猪圆环病毒诊断方法研究进展

文章就猪圆环病毒病毒实验室检测技术,包括病毒分离、电镜观察、聚合酶链式反应、间接免疫荧光试验、免疫组化技术、荧光定量PCR等方法的研究做了阐述,旨在提升行业对圆环病毒的检测和防控策略。     

猪瘟病毒Erns基因RNase酶活性位点的定点突变对其原核表达的影响

利用重组PCR技术将猪瘟病毒兔化弱毒株(Hog cholera virus lapinized Chinese strain,HCLV)Erns编码区30位His残基密码子CAT突变为Pro残基密码子CCC,将突变后的基因克隆至原核表达载体pET-28a( )中,构建成重组质粒pETmErns,并将此重组子转入宿主菌BL21(DE3)plysS中,在IPTG的诱导下表达重组转化菌.结果:突变的mErns基因能在pET表达系统成功表达.用Western blotting检测表明,所表达的蛋白是猪瘟病毒特异性的,但克隆于pET-28a( )中未突变的Erns基因却不能表达,说明Erns基因的RNA酶活性是影响该基因在Escherichia coli中表达的因素之一.     

猪圆环病毒2型Cap 蛋白部分基因序列与大肠杆菌LTB成熟肽基因的融合表达及免疫原性研究

为了获得猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)衣壳蛋白(Cap)基因3’端396 bp的片段与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)成熟肽编码区融合基因的高效表达,并检验重组蛋白的免疫保护效果。以含PCV-2全基因组的pMDT PCV-2质粒为模板,用PCR的方法扩增PCV-2 Cap基因,并将其克隆到pET28a( )中,构建得到pET-Cap质粒,利用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切切下Cap基因3’末端396 bp的片段,插入到pET-LTB原核表达质粒LTB基因的3’末端,从而构建pET-LTB△Cap原核表达质粒,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS后,用IPTG诱导重组菌,用SDS-PAGE电泳和Western blot检测诱导物。表达产物经初步纯化后用昆明系小白鼠做免疫保护实验。结果表明:pET-LTB△Cap重组融合表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白分子量约为29Ku,表达量约占菌体蛋白的36.67%,融合蛋白能被PCV-2阳性血清识别。攻毒后,所有小鼠临床表现正常。用PCR检测有1/8的免疫小鼠感染了PCV-2,而对照组8只小鼠都感染了PCV-21。PCV-2 Cap基因3’端396 bp的片段与LTB基因融合能实现高效表达,表达产物免疫的小白鼠可抵抗PCV-2的攻击此研究为PCV-2基因工程疫苗的研究奠定了基础。     

某规模猪场猪伪狂犬病的诊断

本文针对一规模猪场哺乳仔猪发病死亡情况,根据该场发病仔猪的临床表现、解剖病变,结合PCR诊断、家兔接种实验以及病毒分离,诊断为伪狂犬病毒野毒感染,最后对该猪场发病的原因以及防控对策进行了讨论分析。     

浅谈猪流行性腹泻的综合防治

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的、以水样腹泻、呕吐、脱水和食欲下降为主要特征的、一种急性、高度接触性肠道传染病。该病对不同年龄阶段的猪群都易感,但主要引起哺乳仔猪(尤其是7日龄以内新生仔猪)和保育仔猪急性下痢、脱水、死亡,常造成繁殖猪群的重大经济损失。目前,通过免疫母猪,提高母源抗体来保护仔猪和通过腹泻病料返饲全群母猪,减少母猪群持续带毒、排毒是该病防控的有效方法。文章根据近年来PED在规模化猪场的发病及流行特点,结合部分猪场抗原抗体监测与临床防控实践,浅谈猪流行性腹泻的防治措施,为该病的综合防控提供参考。     

猪细小病毒SYBRGreenI实时荧光定量PCR方法检测不同接毒条件对病毒增殖效果的影响

为提高细小病毒（PPV）细胞培养的滴度,本试验通过对猪细小病毒（PPV）感染ST细胞接毒工艺各步骤的比较研究．从不同接毒方式、细胞接种量、病毒感作时间以及接种浓度等方面进行分析,利用猪细小病毒SYBRGreenI实时荧光定量PCR方法对病毒滴度进行检测。结果表明：ST细胞覆盖率接近单层时接毒,采用分步法接毒,以10^3倍稀释病毒接种,接种病毒后感作2h,将接毒后细胞维持液中血清浓度设为2％这5个方面的接毒工艺可提高PPV细胞培养的病毒滴度。     

溶血性大肠杆菌导致哺乳仔猪突然死亡的案例分析

大肠杆菌在相当长的一段时间内,一直被认为是非致病菌.直到20世纪中叶,才有科学家发现一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有致病性,尤其对幼畜,常引起严重腹泻和败血症.与动物疾病有关的病原性大肠杆菌分为5类:产肠毒素大肠杆菌、产类志贺毒素大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌、败血性大肠杆菌及尿道致病性大肠杆菌.随着工厂化养猪业的发展,病原性大肠杆菌给养猪业带来较大的损失,除造成仔猪黄痢、白痢以及水肿病外,大肠杆菌病还常发生于受免疫抑制性因素影响的各年龄段生猪.2014年2月衡阳某猪场10日龄以上哺乳仔猪出现突然死亡病例,笔者最后诊断为溶血性大肠杆菌导致哺乳仔猪突然死亡,猪场根据笔者建议采取了相关措施,现将诊断经历总结如下.     

一例猪增生性肠炎的PCR诊断

湖南株洲某猪场发生一起后备母猪以腹泻、拉酱色稀粪、皮肤苍白为主的疫病,通过临床症状和病理剖检初步诊断为猪增生性肠炎,最后通过PCR确诊为由胞内劳森菌引起的猪增生性肠炎。     

生猪蓝耳病的防控

猪繁殖呼吸障碍综合症（PRRS）3L称为猪蓝耳病,是由猪繁殖呼吸综合症病毒（PRRSV）引起的猪的一种传染病。1987年在美国首次发现该病,2006年我国部分省市猪群暴发蓝耳病并且大部分猪场同时继发了其它的各种疫病,对养猪业造成了很大的损失。笔者对蓝耳病防控措施进行了总结,现报告如下：     

规模猪场生产信息管理

规模猪场生产信息管理主要是指一个猪场运转资料的记载,如：疾病信息,母猪、公猪的档案信息等,这在养猪事业日益发展的今天已显得尤为重要。本人曾担任规模猪场场长4年,现主要重视动物传染病的教学与研究工作,与养猪朋友交流经验之际谈到猪场的信息管理,有些感想。现归纳如下．