猪传染性胃肠炎病毒S基因A位点蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

猪传染性胃肠炎(TGE)是由传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起的高度接触传染性疾病,以仔猪呕吐、严重腹泻、脱水和高死亡率为临床特征.该病毒主要编码纤突蛋白(S)、膜结合蛋白(M)、核蛋白(N)和小膜蛋白(sM)4种结构蛋白[1-2].其中S蛋白是惟一能诱导机体产生中和抗体的结构蛋白[3].在S基因的近N端包含了4个主要的抗原决定位点A、B、C、D,其中诱导中和抗体产生的主要是A位点[4].此位点缺失可导致S蛋白不能产生中和抗体[3].本试验利用原核表达的TGEV S基因A位点重组蛋白免疫小鼠制备单抗,旨在为建立TGEV准确快速的病原诊断,以及探索相关药物治疗效果研究奠定技术平台.     

丁酸及其衍生物对犊牛腹泻的影响

犊牛自身的消化和免疫系统发育不完善,加上环境应激及抗生素的限制添加,犊牛的胃肠道健康受到威胁,极易引发腹泻。丁酸及其衍生物具有调节胃肠道菌群、提高机体的免疫力、促进犊牛生长和降低腹泻等作用,因此被应用于犊牛日粮中。本文主要总结丁酸及其衍生物对犊牛腹泻的影响。     

青海省牛病毒性腹泻/黏膜病血清学调查

<正>牛病毒性腹泻/黏膜病(BVD/MD)是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起的,主要发生于牛的一种急性、热性传染病。BVDV感染牛的典型症状是牛病毒性腹泻、急慢性黏膜病、发热以及随后的产奶量下降。病毒可通过胎盘感染,从而可导致怀孕母牛的流产和死产,产下存活的小牛可出现免疫耐受,并会终生排[1]     

PRRSV和PCV2共感染对猪肺泡巨噬细胞CD80-CD86mRNA转录的影响

用猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）与猪圆环病毒2型（PCV2）共感染40日龄健康大白仔猪，利用实时荧光定量PCR技术对共感染仔猪肺泡巨噬细胞（PAM）共刺激分子CD80一CD86的mRNA转录水平进行了定量分析。结果表明，在感染后第3d和第7dCD80与CD86mRNA转录显著下调（P〈0．05），感染后第14dCD86mRNA转录水平仍低于未感染对照组。尽管CD80mRNA转录水平在第14d和第28d高于对照组，CD86mRNA转录水平在第28d高于对照组，两者在第42d均高于对照组，但无显著差异。证实，PRRSV和PCV2共感染可导致猪肺泡巨噬细胞的共刺激分子CD80-CD86基因转录在感染早期明显受到抑制，PAM的抗原呈递能力受到影响。     

猪皮肤源树突状细胞的分离和鉴定

摘要：【目的】分离出不需要体外诱导树突状细胞（DC）,为研究病毒与猪DC的关系奠定基础。【方法】将刮下的猪皮肤表皮培养过夜,对所分离获得的细胞通过流式细胞术、吉姆萨染色与扫描电镜进行表型与形态鉴定。【结果】试验结果表明,通过细胞计数分离到的细胞能达到5×106个细胞,流式细胞术检测细胞CD1a/SWC3a的双阳性细胞率为82.3%;流式细胞术检测CD80/86分子,阳性细胞率为90.2%;通过吉姆萨染色和扫描电镜观察,细胞表面有大量的树突状突起,符合DC的形态特征。【结论】通过表型和形态学分析,说明已经成功分离猪皮肤源DC,为器官移植和猪病毒性疾病的免疫抑制机理研究奠定基础。     

PCV2感染猪血管内皮细胞相关免疫调节分子的表达变化

将猪圆环病毒2型(PCV2)接种猪血管内皮细胞(VEC),于接种后不同时间收集细胞及上清,利用实时荧光定量PCR和ELISA技术分析VEC相关免疫调节分子表达变化。与对照组相比,PCV2感染后血管内皮生长因子(VEGF)、IL-6与巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的mRNA水平变化趋势基本一致,VEGF和M-CSF在感染后12h显著上调,IL-6与M-CSF在48h显著下调;MCP-1和IL-8在感染后4h和48h均显著上调,且IL-8在24h时上调显著,72h下调显著。蛋白水平上,VEGF在4h显著下降,24h显著增高;IL-8在4h和24h显著上升。以上结果表明,PCV2体外感染导致VEC免疫调节功能分子表达异常,其炎性趋化、黏附能力以及对树突状细胞(DC)的分化、成熟等免疫调节功能可能受到影响。     

10批金银花有效成分的高效液相色谱测定

【目的】用高效液相色谱建立金银花中有效成分含量的检测方法。【方法】采用梯度洗脱方法,对金银花75%甲醇提取液中绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、芦丁和木犀草苷8种成分的含量进行研究。【结果】8种成分在各自范围内线性关系均良好(R²>0.999 0);平均回收率为98.98%～102.84%(n=6);相对标准偏差为0.90%～4.11%。10批金银花样品均表现为绿原酸含量最高,含量为26.93～31.90 mg/g,且8种成分含量的RSD均符合标准。【结论】该方法简单稳定,适合金银花中有效成分的定量测定。     

基于高效液相色谱法的金银花指纹图谱研究

【目的】旨在建立金银花高效液相色谱指纹图谱方法,并将其应用于不同批次的金银花样品检测。【方法】色谱条件：YMC-Pack ODS-A C₁₈(150 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,流动相为0.6%乙酸(0～30 min, 92%～72%)和乙腈(0～30 min, 8%～28%),梯度洗脱,检测波长330 nm;流速1.0 mL/min;色谱柱温度25℃。方法学考察合格后,检测14批金银花样品,用中药色谱指纹图谱相似度评价系统建立指纹图谱,进行相似度评价。用SPSS 20.0软件进行聚类分析和主成分分析。【结果】建立金银花的高效液相色谱指纹图谱,14批金银花样品的相似度在0.971～1.000之间,共标定出11个共有峰。通过对照品指认其中的8个,分别为异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁和木犀草苷。14批金银花共有峰峰面积占总峰面积的平均值为96.31%,RSD为0.47%。聚类分析将14批金银花样品分为4个,但主成分分析后缩减为3个,其中主成分1包括异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和2个未知成...     

微波辅助提取杏花总黄酮工艺的研究

[目的]研究杏花总黄酮的微波辅助提取工艺条件.[方法]通过单因素试验和正交试验,探讨乙醇浓度、料液比、提取时间、提取功率、提取温度对杏花总黄酮提取效果的影响.[结果]各因素对杏花总黄酮提取效果影响的次序为:乙醇浓度>提取时间>提取温度>料液比.试验中最佳提取工艺条件为:乙醇浓度40;,提取时间8 min,提取温度70℃,料液比1:80.[结论]优化提取工艺简单、稳定、可行.     

猪呼吸道冠状病毒及实验室诊断方法研究进展

从猪呼吸道冠状病毒（porcine respiratory coronavirus,PRCV）基因组特点、结构蛋白、病毒变异与演化、实验室诊断等方面论述PRCV的研究进展,对进一步地了解该病毒的特性,制定合理的预防和检疫措施,防止该病传入中国奠定基础。