5株水貂阿留申病毒的分离与鉴定

为给水貂阿留申病疫苗的研制奠定基础,对疑似感染阿留申病死亡的水貂内脏处理后,接种猫肾传代细胞（CRFK）分离病毒,并对分离的毒株进行PCR鉴定及动物回归试验。与此同时,首次应用免疫过氧化物酶单层细胞实验（IPMA）对所分离的水貂阿留申病毒进行TCID50的测定。结果成功分离并鉴定出5株水貂阿留申病毒株,分别命名为ADV-DL124、ADV-DL125、ADV-ZJ3、ADV-QD2、ADV-QD3,各分离株的TCID50分别为105.7TCID50/ml、105.0TCID50/ml、104.6 TCID50/mL、105.2 TCID50/mL、104.1 TCID50/mL。动物回归实验显示,所分离的病毒对水貂具有致病性,为水貂阿留申病毒强毒株。     

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的亚细胞定位研究

为深入研究牛病毒性腹泻病毒E_2蛋白的生物学功能,了解其在哺乳动物细胞中的亚细胞定位情况,采用RT-PCR扩增牛病毒性腹泻病毒Changchun184株E_2基因,将其克隆至真核表达载体pc DNA3.1/V5His A中,并进行酶切鉴定和测序分析,将构建的重组质粒pc DNA3.1/V5His A-E_2经脂质体介导转染至MDBK细胞。继续培养48h后,在激光共聚焦显微镜下观察E_2蛋白在细胞中的亚细胞定位情况。结果表明,E_2蛋白在细胞核与细胞质中均有表达,且绿色荧光呈点状均匀分布。该研究为进一步研究牛病毒性腹泻病毒E_2蛋白的相关功能奠定了基础。     

牛病毒性腹泻-黏膜病病毒Changchun184株E2基因在卡介苗中的表达

在成功克隆牛病毒性腹泻一黏膜病痛毒Changchun184株E2基因的基础上,将E2基因与表达载体pMV261连接,构建了重组穿梭质粒pMV261-E2,后电转化到卡介苗中,获得了具有卡那霉素抗性的重组卡介苗,并对重组卡介苗进行菌落PCR鏊定.在45℃下热诱导E2基因在重组卡介苗中的表达,并对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Wesern blotting 分析.结果证明,牛病毒性腹泻-黏膜病病毒Changchun184株E2基因在卡介苗中成功的表达.     

水貂阿留申病病毒VP2截短基因的原核表达

为获得水貂阿留申病病毒G株(ADV-G株)VP2截短基因表达的蛋白,将ADV-G株VP2基因的主要抗原区片段克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,通过不同浓度的IPTG,不同诱导时间以及加入不同的化学分子伴侣(甘油、葡萄糖、蔗糖、二甲基亚砜、乙醇)进行诱导表达,确定目的蛋白表达的最佳条件。经SDS-PAGE和Western blot分析,表明终浓度为1mmol/L的IPTG诱导6h目的蛋白的表达量最高,分子质量约为53ku。SDS-PAGE分析表明,葡萄糖和乙醇抑制了目的蛋白的表达,而蔗糖、甘油和二甲基亚砜提高了目的蛋白的表达量,获得的目的蛋白具有良好的反应原性。     

从幼鹿顽固性腹泻病料中检出牛病毒性腹泻——粘膜病病毒

应用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ对长春、前郭、伊通、双阳等地区送检的２８份幼鹿顽固性腹泻病料进行了牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）检测。应用电镜对部分ＥＬＩＳＡ阳性和阴性样品进行负染观察,结果６份阳性样品中均见有ＢＶＤＶ粒子,４份阳性样品未观察到ＢＶＤＶ粒子。结果表明,ＢＶＤＶ可能是引起幼鹿顽固性腹泻的重要病因。     

黄藤总生物碱固体分散体在小鼠体内吸收的药代动力学及相对生物利用度

以黄藤素和药根碱为测定指标,研究黄藤总生物碱固体分散体(SD)在小鼠体内的吸收药代动力学情况,为其进一步开发利用提供科学依据.选取SPF级昆明小鼠80只,分为2组,分别灌胃黄藤总生物碱原药与黄藤总生物碱固体分散体,剂量均为0.2 g/kg,共设12个采血点,每个采血点的小鼠样本量为3只,所有血样用高氯酸除蛋白、离心,采...     

牛病毒性腹泻-黏膜病的流行现状和诊断技术研究进展

牛病毒性腹泻-黏膜病是由黏膜病毒所致的一种接触性传染病,呈世界性分布,可引起牛慢性、急性和黏膜性感染,对牛、鹿、羊、马等产生严重的危害,严重阻碍我国乃至世界养殖业的发展。但到目前为止,国内外对该病尚无有效的治疗药物或治疗方法。本文对牛病毒性腹泻病的流行现状及现有诊断技术进行综述,为该病的预防和诊断提供参考。     

夹心ELISA检测鹿粘膜病病毒的研究

建立了检测鹿粘膜病毒 (MDV)抗原的双抗体夹心ELISA。试验方法的最佳工作条件 :抗体包被量为 1 0 0 μg/孔 ,酶标抗体的稀释度为 1∶40 0倍。对吉林省某地鹿场的鹿粪样的检查结果表明 ,该鹿场的MDV阳性率为 32 %。     

鹿结核病野毒株与卡介苗差异基因基因文库的构建

应用四碱基限制性内切酶对鹿结核病流行株和卡介苗基因组分别酶切,以鹿结核流行株酶切产物为testerDNA,卡介苗酶切产物为driver DNA,testerDNA接头连接后与driver DNA进行抑制性消减杂交。将获得的消减PCR产物与pMD-18连接,JM109感受态细胞,进行蓝白斑筛选。结果表明,RsaI酶切产生的酶切产物在0.1～2.0 kb之间,将消减PCR产物克隆后,挑取208个转化子,构建了鹿结核病流行株与卡介苗的差异基因文库。结果表明,应用抑制性消减杂交技术,构建鹿结核病流行株与卡介苗基因组差减文库,可为鹿结核病自然感染和卡介苗免疫的鉴别诊断及鹿结核病的综合防治奠定基础。