鸡干扰素基因的分子克隆与序列测定

根据GenBank已发表的鸡γ干扰素（ChIFN-γ）cDNA基因序列设计一对引物,以伴刀豆球蛋白A（ConA）刺激培养的鸡脾淋巴细胞中提取总RNA,应用反转录、聚合酶链式反应（RT-PCR）技术扩增得到ChIFN-γ,将其连接到pMD18-T载体上并转化到DH5α感受态细胞中,获得阳性重组质粒。测序结果表明,ChIFN-γ与Genbank上发表的ChIFN-γ序列的同源性可达99.6%,其含有1个495 bp的开放性阅读框架,编码164个氨基酸。     

天津市不同功能区土壤物理特性研究

[目的]对天津市常用绿化土壤的基本性质以及渗透性能进行研究,为天津市下凹式绿地的设计及推广应用提供理论依据。[方法]选取天津市不同功能区不同植被类型(草坪、灌木)的土壤,对土壤的颗粒组成、容重、孔隙度以及渗透系数进行研究,并分析天津土壤性质间的相关性。[结果]天津市除老居民生活区属于粉土外,其他功能区均属于粉质黏土。受人为扰动影响,各功能区绿化土壤容重大,孔隙度较低,土壤压实严重,其中土壤容重为1.34~1.55g/cm~3,土壤孔隙度为42.50%~52.80%;各功能区的渗透系数差异很大,范围为8.8E-06~1.3E-03cm/s,大小趋势主要受人为因素的影响,表现为:文教区居民生活区工业区郊区林带公园区道路交通区;植被类型对土壤渗透系数有影响,为草坪灌木。土壤的渗透系数与土壤含水率、土壤容重呈负相关性,与土壤孔隙度呈正相关性;土壤容重与土壤孔隙度呈极显著负相关。[结论]天津地区土壤压实严重,草坪与灌木土壤以弱透水和中等透水为主。     

I型鸭肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立

根据GenBank 发表的DHV I的基因序列,设计了1对针对DHV I保守区的特异性引物。通过对反应条件的优化,建立了鸭病毒性肝炎病毒快速鉴别诊断的RT-PCR方法,扩增片段大小为632 bp。试验表明,RT-PCR法具有很强的特异性,且该方法的敏感性明显高于常规的检测方法。对鸭病毒性肝炎的病料检测证明,该方法能有效鉴别DHV,特异性良好。     

鸭瘟病毒PCR检测方法的建立

根据GenBank 发表的鸭瘟病毒(DPV)的基因序列,设计了针对DPV UL6 UL7保守区1对特异性引物。通过对反应条件的优化,建立了鸭瘟病毒快速鉴别诊断的PCR方法,扩增片段大小为1 293 bp。试验结果表明PCR法具有很强的特异性,且敏感性较高,最低DNA模板检出量为15 pg/mL。对鸭瘟的临床病料检测证明,该方法具有特异、快速和敏感的特点,可有效鉴别DPV。     

中国植原体病害的状况、分布及多样性研究进展

植原体是引起众多植物病害的一类重要原核致病菌,能引起许多重要粮食作物、蔬菜、果树、观赏植物和林木严重病害,造成巨大损失。为了深入了解中国植原体病害的状况、分布及多样性,最终实现植原体病害的科学防控,归纳总结了中国植原体病害的研究历史、经济重要性、症状特点、流行传播、鉴定方法、地域分布及多样性等。提出了今后应从抗性资源筛选、抗病基因鉴定,基因组特征、致病机理、病害流行学、防治方法和昆虫传毒机理等方面开展植原体病害研究的建议。     

马立克氏病病毒gB与IL-2融合基因载体的构建及表达

根据已发表的马立克氏病病毒(MDV)血清Ⅰ型与鸡白介素2(IL-2)DNA序列,设计两对引物,用PCR扩增出MDV gB基因和IL-2基因,并克隆入pEGFP-C1载体,构建了载体pC1-gB—IL。通过酶切分离外源基因表达盒,并将外源基因表达盒插入pTK2B质粒,成功构建了转移载体pT-C—gB-IL。将转移载体pT-C-gB-IL转染CEF细胞,培养36—48h后,经荧光显微镜观察,有荧光出现,证明该载体得到表达,并通过Western—blotting鉴定证明MDV gB和IL-2的融合基因得到了有效的表达。     

H9N2亚型禽流感病毒NS1蛋白原核表达载体的构建及表达

为对H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)NS1基因进行原核表达,并对表达产物进行抗原性分析,根据NS1基因合成1对特异性引物,进行PCR扩增,将扩增片段连接至PMD18-T载体,通过序列测定和比对筛选出保真基因克隆;将保真基因克隆至pET32a表达载体,构建重组质粒pET32a-NS1后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中...     

新型鹅星状病毒一步法RT-PCR检测方法的建立与应用

新型鹅星状病毒(goose astrovirus,GoAstV)感染引起的鹅痛风病,是近年严重危害我国养鹅业的传染病之一,给我国养鹅产业造成严重经济损失,快速准确诊断有助于更好地防控该病.为了建立一种鉴定新型GoAstV的一步法RT-PCR方法,根据新型GoAstV ORF2基因序列设计特异性引物,构建质粒标准品,并对...     

一株鸭源H9亚型禽流感病毒在鸡胚上传代及繁殖规律的研究

对一株从发病鸭体内分离到的H9亚型禽流感病毒株[A/Duck/NanJing/1/1999(H9N2),简称NJ01]进行了传代及繁殖规律的研究。将其在10日龄SPF鸡胚上传至15代,测定血凝价及平均死亡时间。取第3 (E3)、5(E5)、10(E10)、15(E15)代次的毒种稀释至不同浓度,接种10日龄、11日龄SPF鸡胚及非免疫鸡胚,对收获毒液量及血凝价(HA)、病毒含量(ELD_(50))进行比较。同时对接种10~(-4)稀释的第3代毒种死亡鸡胚各组织所含病毒的HA进行测定。结果显示,NJ01株经传代其平均死亡时间为53～64 h,HA为9～11 log_2;E3、E5、E10、E15毒种的ELD_(50)分别为10~(8．83)/0．1 ml、10~(9.0)/0．1 ml、10~(8.33)/0．1 ml、10~(8.32)/0．1 ml;将E3毒种稀释至10~3、10~4、10~5倍接种鸡胚,对病毒繁殖收获量有一定的影响,平均死亡时间延长,经10~(-4)稀释后接种11日龄SPF鸡胚的病毒繁殖效果最好;死亡鸡胚以尿囊液和尿囊膜所含病毒的HA最高,达9～10 log_2,肝、肺及其他组织HA较低,为1～5 log_2。     

秦岭山地主要森林凋落物化学组分

【目的】分析秦岭山地主要森林凋落物的化学组分,为应用Yasso07土壤碳模型估算和预测秦岭山地森林土壤有机碳变化动态提供必要参数。【方法】利用醇浸提法和酸碱洗涤法,测定生长于秦岭火地塘的华山松(Pinus armandi)、油松(Pinus tabulaeformis)、云杉(Picea asperata)、华北落叶松(Larix principis-rupprechtii)、锐齿栎(Quercus aliena var.acuteserrata)和红桦(Betula albo-sinensis)6个主要树种非木质凋落物、细木质凋落物、粗木质凋落物中的醇溶性(ESC)、水溶性(WSC)、酸溶性(ASC)和不溶性(NSC)4类化合物的含量。【结果】(1)不同树种凋落物的化学组分含量差异显著(P0.05),针叶树种凋落物中ESC、WSC、ASC和NSC的含量分别为(78.23±39.51)~(102.11±40.48)g/kg、(106.43±36.66)~(144.25±60.02)g/kg、(482.09±73.01)~(507.09±56.58)g/kg和(277.42±25.13)~(314.03±16.08)g/kg;阔叶树种的凋落物中ESC、WSC、ASC和NSC的含量则分别为(111.63±68.24)~(129.99±39.10)g/kg、(158.64±70.36)~(184.96±51.20)g/kg、(452.28±51.95)~(489.56±52.39)g/kg和(232.77±44.44)~(240.17±94.81)g/kg。(2)各树种不同凋落物类型间化学组分含量差异显著(P0.05),非木质、细木质和粗木质凋落物中的ESC、WSC、ASC和NSC的含量分别为(21.27±4.12)~(175.77±24.30)g/kg、(53.30±2.40)~(237.10±29.73)g/kg、(404.23±15.79)~(597.45±4.88)g/kg和(166.11±69.77)~(327.98±4.91)g/kg。(3)聚类分析结果表明,秦岭山地主要树种凋落物可分为两大类,华山松、油松、华北落叶松和云杉这4种针叶树种聚为一类,红桦和锐齿栎这2种阔叶树种聚为一类。【结论】在不同区域应用Yaso07土壤碳模型时,不宜直接采用模型提供的凋落物4类化合物含量参数。