猪源冠状病毒监测简报

目前,已知感染猪群的冠状病毒有6种,分别是猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪呼吸道冠状病毒(PRCV)、猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)、猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)和猪δ冠状病毒(PDCoV)。在冠状病毒科α、β、γ、δ等4个属中,PEDV、TGEV、PRCV、SADS-CoV均为α冠状病毒,PHEV为β冠状病毒,PDCoV为δ冠状病毒。PRCV在临床上引发仔猪呼吸道症状,PHEV感染会造成仔猪呕吐和神经症状,其他4种病毒均可引起猪群腹泻。中国动物卫生与流行病学中心对2011年以来收集自全国16个省份的2 915份临床腹泻猪群样品(肠道、粪便等)进行了PEDV、TGEV检测,检出PEDV阳性1 223份、TGEV阳性109份,PEDV、TGEV检出率分别为41.96%、3.74%;对2014年以来收集自14个省份的12 430份临床健康猪组织样品(淋巴结、扁桃体等)进行了PEDV检测,检出阳性325份,检出率为2.61%。针对引发新型冠状病毒肺炎的病原2019新型冠状病毒(2019-nCoV),对2018—2019年收集自15个省份的2 658份生猪组织样品开展了追溯性检测,结果均为阴性。对2019-nCoV与猪源冠状病毒的亲缘关系进行了分析。基于全基因组的遗传进化分析表明:2019-nCoV与同为β冠状病毒属的PHEV核苷酸同源性仅为54%,与α、δ属猪源冠状病毒亲缘关系更远。基于以上数据与分析,可初步排除2019-nCoV来源于已知猪源冠状病毒的可能性。     

家禽和生猪健康促进策略研究

近年来,我国家禽和生猪产业发展迅速,家禽存栏占全球的28%,其中水禽占80%左右;生猪存栏量约占全球总量的50%,猪肉产量约占全球总量的46%。促进家禽和生猪健康,对保障畜牧业持续发展,提高人民群众生活水平至关重要。20世纪初以来,美国启动了家禽改良计划和猪瘟等猪病消灭计划,家禽和生猪健康水平不断提高,对我国具有重要借鉴意义。本课题旨在借鉴美国家禽和生猪疫病控制计划,结合我国畜禽疫病防控现状,提出促进我国家禽和生猪健康的有关疫病防控策略。     

PRRSV和PCV-2二重PCR检测方法的建立及初步应用

参考GenBank上已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2基因序列和猪圆环病毒2型ORF1基因序列,分别设计并合成了可用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的2对引物,扩增目的片段大小分别为421 bp和714 bp。在建立了用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的单项PCR检测方法并优化单项PCR条件的基础上,建立了针对两种病毒的二重PCR检测方法。通过检测143份临床病料对二重PCR方法和单项PCR/RT-PCR方法进行了对比验证。结果显示,两者的总符合率在92.6%以上,表明该二重PCR检测方法可以用于临床病料的检测。     

中药渣发酵菌剂筛选及发酵工艺优化效果研究

试验旨在筛选中药渣的适宜发酵菌剂并建立最佳发酵工艺,用来提高发酵中药渣中营养成分和生物活性成分含量。试验包含三个部分。试验一：采用单因素试验设计,利用植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum,Lp）、酵母菌（Saccharomyces cerevisiae,Sc）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis,Bs）对中药渣进行单一菌剂、等比例两两复合和三者复合发酵,通过常规养分含量测定对其发酵效果进行营养价值评价,并筛选出适宜的发酵菌剂及复合类型。试验二：采用双因素试验设计,筛选发酵菌剂的最优添加比例。试验三：采用正交设计试验,分析初始水分含量（45%、50%、55%）、发酵温度（35、37、40℃）及发酵时间（24、48、72 h）对最优发酵剂处理后药渣内营养成分和生物活性成分含量变化的影响,优化工艺参数。结果表明：最优菌制剂为植物乳杆菌与枯草芽孢杆菌等比例组合,其最优添加比例为1∶1;最佳发酵工艺条件为初始水分含量为55%,发酵温度为37℃,发酵时间为72 h。黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)和呕吐毒素（Deoxynivalenol,DO...     

猪流行性腹泻新毒株的分离鉴定和致病性研究

为探明2011年我国猪群仔猪腹泻的病因,采用巢式RT-PCR方法对河南和辽宁省2个规模猪场采集43份出现腹泻的粪便进行猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和轮状病毒（PRoV）的检测,结果表明：43份腹泻样品均为PEDV,没有检测出TGEV和PRoV。对扩增的PEDV进行测序和分析显示,这些PEDV流行毒株均属于基因G2.3亚型,彼此之间的同源性高达99.2%～100%,与2011年韩国和2008年泰国流行的PEDV毒株同属于一个进化分支。将其中3份病料在Vero细胞传代后接种2日龄仔猪,结果发现接种后13～57h内仔猪全部死亡,接种仔猪呈现典型的腹泻症状和病理变化特征,提示了这些PEDV流行毒株具有较强的致病性。     

猪全血中多种病原流行病学监测的初步研究

本文利用PCR或RT-PCR技术连续两年对规模猪场采集的猪全血分别进行猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖障碍综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）和日本乙型脑炎病毒（JEV）的检测,结果发现2008年猪全血中CSFV、PRRSV、PRV、PCV2的感染率为30.0%、50.0%、4.0%和30.0%,2009年猪全血中CSFV、PRRSV、PRV、PCV2、BVDV和JEV的感染率分别为19.8%、13.7%、1.1%、31.9%、0.7%和2.7%,这表明用猪的全血可进行猪瘟等6种疫病的监测和流行,为更深入研究疫病的流行病学奠定了基础。     

2010年-2011年我国五省PRRSV分离株ORF5基因遗传变异分析

为了解2010年-2011年间我国5省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的分子生物学特性及变异规律,应用Mcar-145细胞分离得到15株PRRSV,通过RT-PCR方法对15株PRRSV的ORF5基因进行扩增和序列分析.依据NCBI所下载的标准序列设计一对引物,对ORF5全长进行扩增(603 bp),分离株之间的核苷酸同源性为98.8％～99.9％,核苷酸推导的氨基酸同源性为95.5％～99.5％.15株PRRSV分离株与美洲型的PRRSV同源性较高,可推断均属美洲型.其中9株ORF5(151)氨基酸位点发生与HB-1相同的变异,即R151-K151,其余6株ORF5 (151)氨基酸位点与JAX1相同,即ORF5(151)为R.系统进化树表明,BFLN3-2010、BFSD1-2011和BFAH2-2011 3株与CH-1a在同一分支,属于第2亚群,BFLN2-2010等12株与JAX1在同一分支,属于第4亚群.     

我国猪群疫病流行动态分析

通过流行病学调查与实验室检测分析,认为2016年我国猪群疫病总体平稳,流行强度保持着连续四年持续下降的态势.临床常见疫病有8种,主要疫病群流行率呈下降趋势;不同区域以及不同规模养殖场的疫病流行状况存在一定差异;临床健康猪群带毒率虽持续下降,但仍然偏高.结合以往调查监测数据与疫病的流行病学特点,提出2017年我国猪群疫病流行动态预警.     

用ELISA鉴别蓝舌病(BT)和鹿流行性出血病(EHD)血清抗体

被检血清经EHD抗原吸收处理后,EHD阳性样品的A_(490)下降均值为71.72%,而BT阳性样品的A_(490)下降均值仅24.72%,两种样品的临界值相距悬殊,区别明显,可望用本法来鉴别这两种抗体。