌和白斑综合征病毒(WSSV)调控表达,其中被创伤弧菌上调表达最显著。进一步证明了病毒核酸类似物Poly(I:C)、R484可激活PmRelish的表达。上述研究结果说明Relish是斑节对虾的重要免疫因子,可能通过直接或间接作用参与对细菌和病毒的免疫反应。     

5个斑节对虾家系体长和体重的关系

斑节对虾(Penaeus monodon)家系选育不仅包括对生长速度和抗病力的选育,还包括体长和体重的关系等.研究了5个斑节对虾家系(hsy7-7、hsy8-5、hsy10-10、hsy12-13、hsy15-15)体长和体重的关系,通过回归分析,得到5个斑节对虾家系体长(L)和体重(W)的关系式分别为:hsy7-7:...     

低剂量对虾白斑综合征病毒粗提液对斑节对虾体内潜伏期病毒及血细胞的影响

利用含3×103、6×102、2×102copies/mL的对虾白斑综合征病毒(white spot syndromevirus,WSSV)粗提液和PBS液人工注射感染携带病毒量约1×105copies/g的斑节对虾,通过实时定量PCR法、显微镜观察法研究了感染后斑节对虾发病死亡率、肌肉内WSSV含量及总血淋巴细胞数和不同种类血细胞的比例组成变化。结果表明,3种浓度下斑节对虾累积死亡率分别为93.33%±2.89%、56.67%±5.77%和45.00%±5.00%,对照组没有发生死亡。注射3×103copies/mL的浓度组,在注射后30 min时,对虾肌肉内的病毒含量达到最低值(3.54×104copies/g),而后持续上升至48 h时达到最高值(3.12×108copies/g)后再次下降;另两个感染组,在注射后1 h时,肌肉内病毒含量达到最低值(分别为1.11×105、9.54×104copies/g),在感染后6 h时出现一个次高值(分别为1.58×105、1.11×105copies/g),而后又降低,在48 h时达到最高值(分别为1.48×107、5.46×106copies/g)后下降;对照组对虾肌肉内病毒含量没有出现显著变化。不同感染浓度组,斑节对虾总血淋巴细胞数波动幅度和出现峰值的时间不同,特别是注射3×103copies/mL组,对虾总血淋巴细胞数在12和48 h时出现极低值(分别为3.48×106、4.05×106/mL);3个感染组除个别时间点外,对虾总血淋巴细胞数的变化规律与肌肉中WSSV的扩增规律成负相关。4个处理组,半颗粒细胞比例在感染初期呈现明显上升的趋势,后期比例虽有起伏但均维持在较高水平;颗粒细胞和透明细胞比例在感染初期均呈现明显下降的趋势,中期均略有上升,但后期颗粒细胞比例显著低于初期,而透明细胞比例则与初期无显著性差异。     

斑节对虾(Penaeus monodon)卵巢组织石蜡切片自发荧光的研究

[目的]利用卵巢组织石蜡切片自发荧光观察斑节对虾卵母细胞发育.[方法]研究采用普通石蜡切片技术获得斑节对虾发育各期卵巢组织切片,采用苏木青/伊红染色后利用3种自发荧光对卵巢组织切片进行观察,探讨绿色自发荧光下观察卵母细胞不同发育阶段需要的最适曝光时间.[结果]卵巢组织切片直接自发荧光观察卵母细胞的发育较HE染色后观察更为方便、有效,且切片可以继续用于后续试验.3种自发荧光中,绿色自发荧光的观察效果最好.[结论]该研究可为快速观察斑节对虾卵母细胞发育和高效利用试验材料提供了新思路和新方法.     

4 种消毒剂对大珠母贝幼贝的急性毒性试验…

研究了戊二醛、二溴海因、蛋氨酸碘和次氯酸钙等4种消毒剂对大珠母贝(Pinctada maxima)幼贝的急性毒性,结果表明,毒性大小依次为次氯酸钙二溴海因蛋氨酸碘戊二醛,24 h半致死质量浓度(LC50)分别为13.05、27.49、53.20、67.36 mg/L,48 h LC50分别为10.15、9.35、29.27、35.58 mg/L,安全浓度SC分别为1.86、0.32、2.66、7.52 mg/L。分析认为,由于戊二醛毒性相对较小,且在其安全浓度以下可获得较好的消毒效果,因此在大珠母贝幼贝的养殖过程中,推荐使用戊二醛作为常用消毒剂,二溴海因和蛋氨酸碘应谨慎使用,次氯酸钙不推荐使用。     

两种微生态制剂在斑节对虾高密度 养殖中的应用效果

为确定斑节对虾选育中家系幼虾标粗合适的放养密度袁在室内、外分别按200、300、400尾/m2的密度养殖斑节对虾仔虾（PL15）40d,每两天以日投饲量的75%添加糖蜜和两种商品微生态制剂（利生菌王和BZT®碧水）,比较两种微生物制剂对斑节对虾生长和存活的影响及对水质的调控效果。结果表明,随着养殖密度上升袁,室内组和室外应用利生菌王组的斑节对虾特定生长率（SGR）和成活率（SR）呈下降趋势,室外应用BZT®碧水的斑节对虾SGR呈下降趋势,而SR呈先上升后下降趋势。各试验组水体中的氨氮（NH4-N）、亚硝酸氮（NO2-N）、硝酸氮（NO3-N）和磷酸盐（PO43--P）均随养殖时间和养殖密度的增加而升高,其中200尾/m2组各指标最低,400尾/m2组最高。相同密度下,室内应用利生菌王的试验组的NO2-N浓度均低于BZT®碧水组,室内外应用利生菌王试验组的NH4-N浓度均高于BZT®碧水组。     

不同蛋白水平饲料对斑节对虾家系生长及生长相关基因mRNA表达量的影响

研究了选育出的生长速度不同的9个斑节对虾(Penaeus monodon)家系在蛋白含量为34%、38%和42%饲料的饲喂下,其生长、生长激素基因(GH)、组织蛋白酶-L(Cathepsin-L)、胰蛋白酶(Trypsin)等基因的表达量及生长和基因表达量之间的相互关系。结果表明:1)斑节对虾的生长、3种基因的表达量与饲料中蛋白质含量均呈显著的正相关关系(P0.05);2)随着饲料蛋白质含量的增加,不同斑节对虾家系之间的生长差异和3种基因表达量的差异减小,相同斑节对虾家系在不同蛋白含量饲料的饲喂下,其特定生长率和基因表达量均具有显著性的差异(P0.05);3)选育的9个家系斑节对虾的生长在家系和蛋白质含量这两个因素间没有显著性的交互作用(P0.05),但是肝胰腺和肠道中3种基因的表达量在家系和蛋白质含量这两个因素间具有极显著的交互作用(P0.01),其中,饲料蛋白质含量因素对GH和Trypsin两个基因表达量的贡献率是家系因素的1.31~3.66倍,而饲料蛋白质含量因素对Cathepsin-L基因表达量的贡献率是家系因素的0.06~0.54倍。     

复方三氯异氰尿酸对短沟对虾各期幼体的毒性

用静水试验法研究了复方三氯异氰尿酸（TCCA,强氯净）对短沟对虾（Penaeus semisuicatus）各期幼体的急性毒性。无节幼体和涵状幼体试验设6个质量浓度组（0．5mg·L-1、1．0mg·L-1、1．5mg·L-1、2．0mg·L-1、2．5mg·L-1、3．0mg·L-1）和1个空自组,糠虾幼体和仔虾设7个质量浓度组（1．0mg·L-1、1．5mg·L-1、2．0mg·L-1、2．5mg·L-1、3．0mg·L-1、3．5mg·L-1、4．0mg·L-1）和1个空白组,每组3个平行。结果显示,24h半致死质量浓度（LC50）和48h LC50的95％置信区间分别是无节幼体1．47～1．78mg·L-1和1．34～1．46mg·L-1;泾状幼体1．67～1．78mg·L-1和1．23～1．36mg·L-1;糠虾幼体2．05～2．25mg·L-1和1．58～1．79mg·L-1;仔虾3．14～3．38mg·L-1和2．59～2．78mg·L-1。安全质量浓度（SC）分别是无节幼体0．30mg·L-1,溢状幼体0．22mg·L-1,糠虾幼体0．34mg·L-1,仔虾0．55mg·L-1。试验结果可为短沟对虾育苗安全用药提供参考。