4种砧木樱桃的抗旱生理特性及抗旱性评价

利用盆栽试验,研究4种砧木的甜樱桃嫁接苗的在干旱胁迫条件下的生理特性变化,用于筛选较耐旱的甜樱桃砧木品种。随干旱胁迫程度的增加,4种砧木嫁接苗叶片的过氧化氢和超氧阴离子的含量呈上升的趋势,上升幅度较大的是‘考特’品种,幅度最小的是‘本溪山樱’;质膜相对透性和脯氨酸含量呈上升趋势,相对透性‘考特’品种的增幅最大,‘本溪山樱’最小;脯氨酸含量‘本溪山樱’的增幅最大,其次为‘莱阳矮樱’、‘大青叶’、‘考特’。利用隶属函数法对材料进行抗旱性的综合评价,4种不同砧木樱桃的抗旱性由强到弱的顺序依次是‘本溪山樱’,‘莱阳矮樱’,‘大青叶’,‘考特’。     

野生小豆和栽培小豆microRNA全基因组鉴定与比较分析

microRNA(miRNA)是一种非编码的小RNA分子, 对真核生物基因表达起着非常重要的调控作用,miRNA系统鉴定对于研究其功能及作用机制具有重要意义。本研究分别以栽培小豆京农6号(JN6)和野生小豆CWA108为试验材料,进行了深度miRNA测序。系统鉴定和注释这2个物种的miRNA,并分析了其miRNA种类的异同、表达量的差异和靶基因在功能富集上的差别。鉴定出了JN6和CWA108共有和特有的miRNA,明确了它们之间差异表达的miRNA,以及这些特有和差异miRNA的靶基因在功能富集上的差异,发现可能和抗病与抗逆途径相关。     

玉米象线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅲ基因克隆与表达分析

【目的】克隆辣根素可能的作用位点——细胞色素C氧化酶亚基Ⅲ(COXⅢ)的全长cDNA,并对其进行序列分析及原核表达。【方法】在NCBI数据库中查找玉米象(Sitophilus zeamais)COXⅢ已知的部分序列,利用RT-PCR,结合RACE技术克隆获得玉米象COXⅢ全长序列;利用DNAMAN8.0、MEGA5.1、GENEDOC、Prot Param和Target P 1.1 Server等软件对该基因全长cDNA序列、系统进化关系、基本理化性质及其三维结构进行分析;将玉米象COXⅢ基因分别与载体p EASY-Blunt E1、pET28a、pET30a、p ET32a、pET42a连接,构建原核表达载体p EASY-Blunt E1-COXⅢ、pET28a-COXⅢ、pET30a-COXⅢ、p ET32a-COXⅢ、pET42a-COXⅢ并分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,在不同IPTG诱导浓度、温度以及时间内诱导融合蛋白表达,采用SDS-PAGE和Western blot(WB)对表达结果进行验证。【结果】获得的玉米象COXⅢ基因全长cDNA序列开放阅读框(ORF)为792 bp,编码263个氨基酸,编码的蛋白分子质量约为30 938.1 Da,理论等电点p I 6.51,预测分子式为C1492H2154N338O362S10,不稳定系数为34.49,总平均亲水系数为0.492,为疏水的稳定蛋白。系统发育树显示玉米象与鞘翅目象鼻虫科昆虫米象进化关系最近。原核表达结果表明,该蛋白在18℃、1 mmol·L-1 IPTG诱导24 h的条件下即能实现融合蛋白的表达,可溶性检测表明该蛋白主要以包涵体的形式存在;Western blot印迹检测证实大肠杆菌BL21(DE3)中表达了一个分子量约为62 k D的融合蛋白。【结论】成功从玉米象昆虫克隆得到COXⅢ全长cDNA序列,并实现了其编码蛋白的原核表达,可为后续探究玉米象COXⅢ功能和异硫氰酸酯类化合物对玉米象的作用机理提供理论依据。     

现代农业发展背景下的农民培育平台建设

本文结合崇信县新型职业农民培育的的实际情况,深入分析了新型职业农民培育中存在的突出问题,提出了今后培育新型职业农民的对策建议。     

茄子青枯病抗性遗传效应分析

【目的】解析茄子青枯病抗性遗传规律,为选育抗病杂交组合、优势育种及挖掘相关抗病基因提供理论支持与技术指导。【方法】以4份茄子种质(Y23、NO21、JA02和SG19)为亲本,通过Griffing完全双列杂交方法对各组合青枯病抗性进行配合力分析;分别构建2个杂交组合SG19×Y23和B1×BC03的6世代遗传群体(P₁、P₂、F₁、F₂、BC₁P₁和BC₁P₂),采用数量性状主基因+多基因世代联合分析法,对各世代青枯病抗性进行遗传模型分析。【结果】茄子青枯病抗性一般配合力远高于特殊配合力,说明抗性以加性效应为主,其次是非加性效应,受到细胞质基因遗传的影响较小;广义遗传力为69.8%,狭义遗传力为63.3%,说明茄子青枯病抗性的遗传不仅受遗传效应的影响,同时也受环境效应影响;抗青枯病的优良杂交组合为Y23×NO21和NO21×Y23;杂交组合SG19×Y23和B1×BC03的抗性均符合MX2-ADI-ADI遗传模型...     

草莓轻型黄边病毒北京分离物的CP基因序列分析

为了明确引起北京地区草莓病毒病的病毒种类和病毒序列的分子变异特点,从北京地区表现畸形症状的草莓叶片中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增得到草莓轻型黄边病毒(Strawberry mild yellow edge virus,SMYEV)的含有外壳蛋白(CP)基因的729 nt特异性核苷酸片段。经序列测定和分析可知,北京地区存在2种不同的SMYEV分离物（BJ1和BJ2）,两者间的核苷酸序列同源性仅为82.72%~82.96%。将北京分离物与分别来自德国、美国、智利、捷克、澳大利亚、比利时、意大利、韩国和中国沈阳等国家或地区的不同分离物的CP基因序列进行分析比较。结果显示,33个分离物可以分为四大组群,BJI和BJ2分别归属不同组群,BJ1与19个其他国家的分离物亲缘关系较近,BJ2与中国沈阳的2个分离物亲缘关系较近。BJ1和BJ2与其他分离物的CP基因核苷酸序列同源性分别为81.10%~98.35%和82.03%~98.63%,氨基酸序列同源性介于82.17%~99.17%和90.91%~94.63%。     

中国樱桃不同品种开花生物学特性及花粉萌发研究

对浙中山区主栽的3个中国樱桃品种‘短柄’、‘黑珍珠’、‘大鹰嘴’的开花物候期、花器官、果实性状进行了观察。结果表明：3个品种开花物侯期有明显差异,‘大鹰嘴’花期最早,‘短柄樱桃’最晚。不同品种的雌蕊长度和子房直径无显著差异,花瓣颜色、形状、花冠大小差异显著,花粉量也存在显著差异。花冠直径与单果重存在明显的相关关系。对短柄樱桃花粉萌发率、花粉管伸长速率进行研究表明,蔗糖对于维持樱桃花粉外界环境渗透压作用很明显,添加适量的硼酸有利于离体花粉的萌发。当蔗糖的浓度为30g／L,硼酸的浓度为0-3％时短柄樱桃花粉内外的渗透压保持平衡,离体萌发率最高。通过温度试验表明,在25℃条件下花粉萌发率和花粉管伸长速率均达到最高,说明早春低温不利于中国樱桃花粉萌发、影响授粉受精。     

不同激活方式对小鼠卵母细胞孤雌胚形成及其发育的影响

为探讨不同激活方式对小鼠卵母细胞孤雌胚形成及其发育的影响,用乙醇、Ca-A23187、SrCl2、乙醇与6-DMAP和CB及Ca-A23187＋CHX＋CB分别对小鼠卵母细胞进行了激活处理。结果显示,7％乙醇激活小鼠卵母细胞时．以7min的激活效果及孤雌胚发育较好,以形成单倍体胚为主,桑囊胚发育率可达30.00％：用SrCl2激活小鼠卵母细胞时,6或10mmol／L为最佳处理浓度,激活后大部分为二倍孤雌胚,桑囊胚发育率可迭27．97％：以7％乙醇激活5min．再用2mmol／L 6-DMAP＋5μg／mL CB激活3h效果最佳,能形成1个原核,桑囊胚发育率高达38．64％。小鼠卵母细胞经乙醇或Ca-A23187、6-DMAP和CB等联合激活后能较好地发育。     

动物性食品中磺胺二甲嘧啶残留酶联免疫吸附测定法复核实验研究

为确保公司出栏前鸡肉中磺胺二甲嘧啶残留不超标,同时减少实验室的劳动强度,提高工作效率,节约检验费用,特进行动物性食品中磺胺残二甲嘧啶残留酶联免疫吸附测定法复核试验,以确认公司是否可以用北京望尔生物技术有限公司研制的磺胺二甲嘧啶试剂盒做为出栏前的筛选试验.试验分别用酶联免疫吸附试验及液相色谱法对试剂盒的灵敏度、准确度和精密度以及与仪器方法 的对比实验进行了测试.结果 表明:试剂盒IC50平均值为2.78 μg/L,波动范围在2.09~3.45 μg/L之间.鸡肉最低检测限为1.07 μg/kg.经测定磺胺二甲基嘧啶添加的回收率范围为73.2%~112.8%,批内变异系数在5.2%~13.4%之间.与仪器方法 相比较,望尔试剂盒的准确度与仪器检测结果 相同,阴阳性符合率为100%,且前处理方法 简单.经验证,该方法 可用于磺胺二甲嘧啶残留的筛选检测.     

表达带His-tag的禽流感病毒HA基因杆状病毒转移载体的构建及重组病毒的鉴定

经RT-PCR扩增了禽流感病毒A／Goose／GuangDong／1／96（H5N1）1．7kb HA基因的eDNA将其克隆到pMD18-T中并测序。在去除编码HA信号肽的核苷酸序列后，亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis4．5，筛选到重组质粒命名为rpBacHisH5HA。测序正确后，在脂质体介导下，与线性化的杆状病毒ENA（Bac-N-Blue TMDNA）共转染Sf9昆虫细胞，挑取蓝色蚀斑，经3轮蚀斑纯化，获得数株重组杆状病毒rBacHisH5HA。提取重组病毒DNA经PCR证明目的基因片段已插入杆状病毒基因组。