降解亚硝酸盐和生物胺乳杆菌筛选及其改善鱼肉香肠品质效果

为了筛选出优良亚硝酸盐和生物胺的降解植物乳杆菌,并研究在鱼肉发酵香肠中的应用。该文主要考察了19 株植物乳杆菌亚硝酸盐和生物胺的降解活性及相关基因的携带情况,从中筛选出优良菌株,并研究其对鱼肉香肠发酵过程中各种亚硝胺、生物胺、腐败微生物的抑制作用和对其他理化指标的影响。试验结果表明,L. plantarum CP3对亚硝酸盐和生物胺的降解能力最强,分别达到95%和77%,PCR结果显示此菌株中含有亚硝酸盐降解（假定蛋白（hypothetical protein,HP）、谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase,GR）、一氧化还原酶（Oxidoreductase,ORD））和生物胺降解的相关基因（multicopper oxidases,suf I）,且不含生物胺生成相关基因（hdc,tdc,odc）。GC-MS测定结果显示L. plantarum CP3对发酵香肠中4种亚硝胺-二乙基亚硝胺（N-nitrosodiethylamine,NDEA）,二甲基亚硝胺（N-nitrosodimethylamine,NDMA）,亚硝基吗啉（N-nitrosomorpholine,NMOR）和甲基乙基亚硝胺（N-nitrosomethylamine,NMEA）的生成都具有显著的抑制作用,联合接种L.saki M4可以协同提高亚硝胺的降解能力。并且,与对照组相比,接种L. plantarum CP3+L.saki M4的鱼肉香肠,发酵48 h后腐胺、尸胺和酪胺的含量分别降低了76.83%,93.33%和88%。另外,接种乳酸菌处理组香肠中的肠杆菌、假单胞菌等腐败菌及pH值、硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid,TBA）和挥发性盐基氮（total volatile basic nitrogen,TVB-N）的含量显著低于对照组。该研究结果体现了L. plantarum CP3作为香肠等肉制品发酵剂的良好开发应用前景。     

襄阳市禽业发展的现状和前景分析

襄阳市地处南北交汇地带,生态条件良好,自然资源丰富,是长江流域及以南地区唯一的百亿斤粮食生产大市,也是湖北省畜牧大市,畜牧业整体发展水平居全省前列。随着近几年的发展,生猪行业出现重大结构调整,禽业发展遇到许多新的问题。本文结合实际,简要分析了未来襄阳禽业发展的重点和方向。     

猪胚胎早期卵裂时间与其发育潜能关系的初步研究

旨在探讨初次卵裂时间对猪孤雌胚胎发育潜能及其基因相对表达水平的影响。本试验从健康母猪卵巢上抽取卵母细胞进行体外成熟培养，将猪孤雌激活胚胎分为早期卵裂组（16~22 h）与晚期卵裂组（26~32 h）统计比较卵裂率和囊胚率，并对囊胚的多能性相关基因Oct4、Sox2、Klf4等和凋亡相关基因Bcl-xl、Bax、Caspase-3的相对表达水平进行分析检测。结果表明，猪孤雌激活胚胎在16~22 h发生卵裂的为50%~60%，而26 h之后发生卵裂的不到20%，在18 h前完成第一次卵裂的胚胎囊胚发育率为79%，42 h后发生初次卵裂的胚胎无法发育至囊胚期。猪孤雌激活胚胎早期卵裂组的囊胚发育率显著高于晚期卵裂组（P<0.05）。早期卵裂组囊胚的Oct4、Nanog、Sox2、Klf4基因的表达量显著高于晚期卵裂组（P<0.05），Oct4、Sox2、Klf4基因的相对表达量极显著高于晚期卵裂组（P<0.01），Bax和Caspase-3基因的相对表达水平极显著低于晚期卵裂组（P<0.01），而Bcl-xl作为保护因子其表达量相对于晚期卵裂胚胎（26~32 h）显著上调（P<0.05）。结果显示，初次卵裂时间较早的猪孤雌激活胚胎发育潜能显著高于较晚卵裂胚胎，其囊胚多能性相关基因表达上调，凋亡相关基因表达下调，卵裂时间可作为鉴定猪孤雌激活胚胎发育潜力的重要参数。     

牛病毒性腹泻/黏膜病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立一种检测牛病毒性腹泻、黏膜病病毒抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白并纯化,使用纯化后的蛋白作为包被抗原。确定最佳抗原包被浓度为6μg·m L-1,最佳血清稀释度为1∶80,最佳包被液为碳酸缓冲液,最佳盐封闭液为5%脱脂乳,最佳血清作用时间为60 min,酶标抗体作用最佳浓度为1∶10 000;最佳底物作用时间为5 min,阳性临界值为D450 nm≥0.282。与IDEXX的BVDV间接ELISA试剂盒比较,总符合率为91.5%,板内和板间重复性试验变异系数均小于10%。该方法与牛副流感病毒Ⅲ型、牛传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛冠状病毒阳性血清无交叉反应。因此,该ELISA诊断方法可用于大批量样本抗体水平监测和流行病学调查。     

中国北方地区不同滴灌方式节水增产效应的Meta分析

为了探明中国北方地区地下滴灌（subsurface drip irrigation,SSDI）与地表滴灌（surface drip irrigation,SDI）节水增产效应的差异,该研究以SDI作为对照,采用Meta分析定量分析了不同条件下SSDI对作物产量和水分利用效率的影响。结果表明,与SDI相比,SSDI可使作物总体增产6.66%（P<0.05）,水分利用效率提高9.34%（P<0.05）,净效益增加6.94%（P<0.05）;SSDI在西北和华北地区均能提高作物产量和水分利用效率;当年均降雨量不大于400 mm时,SSDI能显著提高作物产量;当土壤容重大于1.5 g/cm³,灌水施肥频率大于6次,滴灌带埋深为15～25 cm,滴头流量介于1.5～2.5 L/h时,更有利于发挥SSDI优势,节水增产效果显著。研究可为中国北方地区SSDI的推广应用提供理论参考。     

基于NDDF的我国各省用水效率测量及对外贸易影响因素分析

以全国各省污水排放量为非合意产出,运用非径向方向距离函数构建了2种用水效率指数来测量用水效率。通过构建Tobit模型分析了对外贸易等因素对用水效率的影响以及作用机制。结果表明:(1)我国各省市用水效率水平不高,地区间差异显著,整体趋势是先上升后下降再上升;(2)对外贸易通过进出口2种途径可显著提高用水效率;(3)对比UEI和WEPI 2种用水效率指数,通过控制产业结构、水资源禀赋和水价等因素后实证结果仍然稳健。     

BVDV P7蛋白的原核表达及其生物信息学分析

为了对BVDV-1 P7蛋白进行原核表达及生物信息学分析,采用RT-PCR的方法扩增BVDV NADL株BVDV-1 P7的ORF,扩增产物经Bam H I、Sal I双酶切后插入原核表达载体p EGX4T-1(+),构建P7基因原核表达载体并将其转化至工程菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达,并对其进行生物信息学预测。结果表明,成功扩增并构建了BVDV NADL株的BVDV-1 P7原核表达载体,命名p EGX4T-1-P7。SDS-PAGE和Western blot表明,在分子质量34 k Da的位置出现与预期大小一致的蛋白条带;生物信息学结果表明在P7蛋白有信号肽,存在疏水区。该研究成功的表达了P7蛋白,该蛋白是一个疏水性蛋白,为其进一步的功能研究奠定了坚实的基础。     

逆转录病毒感染小鼠原代巨噬细胞的方法

巨噬细胞在调节免疫反应中发挥着重要作用,但是其难以转染的特点妨碍了对巨噬细胞调节免疫反应的分子机制进行深入的研究。利用HEK293T细胞包装携带GFP标记的逆转录病毒载体,分别感染处于不同分化阶段的巨噬细胞,通过检测细胞的生长状况和GFP阳性细胞比例,探究感染时间对病毒感染效率的影响。结果表明,在巨噬细胞分化的早期阶段感染重组的逆转录病毒效率最高,并且对细胞的分化和增殖无明显影响。接下来,利用此方法研究了MKP5对I型干扰素表达的调节作用。通过构建和包装表达MKP5的重组逆转录病毒,在巨噬细胞分化后的第一天进行感染,然后进行Western杂交和实时定量PCR分析。采用这一感染条件,不仅检测到大量外源MKP5的表达,并且发现过表达MKP5能显著抑制LPS诱导的IFN表达。因此在巨噬细胞分化早期感染逆转录病毒,可以有效地表达外源目的蛋白,研究这些蛋白分子在巨噬细胞中调控免疫反应的功能,为今后的免疫学研究提供了一种行之有效的技术方法。     

薰衣草LaMYB1转录因子的克隆及表达分析

本研究获得了薰衣草转录因子MYB基因,并探究了该基因在薰衣草不同组织、花器官不同时期的表达特性和转录激活活性。采用RACE和RT-PCR技术克隆了薰衣草(Lavandula angustifolia Mill.)LaMYB1转录因子,该基因全长729 bp,编码242个氨基酸,蛋白分子量为27.60 kDa,等电点为9.01。该基因与白桦BpMYB21基因亲缘关系较近。薰衣草LaMYB1基因在‘杂花’和‘法国蓝’两个品系不同组织和花器官不同时期的表达规律具有相似性,该基因在雄蕊的表达量最高,在衰败期的表达量最高。α-蒎烯、乙酸薰衣草酯、氧化石竹烯、莰烯和柠檬烯在雄蕊中的含量最高,这些萜类物质在两个品系不同组织中的含量变化规律与LaMYB1基因在不同组织中的相对表达量变化规律一致;LaMYB1基因在‘法国蓝’薰衣草中的相对表达量最高,右旋樟脑和柠檬烯的含量在‘法国蓝’薰衣草衰败期最高。薰衣草LaMYB1基因具有转录激活活性。