亮氨酸对不同动物体外胰腺组织消化酶分泌的比较研究

为了比较亮氨酸对不同动物胰腺消化酶分泌的影响及其是否存在种间差异,试验利用体外组织培养的方法进行研究。试验一:选取5头西门塔尔育肥牛,屠宰后立即取出胰腺组织,切成小块置于含不同浓度亮氨酸的Krebs Ringer bicarbonate buffer(KRB)溶液中,亮氨酸梯度设置为0、2.62、5.24、10.48 mg/mL,每个处理5个重复,培养1 h后取胰腺组织和KRB培养液,测定消化酶活性;用相同方法处理羊、猪、鸡。试验二采用双因素交互试验设计,取牛、羊、猪、鸡胰腺组织,亮氨酸梯度设置为0、5.24 mg/mL,每个处理5个重复,培养1 h后收集胰腺组织和KRB培养液测定酶活性。结果表明:(1)亮氨酸可以线性提高牛胰腺组织释放的α-淀粉酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶活性(P<0.05),降低胰腺组织释放的脂肪酶活性(P<0.05),提高羊、猪、鸡胰腺组织释放的α-淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶活性(P<0.05);(2)动物种类显著影响体外胰腺组织释放的α-淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶活性(P<0.05),亮氨酸显著影响胰腺组织释放的α-淀粉酶、胰蛋...     

钙调素基因(HcCaM7)及其蛋白乙酰化修饰参与红麻响应非生物胁迫的作用

钙调素是一类钙依赖性调节蛋白,参与植物的生长发育、抗逆胁迫等多种生物学过程。本课题组前期通过蛋白质乙酰化修饰组学研究发现,红麻钙调素蛋白7的乙酰化修饰参与了红麻花粉的发育调控。为研究其参与抗逆性的机制,本研究以红麻保持系P3B双核期的花药为材料,使用PCR法克隆了钙调素基因HcCaM7,最大开放阅读框(open reading frame, ORF)为450 bp,其由149个氨基酸组成,编码相对分子质量16.85 kD的蛋白;亚细胞定位结果显示, HcCaM7蛋白的表达主要定位在细胞质和细胞膜中;利用病毒诱导的基因沉默技术沉默HcCaM7基因,导致红麻沉默植株的生长受到抑制;进一步在体外采用基因密码子扩展技术对发生乙酰化修饰氨基酸位点进行突变,成功获得具有体外乙酰化修饰位点的蛋白HcCaM7mut,并成功诱导表达了无乙酰化修饰的蛋白HcCaM7,结果表明HcCaM7蛋白发生乙酰化修饰后可以显著促进NADK(NAD激酶)活性;用点板法检测含有HcCaM7蛋白和HcCaM7mut蛋白的重组菌在盐(400 mmol L^–1和500 mmol L^–1     

北京鸭MYL3基因的生物信息学分析及其原核表达

肌球蛋白轻链3(Myosin Light Chain 3,MYL3)属于MYLs家族，能够维持细胞结构及功能、保持肌球蛋白构型。本研究扩增了北京鸭胸肌组织MYL3基因的CDS区序列，在此基础上使用生物信息学分析网站进行序列分析，下一步构建MYL3原核表达载体，将重组质粒导入E.coli BL21(DE3)，利用IPTG诱导表达，最后使用SDS-PAGE凝胶电泳技术检测MYL3原核表达蛋白。结果表明：鸭MYL3基因开放阅读框大小为582 bp，编码193个氨基酸，日本鹌鹑、雉鸡和鸡的氨基酸序列与鸭亲缘关系最近，其次是鸵鸟，最后是人和猪。MYL3蛋白的相对分子质量为21800.01u，等电点为5.13，不稳定性系数为42.5，是一种不稳定且呈酸性的蛋白，总体平均亲水系数高达-0.727，不属于疏水性蛋白。另外，此蛋白是细胞质蛋白，无信号肽和跨膜结构，存在14个磷酸位点和2个N-糖基化位点；该蛋白具有的二级结构中比例最高的是α-螺旋，最低的是β-转角。本实验完成了大小为664 bp的MYL3基因片段的扩增，pET-32a(+)-MYL3重组质粒通过BamH I和Sac I双酶切后，分别形成了...