用微小隐孢子虫子孢子表面蛋白DNA疫苗免疫小鼠的实验研究

为了探讨微小隐孢子虫子孢子表面蛋白 CP15 / 60重组质粒 pc DNA3 .1- 15 / 60 DNA疫苗诱导机体产生体液和细胞免疫应答的效果。用重组的 DNA疫苗于 BAL B/ c小鼠后腿胫骨前肌肉注射免疫 ,于 0、3、6周共免疫 3次 ,10 0 μg/次。免疫后不同时间检测体液和细胞免疫应答指标。并用 1× 10 6 卵囊进行攻虫试验。结果表明 pc DNA 3 .1- 15 / 60可诱导机体产生相应的特异性抗体 ,对 C.parvum卵囊攻击具有保护作用。微小隐孢子虫子孢子表面蛋白 CP15 / 60重组质粒 pc DNA3 .1- 15 / 60有可能作为侯选的隐孢子虫 DNA疫苗 ,值得进一步深入研究     

猪弓形虫感染免疫胶体金试纸条的制备与初步应用

制备1种检测猪弓形虫血清循环抗原的免疫胶体金试纸条。利用柠檬酸三钠还原法制备40nm的胶体金溶液,标记抗弓形虫表面抗原SAG3(surface antigen 3,SAG3)单克隆抗体(Anti-A-SAG3-7),用另1株抗弓形虫表面抗原SAG3单克隆抗体(Anti-A-SAG3-23)与羊抗小鼠IgG抗体分别包被于硝酸纤维素膜(NC膜)上的检测线和质控线,制备并优化免疫胶体金试纸条检测条件。胶体金溶液的最适pH值为加入4μL 0.2 mol/L K2CO3时的pH值。Anti-A-SAG3-7的最适标记量为12μg。最佳NC膜为Millipore 135。T、C线抗体最佳包被质量浓度均为0.25g/L,T、C线抗体最佳包被体积均为8μL。试纸条的灵敏度达1∶160,与猪囊虫阳性血清无交叉反应。稳定性试验表明,该试纸条置于室温至少可保存1个月有效,置于4℃可保存3个月有效。对广东某地区、吉林某地区猪场的各94份猪待检血清进行检测,分别有17,10份为阳性血清,样品阳性率为18.08%,10.63%。本研究制备的胶体金试纸条具有操作简单,敏感特异等优点,适合临床基层单位对猪弓形虫病的早期诊断及流行病学调查。     

鸡柔嫩艾美球虫子孢子表面抗原基因λMzp5-7在Hela细胞中的表达

将已构建的柔嫩艾美球虫（Eimeria tenella）子孢子表面抗原pMD-Mzp5-7基因片段定向亚克隆到核酸疫苗载体pVAX1上，构建了真核表达载体pVAX-Mzp5-7，酶切鉴定正确后，用脂质体介导的转染法转染Hela细胞，进行了体外表达；并用裸DNA质粒经肌肉接种鸡体内表达。经Western-blotting及RT-PCR鉴定，表明该基因在Hela细胞及鸡体内均获得表达，并有一定的反应原性。     

应用巢式PCR-RFLP方法鉴别我国常见的几种隐孢子虫

应用巢式聚合酶链反应(Nested PcR)-限制片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)方法对微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)、安氏隐孢子虫(C.andersoni)、贝氏隐孢子虫(C.baileyi)和猪隐孢子虫(C.s...     

微小隐孢子虫Cp735基因的克隆及原核表达

采用PCR方法从微小隐孢子虫基因组中扩增cp735基因.与pMD- 18T载体连接后,挑取阳性重组子测序分析.用基因重组技术将Cp735基因克隆入原核表达载体pET-28a中,构建Cp735基因的重组原核表达载体pET28a-Cp735.将pET28a-Cp735在大肠杆菌BL21 (DE3)中诱导表达,并用SDS- ...     

猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究

猪繁殖与呼吸综合征是目前危害养猪业的一种严重的病毒性传染病,文章从猪繁殖与呼吸综合征的病原及生物学特性、基因组结构及变异、分子生物学诊断等方面进行论述。     

犬贾第虫体外诱导成囊形态学变化的观察

为观察犬贾第虫(Giardia canis)滋养体体外诱导成囊过程中的形态学变化,本实验采用TYI-S-33培养基体外纯培养G.canis滋养体,通过改良的TYI-S-33培养基诱导成囊,在0 h、24 h、48 h和72 h对虫体进行观察。结果显示:24 h后虫体开始变圆;48 h后可以观察到虫体鞭毛和吸盘消失,虫体表面出现囊膜分泌型小体,少量虫体被包囊壁包裹;72 h后成囊率最高可达50%。本研究为G.canis成囊方面的研究奠定了基础。     

碘醚柳胺脂质体定向剂绵羊体内的药代动力学及组织残留量的研究

用脂质体包裹抗肝片吸虫药—碘醚柳胺,经改良的冷冻溶融法制备成碘醚柳胺脂质体定向剂(包裹率为58%).给绵羊单剂量皮下注射(0.3mg·kg~(-1),B.W.),用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定该药在绵羊体内不同时间的血浆药物浓度以及组织中的药物含量。结果表明该药的药代动力学符合一室模型,动力学方程为:C=3.1146(e~(0.012t-e~(-1.5155t)).药代动力学参数为:达峰时间(T_(max))为2.81±0.7492d,峰     

四种药物对家兔球虫卵囊排出的影响

观察了两种自拟中药配方以及球痢灵对家兔球虫卵囊排出的影响，并与传统药物氯苯胍作了比较，结果发现四种药物对兔球虫卵囊排出均有一定影响，而中药配方Ⅱ对兔球虫卵囊排出影响较大。另外发现对用药治疗卵囊转阴的兔再接种孢子化球虫卵囊感染未成功，说明感染过球虫的的兔对球卵囊再感染有一定的免疫力。     

火鸡隐孢子虫18S核糖体DNA部分序列测定与系统发育分析

从长春地区鸭的粪便中分离纯化了火鸡隐孢子虫（Cryptosporidium meleagridis）卵囊，根据隐孢子虫18S rDNA基因序列设计合成引物，用PCR扩增了卵囊基因组DNA大小586bp的片段，PCR产物经电泳鉴定后用试剂盒回收纯化，纯化后PCR产物直接测序，将测得的序列用Dnastar软件分析并与国外已发表的相应序列进行了同源性比较，并绘制了系统发育进化树。结果初步建立了火鸡隐孢子虫的PCR检测方法，序列分析显示长春外国语源火鸡隐孢子虫与国外9株隐孢子虫相应序旬同源性在82.7%-99.8%之间，其中与国外火鸡源火允隐孢子虫相应序列同源性为85.3%；与C.felis同源性最低，与C.muris同源性最高。本研究为火鸡隐孢子虫病诊断及该病分子流行病学研究打下了良好基础。