浙江省红火蚁发生防控现状与未来对策思考

浙江省红火蚁主要通过花卉苗木从外省传入,发生面积大,蚁巢密度高,发现时间较晚,蚁巢数量与形态受生境影响。采取的疫情防控主要措施有启动应急处置预案,开展普查与应急防控,做好染疫苗木检疫监管,加强宣传培训与技术研究。提出政府主导是保障,科学防控是关键,疫情监测是基础,加强检疫保长效的未来防控工作等对策。     

Percoll分离法与多重PCR快速检测肉品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌

为从食品中有效分离致病菌,去除PCR反应的抑制因子,提高多重PCR检测灵敏度,本研究利用Percoll密度梯度离心的前处理法从鲜肉样品中高效分离沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌,以沙门氏菌invA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因和志贺氏菌ipaH基因为靶基因,经过PCR分别扩增出255 bp、506 bp、620 bp的DNA片段,DNA测序证实这些片段为目的扩增产物。该体系检测猪肉匀浆液中3种致病菌的灵敏度为6.2×103 cfu/mL、1.2×103 cfu/mL和2.4×103 cfu/mL,检测时间约6 h。Percoll前处理法与多重PCR检测肉中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌为同时检测肉类样品中多种致病菌提供了有效的检测方法。     

1株感染洛氏鱥呼肠孤病毒的分离与培养

利用细胞培养技术从养殖发病洛氏鱥中分离出1株病毒,经人工感染试验、电镜观察、核酸基因组SDS-PAGE电泳、RT-PCR检测确认为呼肠孤病毒。人工感染发病的症状与自然发病症状相同;病毒感染可使鲤鱼上皮瘤细胞(EPC)产生典型细胞病变效应,收集细胞上清,负染后电镜下可观察到大小均一,直径约70nm,近球形,无囊膜结构的病毒粒子,初步判断为呼肠孤病毒;病毒基因组SDS-PAGE结果表明,病毒基因组由11个分段的RNA核酸片段组成,为典型的水生呼肠孤病毒核酸带型。病毒基因组S10节段RT-PCR结果表明,有特异性条带,其与GenBank中登录的呼肠孤病毒S10节段(JN206665.1)序列同源性为91%,该分离株应为呼肠孤病毒,本研究首次在洛氏鱥鱼内分离到呼肠孤病毒。     

中国粳稻春江06抗白背飞虱的系谱分析

对中国粳稻春江06的抗白背飞虱特性进行系谱分析表明,春江06对白背飞虱的拒取食和杀卵抗性均来源于秀水620.秀水620的亲本中,只有秀水04具有较强的拒取食抗性,但没有杀卵抗性.在祥湖24中检测到明显的杀卵反应.亲本秀水04、单209和辐农709具有拒取食抗性,但测21没有.单209和辐农709的共同亲本农虎6号也具有拒取食抗性.然而,农虎6号、农垦58(日本粳稻)和老虎稻(中国粳稻地方品种)不具有拒取食抗性,在田间表现出感虫性.农虎6号、单209、辐农709和秀水04表现出稳定的田间抗性.春江06育种中的两个籼稻品种IR26和IR28高感白背飞虱,既无拒取食抗性,也无杀卵作用.     

靶向S基因外源性microRNA抑制TGEV增殖效果的研究

应用生物信息学软件对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因进行分析,筛选出可能与S基因有相互作用的外源miRNA:amiRNA-S-28035,amiRNA-S-28038,amiRNA-S-28165。之后,利用脂质体将构建好的相应的表达载体瞬时转染至PK-15细胞;通过Q-PCR和间接免疫荧光方法检测其对S基因的抑制作用;CPE分析和TCID50测定检测其对TGEV增殖的抑制效果。结果发现,3个外源性miRNA均降低了S基因mRNA的转录和蛋白的表达,其中amiRNA-S-28038对TGEV mRNA的平均抑制率可达64.6%,最高可达69.9%,表明外源性microRNA可以通过靶向TGEV基因组来抑制TGEV的复制。研究结果为猪传染性胃肠炎的预防和治疗提供了新的思路。     

鲤鱼春季病毒血症病毒磷蛋白基因的克隆与原核表达

【目的】克隆鲤鱼春季病毒血症病毒（SVCV）的磷蛋白（P蛋白）基因,并对其进行原核表达,为进一步制备SVCV-P蛋白单克隆抗体及建立新的SVCV诊断方法奠定基础。【方法】采用RT-PCR方法扩增SVCV P蛋白基因,将其克隆入pET-28a(＋)载体中,获得原核重组表达质粒pET28-P,进行原核表达。将该重组原核表达质粒转化至大肠杆菌Rosetta感受态细胞中,用0.4 mmol/L IPTG进行诱导表达,用镍亲和层析试剂盒对表达产物进行纯化,分别用SDS-PAGE和Western Blotting方法对表达产物进行鉴定。【结果】成功克隆了SVCV-P蛋白基因,该基因长度为933 bp。成功构建了原核重组表达质粒pET28-P,其诱导表达产物分子质量约为37 ku;表达的重组P蛋白可被SVCV阳性血清所识别。【结论】成功克隆了SVCV P蛋白基因,获得了分子质量约为37 ku的重组P蛋白。     

B细胞淋巴瘤-2家族蛋白与细胞凋亡简

细胞凋亡是由多基因控制的细胞自主有序的死亡,以维持内环境稳定。其在多细胞生物的组织分化、器官发育、机体稳态的维持中有重要意义。细胞凋亡可促进因感染、损伤所致的细胞死亡并被机体清除,临床上细胞凋亡与许多疾病有直接关系。B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）家族蛋白是参与细胞凋亡的重要调节分子,既可抑制也可促进细胞凋亡。作者概述了Bcl-2蛋白家族成员、结构特点、Bcl-2蛋白家族与细胞凋亡的关系及生物学意义。     

一起猪瘟与牛病毒性腹泻混合感染猪的报道

猪瘟病毒 ( HCV)和牛病毒性腹泻病毒( BVDV)同属黄病毒科瘟病毒属成员。猪瘟是我国猪的最重要传染病之一。近些年来 ,其流行特点出现新的变化 ,以温和型、母猪繁殖障碍及新生仔猪死亡的猪瘟为多见 ,常发生于“免疫”猪群 ,呈现免疫失败现象。牛病毒性腹泻病毒除了引起牛发生黏膜性腹泻外 ,还可引起羊、鹿、猪及许多野生动物感染。一般情况下 ,猪感染 BVDV不表现牛病毒性腹泻的临床症状而呈现亚临床感染 ,其症状和病理变化类似温和型猪瘟。我国自 1 981— 1 987年在全国 2 9个省市共查出阳性牛血清 8万多头份 ,表明 BVDV已遍及全国。因…     

致病性嗜水气单胞菌气溶素基因PCR检测方法的建立

[目的]建立一种基于PCR的致病性嗜水气单胞菌的检测方法。[方法]采用平板划线法从患病鲫鱼病灶部位分离、纯化获得嗜水气单胞菌,采用CTAB法提取DNA,根据GenBank已经登录的致病性嗜水气单胞菌气溶素基因保守序列设计引物P1和P2,并以P1、P2为引物对其进行PCR扩增,将测序结果在Blast上进行比对分析。[结果]PCR扩增得到一条约540 bp的条带,Blast分析表明该基因与GenBank登录的气溶素基因的同源性达95.67%。[结论]试验建立的致病性嗜水气单胞菌气溶素基因PCR检测方法简单、可行。     

鲤春病毒G蛋白基因实时荧光定量RT-PCR标准曲线的构建

为了更加精确地对鲤春病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)进行定量检测,试验以Taq Man探针法为基础,提取鲤春病毒总RNA,反转录为cDNA后进行PCR扩增,得到目的条带并回收,将目的片段与pMD18-T载体连接导入大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取质粒并进行实时荧光定量RT-PCR测定,利用反应得到的Ct值与各浓度梯度质粒模板拷贝数的对数值绘制标准曲线。结果表明:以鲤春病毒cDNA为模板进行PCR扩增,获得清晰的目的条带,与预期相同;对鲤春病毒G蛋白重组质粒进行实时荧光定量RT-PCR扩增,所得扩增曲线有较好的重复性,各浓度梯度扩增曲线有明显的规律性,低浓度质粒模板扩增明显;获得的标准曲线有明显的线性关系,曲线回归系数为0.992。说明实时荧光定量RT-PCR方法敏感性较高、稳定性好、可靠精确,可以作为鲤春病毒检测的定量方法。