燕麦镰孢菌环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立与应用

为了明确燕麦镰孢菌（Fusarium avenaceum）快速检测方法,以荧光染料SYBR Green I为指示剂,以燕麦镰孢菌（F.avenaceum）的ITS序列为目的DNA片段,应用LAMP设计软件设计4条引物,优化LAMP反应体系和反应条件,用2%琼脂糖凝胶电泳和LAMP反应液颜色变化进行特异性和灵敏度验证,同时进行田间发病组织检测和土壤燕麦镰孢菌灵敏度验证。结果表明：优化的LAMP反应体系,最佳反应温度为65℃,反应程序为65℃下1 h,80℃下20 min。特异性检测结果表明,燕麦镰孢菌LAMP检测均呈黄绿色（阳性）,对照和其他病原菌均呈橘色（阴性）。灵敏度验证结果表明,LAMP反应液检测灵敏度在DNA水平达到10 pg·μL^-1,每克土壤中检测的灵敏度为40个燕麦镰孢菌孢子。对采自甘肃省甘南州卓尼县和临潭县的20份疑似病害样本提取的DNA进行检测,其中13份为阳性,表明该技术能够有效的检测出青稞发病组织中的燕麦镰孢菌。本方法的建立与应用能为燕麦镰孢菌的检测及其青稞茎基腐病的诊断提供一种新技术。     

河西干旱灌区洋葱根际寄生线虫种类与种群密度动态研究

2008年3-9月,对甘肃省嘉峪关市新城镇洋葱根际的植物寄生线虫进行了调查.结果表明:从洋葱根际土壤样品中共分离鉴定出线虫5个属5个种,包括喜悦平滑垫刃线虫、普通丝尾垫刃线虫、双角螺旋线虫、最大矮化线虫和燕麦真滑刃线虫.其中,喜悦平滑垫刃线虫、普通丝尾垫刃线虫、双角螺旋线虫和最大矮化线虫是在甘肃省洋葱土壤中首次发现;明确了洋葱膨大期为植物寄生线虫发生的高峰期,而燕麦真滑刃线虫为该地区的优势种,密度达到58头.(100mL)-1,占同期线虫总量的64%.     

豌豆属种质资源遗传多样性的ISSR分析

用ISSR标记技术对来自国内外的73份豌豆材料进行遗传多样性分析,结果表明,100个ISSR引物中共筛选出11个多态性明显、条带清晰、反应稳定的引物,73份材料DNA共扩增出91条条带,其中78条为多态性条带,平均每个引物扩增的条带数为8.2条,多态性比率为86.4%。Shannon多样性指数平均为0.420 2,每个位点的有效等位基因数为1.451 8,品种间遗传相似系数变幅为0.406 5～0.934 0,表现出丰富的遗传多样性。利用UPGMA聚类分析,以遗传相似系数0.52为界限,73份材料划分为5类,聚类基本符合地理来源相近的材料聚为一类,呈现出一定的地域性分布规律。     

4种禾谷孢囊线虫基因组DNA提取方法的比较和改进

用SDS-蛋白酶K裂解法(SDS-PK)、TE-蛋白酶K裂解法(TE-PK)、PCR buffer-蛋白酶K裂解法(PCRB-PK)和盐酸胍裂解法(Gu.HCl)提取禾谷孢囊线虫单个孢囊基因组DNA,以提取得到的基因组DNA为模板PCR扩增核糖体DNA(rDNA)片段,以扩增成功率和效率来反映基因组DNA提取的质量.结果表明:在所选的4种方法中,SDS-PK法扩增成功率最高,达85.71%,Gu.HCl法次之,TE-PK法最低.经微波裂解后,4种方法的DNA提取的成功率均有提高,其中微波裂解SDS-PK法为禾谷孢囊线虫单胞囊DNA提取的最优方法,PCR成功率可达96.97%.     

嘉峪关市洋葱根际土壤线虫种类与种群密度 动态变化规律

对甘肃省嘉峪关市洋葱根际土壤线虫种类及其在洋葱生长期间的种群密度动态进行了研究,
结果表明,从洋葱根际土壤样品中共分离到植物寄生线虫2 目4 科5 属,非植物寄生线虫3 目5 科12 属。
各类线虫在洋葱移栽前数量最少,在洋葱鳞茎膨大期数量最多。燕麦真滑刃线虫（Aphelenchus avenae）
是该地区洋葱根际土壤植物寄生线虫的优势种,中杆属线虫（Mesorhabditis spp.）为该地区洋葱根际土壤
非植物寄生线虫的优势种。在洋葱的各个生长时期,洋葱根际土壤中非植物寄生线虫的密度均大于植物寄
生线虫。瓦斯乐斯卡指标（WI 值）为8.09,表明甘肃省嘉峪关市洋葱种植田土壤健康指数较高,土壤健
康状况良好。     

甘肃中部地区亚麻枯萎病病原菌及其致病性差异研究

从亚麻根部分离到尖孢镰刀菌（F．oxysporum）、茄病镰刀菌（F．solani）、串珠镰刀菌（F，moniliforme）、半裸镰刀（F．semitectum）、砖红镰刀（F．lateritium）5个种的101个菌株。依据柯赫式法则．确定其病原菌为尖孢镰刀菌。利用盆栽法做致病性测定，结果表明87个镰刀菌菌株的致病性差异显著。     

青海省青稞根腐病调查及病原菌鉴定

为明确青海省青稞根腐病发生情况及其病原菌,于2016年6—9月对青海省海北藏族自治州海晏县、刚察县,海东市互助土族自治县苗期及成株期青稞上根腐病发生情况进行调查,采集19份根腐病样品,采用常规组织分离法对样品进行分离,并对分离菌株进行致病性测定,通过形态学特征及分子生物学方法对其进行鉴定。结果显示,青海省青稞根腐病分布广泛,发病率较高,为10%～20%;发病植株长势弱、发黄,茎基部缢缩腐烂,穗白粒瘪,茎秆发褐或黑红;19份样品中共分离纯化得到93株病原菌菌株,其中73株为燕麦镰孢Fusarium avenaceum,9株为木贼镰孢F. equiseti,11株为锐顶镰孢F. acuminatum;木贼镰孢的绝对病情指数最强,为79.43,燕麦镰孢次之,为50.90,锐顶镰孢最弱,为23.70,各病原种间及种内致病性差异显著。根据分离率及各病原菌致病性综合确定燕麦镰孢为青海省青稞根腐病的优势病原菌。     

青稞根腐病生防放线菌的筛选及防效研究

为获得防治青稞根腐病的生防放线菌,从大田采集健康青稞植株及其根际土壤,利用选择性培养基对青稞根表及根际土壤进行放线菌分离筛选;以青稞根腐病原菌木贼镰孢为靶标,利用平板对峙法进行初筛,选取平均抑菌圈大于20 mm的放线菌,用发酵液法进行复筛并计算其生长抑制率;采用盆栽法测定生长抑制率较高菌株的防效及致病性,并通过分子鉴定确定其分类地位。结果表明,从初筛得到16株抑菌圈大于20 mm的放线菌中,复筛得到2株对青稞根腐病生长抑制率大于70%的菌株,分别为H35-1和AP11;测定其对青稞根腐病的防效发现,H35-1的防效为30.74,AP11的防效为48.31。对防效较好菌株AP11的16S rDNA序列进行测定并构建系统发育树发现,其与酸疮痂链霉菌(Streptomyces acidiscabies)的遗传距离为零,1 000次重复自展支持值为100,鉴定其为酸疮痂链霉菌。致病性分析发现,该酸疮痂链霉菌不具有致病性。本研究为青稞根腐病生防菌剂的研制提供了菌种资源,为青稞根腐病生物防治提供参考。     

洋葱贮藏期主要病害研究进展

介绍了洋葱贮藏期的主要真菌病害及主要细菌病害,分析了贮藏期洋葱病害的发生特点,提出了综合防治措施。     

甘南草原不同退化草地植被和土壤微生物特性

为研究草地退化对植被和土壤微生物的影响,本试验以甘南州碌曲县高寒草地为研究对象,调查研究不同退化程度草地植被特征,并测定土壤微生物呼吸、土壤微生物量碳、土壤微生物代谢熵及土壤微生物群落结构变化。结果表明：随着草地退化程度的加重,高寒草地植物种类减少,优势植物种类发生变化,植被高度、盖度、植株数、鲜草产量下降;土壤基础呼吸和诱导呼吸、土壤微生物量碳及土壤代谢熵等指标均有不同程度的下降;土壤总磷脂脂肪酸（Phospholipid fatty acid,PLFA）、土壤细菌、放线菌含量减少,真菌含量增多,土壤微生物群落结构发生变化,压力指数增高;植被与土壤微生物各指数呈一定的相关性。本研究说明高寒草地退化过程中植被演替与土壤微生物变化密切相关。