斑点叉尾鮰病毒囊膜蛋白基因ORF6和ORF10的原核表达及抗体制备

为获得斑点叉尾鮰疱疹病毒ORF6和ORF10基因,设计特异性引物进行PCR扩增,成功构建pET-32a-ORF6和pET-32a-ORF10原核表达载体,经IPTG诱导后目的蛋白在大肠杆菌中成功表达并制备多抗,通过Western blot证明ORF10的抗体具有特异性,且ORF10为病毒的结构蛋白。     

宁夏羊规模养殖场户布鲁氏菌病基线调查

为了解宁夏地区布鲁氏菌病在羊间和人间流行现状,对存栏200只羊以上规模养殖场（户）及相关从业人员开展了布鲁氏菌病流行病学和影响因素基线调查。自2008年开始到2013年,共检测羊75467只,其中阳性的有674只,总阳性率为0.89%,各年阳性率从2008年的0.71%波动上升至2013年的1.2%;2008—2013年,感染布鲁氏菌病人数亦呈递增趋势,各个年龄段均有发病,但以30~59年龄段的发病人数居多。造成人间布鲁氏菌病年龄分布差异的主要因素是人接触传染源的频繁程度、从业人员自我防护意识、防护措施等。     

浅析畜禽规模养殖场防疫管理

规模养殖场监管工作是动物疾病预防控制工作的重点和难点,为进一步做好动物防疫基础工作,探讨规模养殖场各项防疫措施落实的监管方法,建立健全长效监管机制,加快推进规模养殖场动物防疫工作规范化建设,我们对辖区内规模养殖场监管的现状和难点进行调研,并在文中探讨如何做好规模养殖场监管,为规模养殖场监管模式和监管内容提出了政策建议。     

滩羊胎儿弯曲杆菌的分离鉴定

[目的 ]对一规模化养殖场滩羊流产的原因进行确诊,为流产羊的疫病诊断和防控提供建议。[方法 ]无菌采集流产胎儿血性腹水和流产母羊阴道分泌物进行细菌培养、分离和鉴定。[结果 ]分离到2株病原菌,经形态特性、培养特性及生理生化特性观察,鉴定为胎儿弯曲杆菌胎儿亚种;动物实验表明,其对小白鼠有很强的致病性。[结论 ]致病性胎儿弯曲杆菌胎儿亚种是造成该羊场发生大面积流产的主要病原。     

斑点叉尾鮰病毒ORF6基因的高效可溶表达及抗原性分析

利用GST融合基因表达系统表达GST-GP6融合蛋白,以质粒pMD19-T-ORF6为模板,扩增出ORF6基因片段,将其克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-4T-2,将所构建的重组质粒pGEX-4T-2-ORF6转化E.coli ER2566,并诱导表达,采用GST蛋白纯化系统进行纯化,所得产物进行10%SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果表明,大肠杆菌细胞经诱导高效表达出约42kD蛋白,其分子量与GST-GP6融合蛋白相符,表达产物以可溶的形式存在。Western blot分析表明,融合蛋白能够与斑点叉尾鮰病毒(Channel catfish virus,CCV)阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的抗原性和特异性。     

猪场暴发猪肺疫的诊治

1998年 1 2月 ,西北煤机一厂养猪场突然暴发由猪多杀性巴氏杆菌引起的急性、败血性猪肺炎 (猪巴氏杆菌病 ) ,由于诊治及时 ,疫情得到控制。报告如下。1　发病情况及原因1 .1　发病情况　 1 998年 1 2月 2 7日下午 ,西北煤机一厂养猪场兽医来报 ,称该场暖棚饲养的 75 0头猪突然发生疫病 ,病程 2～ 3天 ,已有 34头病猪死亡 ,还有 2 0头处于濒死期。笔者赶到现场 ,发现又有 42头猪出现典型症状 ,疫情已波及全场各个猪舍。1 .2　发病原因　1 .2 .1　 1 998年冬以来我市气温一直偏高 ,处于暖冬天气 ,在 1 998年 1 2月下旬 ,气候突然变冷 ,引起猪…     

肉羊引调适应性饲养中发生魏氏梭菌病防治的研究

肉羊引调、流行病学调查、羊肠毒血症、羊猝疽、羔羊痢疾、羊快疫、病理变化、化验室诊断、"四联苗"紧急预防注射、适应性饲养、魏氏梭菌定型血清A、B、C、D、E型试验(技术难点)、针对性治疗和保护、肉食品安全(创新点)。     

枸杞多糖对乳腺炎小鼠乳腺组织TNF-α表达的影响

为了研究枸杞多糖(LBP)对试验性乳腺炎小鼠乳腺组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)表达水平的影响,探讨奶牛乳腺炎的发病机制和LBP对其作用的靶点,试验将100只受孕雌鼠随机分为5组,即正常对照组、正常高糖组、模型组、高剂量治疗组、低剂量治疗组,采用免疫组化技术检测小鼠乳腺组织中TNF-α表达水平的动态变化。结果表明:正常高糖组TNF-α表达随着LBP给药时间的延长轻微增强,与正常对照组比较差异不显著(P0.05);模型组在攻菌后第6小时TNF-α表达水平达到峰值,而后表达开始减弱,第42小时时表达开始增强,均极显著高于同一时段正常对照组(P0.01);低剂量治疗组TNF-α表达水平极显著低于同一时段模型组(P0.01),并在攻菌后第66小时表达水平与正常对照组间差异不显著(P0.05);高剂量治疗组TNF-α表达水平各时段均显著低于模型组(P0.05)而极显著高于正常对照组(P0.01);各剂量治疗组TNF-α表达水平随着LBP给药时间的延长而逐渐减弱。说明LBP可提高机体免疫力,显著抑制大肠杆菌诱导的小鼠乳腺组织中肥大细胞的增殖和TNF-α的表达,其治疗效果随给药时间的延长逐渐增强,呈现时间依赖现象,且低剂量治疗组抑制效果最显著。     

斑点叉尾鮰病毒“自杀性”ＤＮＡ疫苗的构建及其体外表达检测

根据CCVORF6基因序列,设计合适的引物,扩增ORF6基因,分别将其克隆到"自杀性"DNA疫苗载体pS-FV与常规DNA疫苗载体pcDNA3.1(+)中,转化感受态细胞DH5α后提取质粒,构建斑点叉尾鮰(Ictalurus punc-tatus)"自杀性"DNA疫苗ps-ORF6与常规DNA疫苗pcd-ORF6,利用转化后的大肠杆菌菌液为模板进行PCR扩增、提取质粒酶切鉴定以及序列测定等方法证实重组质粒构建正确。将重组质粒转染人胚肾细胞(293T),间接免疫荧光试验表明ORF6均获得表达,但"自杀性"DNA疫苗的表达效果不如常规DNA疫苗,该研究为这2种疫苗进一步的鱼体试验奠定了基础。     

斑点叉尾鮰病毒“自杀性”DNA疫苗的构建及其体外表达检测

根据CCVORF6基因序列,设计合适的引物,扩增ORF6基因,分别将其克隆到自杀性DNA疫苗载体pS-FV与常规DNA疫苗载体pcDNA3.1(+)中,转化感受态细胞DH5α后提取质粒,构建斑点叉尾鮰(Ictalurus punc-tatus)自杀性DNA疫苗ps-ORF6与常规DNA疫苗pcd-ORF6,利用转化后的大肠杆菌菌液为模板进行PCR扩增、提取质粒酶切鉴定以及序列测定等方法证实重组质粒构建正确。将重组质粒转染人胚肾细胞(293T),间接免疫荧光试验表明ORF6均获得表达,但自杀性DNA疫苗的表达效果不如常规DNA疫苗,该研究为这2种疫苗进一步的鱼体试验奠定了基础。