猪Cystatin B基因cDNA克隆及遗传多态性分析

【目的】研究猪肉嫩度性状候选基因－半胱氨酸蛋白酶抑制素B（Cystatin B,CSTB）基因对肌肉宰后嫩化的作用,为研究嫩度性状的遗传机理提供理论基础。【方法】采用RT-PCR结合克隆测序的方法,从猪肌肉组织总RNA中克隆到猪CSTB基因cDNA序列,并推导出其编码的氨基酸序列。采用PCR-RFLP方法,分析了84头猪CSTB基因多态性及其与嫩度性状的关联性。【结果】CSTB基因开放阅读框全长294 bp,编码98个氨基酸。同源性分析结果表明,猪与人、鼠、牛的CSTB基因cDNA编码区（CDS）同源性分别为81%、85%和89%,推测氨基酸序列同源性为83%、76%和85%。蛋白质结构同源建模分析表明,该蛋白与人、鼠Cystatin B类似,具有stefin类蛋白酶抑制剂的典型空间结构,包括5条平行的β-sheet和负责与被抑制酶结合的楔形边缘。在CSTB基因第二内含子内PvuⅡ酶切位点检测到了AA、AB和BB这3种基因型,关联性分析表明AA基因型个体的各项嫩度指标均极显著低于另2种基因型的个体（P＜0.01）,最大剪切力为5.11 kg,硬度值为19.31 kg•s、平均剪切力为3.26 kg。【结论】CSTB基因在不同物种间具有较高同源性,猪CSTB基因多态性与猪肉嫩度性状显著相关。     

基于恢复生态学的高陡岩质边坡生态修复与景观重建工程实践——以深圳市下角山边坡修复为例

高陡岩质边坡生态修复是一个综合多学科的复杂过程,本文以下角山边坡修复项目为例,针对高陡岩质边坡的特点,以恢复生态学理论为指导,分析探讨了V型槽、挂网+生态棒+团粒基质喷播、土工格室、团粒基质喷播等边坡复绿措施,并在工艺、景观设计方面进行了创新,可供行业类似的边坡修复项目借鉴.     

东北地区固有畜力(耒不)沟器作业性能的分析和机力(耒不)沟器的设计研究

垅上播种是东北垅作地区应用最广泛的播种方法之一。它又分为原垅播种((耒不)种,主要用于高粱和谷子)和新垅播种(耥种和埯种,主要用于大豆和玉米)。随着农业技术改造的发展,另一种应用尚比较广泛的扣种可能逐步被耥种和埯种所取代。为了设计一种能进行(耒不)种、耥种和埯种的垅上播种机,首先需在继承固有畜力开沟器((耒不)耙心子)优点的基础上研究出适合机械作业特点的(耒不)沟器。     

猪Toll样受体7 cDNA的克隆及序列分析

本研究应用RT—PCR和RACE技术从肠系膜淋巴结组织总RNA中克隆出猪Toll样受体7（Toll—likere—ceptor7,TLR7）的cDNA序列。分析结果表明,克隆到的序列全长3834bp（GenBank登录号：EF469730）,其3150bp的开放阅读框编码1050个氨基酸残基的猪Toll样受体7蛋白。推导的氨基酸序列分析显示,在猪TLR7的胞外区,具有LRR-RI结构域,胞内具有TIR结构域,表现出典型的TLR家族结构特征,同源性分析结果显示,TLR7在进化过程中具有高度保守性,与牛、狗、人、猫和小鼠的氨基酸序列同源性分别为90．8％、87．4％、84．9％、86．7％和78．2％。     

大河猪与大河乌猪的肌肉营养成分分析

以中国地方猪种大河猪和以大河猪为母本选育形成的培育品种大河乌猪为研究对象,研究了2个猪种肌肉的氨基酸和脂肪酸组成情况。结果表明:以肉质性状优良闻名于世的大河猪及含有大河猪血缘的大河乌猪肌肉中有丰富的氨基酸含量。其中含量最多的是谷氨酸,2个品种的肌肉中分别达到12.12%和12.32%。含量最少的是蛋氨酸和脯氨酸,2个品种肌肉中蛋氨酸含量分别为1.75%和1.79%,脯氨酸分别为2.54%和2.57%。两品种间各种常见氨基酸的组成差异均不显著(P>0.05)。对肌肉中脂肪酸组成的分析结果表明,2个实验猪种在肌肉中脂肪酸总量、饱和脂肪酸以及不饱和脂肪酸含量等各方面指标都较高,尤其是单不饱和脂肪酸含量的比例较高,这说明其营养价值和食用品质高,也部分解释了中国地方猪种肉脂特性优良的形成原因。     

盐酸克伦特罗在雅南猪和长雅猪肝脏中残留的研究

盐酸克伦特罗(Clenbuterol ,CLB),俗称瘦肉精,用于治疗人和动物的阻塞性支气管哮喘.20世纪80年代,美国Cyanamid公司意外发现CLB具有明显的促进生长、提高瘦肉率及减少脂肪的效果,于是CLB作为"营养重分配剂"和"促生长剂"被广泛应用于畜禽生产中.     

miR-181a和miR-181d-5p对猪前体脂肪细胞成脂分化调控的研究

【目的】 探究miR-181a和miR-181d-5p在荣昌猪原代前体脂肪细胞分化中的作用及机制。【方法】 通过比对种子序列差异分析miR-181a和miR-181d-5p在猪、人、大鼠和小鼠不同物种间的序列保守性;实时荧光定量PCR检测miR-181a和miR-181d-5p在猪肌肉和背部皮下脂肪组织中表达;利用miRandn和TargetScan在线软件预测miR-181a和miR-181d-5p的靶基因,并进行GO和KEGG富集分析;使用RNAhybrid在线软件预测miR-181a和miR-181d-5p与其靶基因的结合自由能。取7日龄雄性荣昌猪背部皮下脂肪组织分离原代前体脂肪细胞。分别设计miR-181a和miR-181d-5p的靶基因野生型和突变型载体,并与对应的miRNA共转染前体脂肪细胞,进行双荧光素酶报告基因试验验证miRNA与靶基因的靶标关系,测定miR-181a和miR-181d-5p与其靶基因的结合情况。构建miR-181a和miR-181d-5p的模拟物（miR-181a mimics、miR-181d-5p mimics）、抑制物（miR-181a inhibitor、miR-181d-5p inhibitor）、阴性对照（NC）及其靶基因的干扰siRNA （Gene-siRNA）,转染细胞6 h后进行诱导分化。6 d后,分别对不同处理的细胞通过实时荧光定量PCR检测基因表达情况,油红O染色鉴定甘油三酯生成情况。【结果】 保守性分析结果表明,miR-181a和miR-181d-5p在猪、人、大鼠和小鼠间具有高度序列保守性;miR-181a与miR-181d-5p在猪不同组织中定量结果显示,miR-181a与miR-181d-5p在猪脂肪组织中特异性高表达;靶基因预测结果表明,miR-181a与miR-181d-5p的靶基因分别为线粒体甘油3-磷酸脱氢酶（GPD2）和环腺苷酸反应元件（CREB1）;GO和KEGG功能富集分析发现,miR-181a和miR-181d-5p的靶基因可以抑制甘油三酯生成,调节脂肪细胞分化,且miR-181a和miR-181d-5p与其靶基因的自由结合能均<－87.8 kJ/mol;双荧光素酶报告基因试验结果表明,转染miR-181a与miR-181d-5p的mimics可以极显著抑制靶基因3'-UTR野生型双荧光素酶报告载体中的荧光素酶活性（P<0.01）,但不影响靶基因突变型双荧光素酶报告载体中的荧光素酶活性。诱导分化结果表明,与未分化脂肪细胞（0 d）相比,miR-181a表达量在分化的第4天显著升高（P<0.05）,到第6天达到极显著差异（P<0.01）;miR-181d-5p及GPD2和CREB1基因表达量在分化的第4、6天均极显著升高（P<0.01）。miR-181a和miR-181d-5p的细胞转染试验均得到相似结果,与NC组相比,mimics组miR-181a与miR-181d-5p的表达量均极显著上升（P<0.01）,inhibitor组miR-181a与miR-181d-5p表达量均极显著下降（P<0.01）;mimics和siRNA组的GPD2与CREB1基因表达量均极显著下降（P<0.01）,inhibitor组GPD2与CREB1基因表达量均极显著上升（P<0.01）;mimics和siRNA组PPARγ和C/EBPα基因的相对表达量均显著或极显著上升（P<0.05;P<0.01）,inhibitor组PPARγ和C/EBPα基因的表达量均显著下降（P<0.05）;油红O染色结果表明,与NC组相比,mimics和siRNA组细胞脂滴数目增加,inhibitor组细胞脂滴数目减少。【结论】 miR-181a和miR-181d-5p可以分别靶向结合GPD2和CREB1基因3'-UTR区域序列,降低GPD2和CREB1基因的表达,促进猪前体脂肪细胞成脂分化。     

猪ESR基因与产仔数的遗传联系研究进展

在猪的高繁殖力特性研究中证实，雌激素受体(ESR)基因是可影响产仔数1—1．5头的主效基因。本文对ESR基因的结构、多态性与产仔数相关的研究进展以及在生产上的应用前景作一综述。     

二元杂交商品猪胴体性状的相关及通径分析

以100头二杂商品肉猪为研究对象,利用相关分析和通径分析确定了影响二杂商品肉猪瘦肉率的主要胴体性状是眼肌面积、胴体长和平均背膘厚。3个性状对瘦肉率单独作用的决定系数分别为0.509 1、0.057 1和0.055 0。此外,眼肌面积和平均背膘厚间的互作效应对瘦肉率产生的共同决定系数为0.201 5。利用多元逐步回归分析的方法获得了估测二杂商品肉猪胴体瘦肉率的最优回归方程。