三角帆蚌钙网蛋白基因cDNA的分子特征与表达分析

为研究淡水珍珠形成相关基因及调控机理,以三角帆蚌为研究对象,借助cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得了三角帆蚌的钙网蛋白基因(calreticulin,HcCRT) cDNA序列,该序列长1 437 bp,包含231 bp的5'非编码区(untranslated region,UTR)和615 bp 3'UTR以及591bp的开放阅读框(ORF),共编码196个氨基酸残基,包含一段由21个氨基酸组成的信号肽和一段由175个氨基酸的成熟肽,分子量约为22.4 ku,理论等电点5.01.氨基酸序列分析表明,该序列不存在跨膜结构,疏水性分析显示该蛋白整体为亲水性蛋白.氨基酸列比对分析显示,HcCRT具有保守的钙网蛋白家族结构,具有2个保守的钙网蛋白家族标签序列:KHEQNIDCGGGYLKVF和IMFGPDICG,与其他已知物种的CRT具有较高保守性,其中与斑马鱼的相似度为77％,与长牡蛎和马氏珠母贝的相似度为70％.对三角帆蚌HcCRT蛋白序列的二级结构和三级结构进行预测分析,显示该蛋白同时含螺旋和折叠.实时荧光定量PCR分析结果显示,HcCRT在外套膜、血液、鳃、斧足、肝脏、肾脏、肠和闭壳肌等8个组织中均有表达,其中在外套膜中表达量最高,血液次之,在其他组织的表达量极少.初步推测HcCRT参与了三角帆蚌珍珠形成的生物矿化过程.     

乳铁蛋白肽基因工程菌(E.col-ipED-LfcinB BL21)的发酵与诱导表达条件优化

乳铁蛋白肽是乳铁蛋白在酸性条件下经胃蛋白酶裂解,从N端释放的具有两亲性的阳离子多肽,具有广谱抗菌等诸多生理功能。目前,乳铁蛋白肽主要是通过水解乳铁蛋白来获得,成本昂贵,转基因技术是大规模生产乳铁蛋白肽的最佳途径,试验比较了常用碳源和氮源对已构建的基因工程菌的菌体生物量及蛋白表达量的影响,并采用正交试验对工程菌的发酵与诱导表达条件进行优化。结果表明:可溶性淀粉和牛肉膏可以提高菌体生物量,并且具有较高的融合蛋白表达量,所以分别采用淀粉和牛肉膏作为发酵培养基的碳源和氮源。正交试验结果表明可溶性淀粉7 g/L、牛肉膏30 g/L、氯化钠6.7 g/L,发酵温度37℃、诱导时间8h和转速200 r/min时可得到较高的菌体生物量和融合蛋白表达量。     

三角帆蚌胚胎在外鳃育儿囊内形态变化初步研究

对三角帆蚌胚胎在其外鳃育儿囊内的形态变化进行了显微观察。结果表明：在水温20℃-23℃时,受精卵发育为膜内钩介幼虫需11d;受精卵吸水后,卵膜膨胀,在整个发育过程中,其大小无显著变化,但膜内胚胎生长明显;整个发育期分为受精卵、卵裂期、原肠期、膜内钩介幼虫期,经过这4个时期,胚胎最大长度增长了82．8％,生长速度在后期快于前期,并且以原肠期和膜内勾介幼虫期增长速度最快。胚胎发育的不同时期与外鳃特征具相关性。     

三角帆蚌钩介幼虫寄宿阶段形态变化的初步研究

应用显微镜和扫描电子显微镜对三角帆蚌钩介幼虫不同发育阶段即排入水中未附着阶段、附着于宿主鱼体（黄颡鱼）阶段及从宿主鱼体脱落后阶段的形态变化进行了观察.结果表明：三角帆蚌钩介幼虫不同发育阶段壳高、壳长及铰合部增长速度有差异.钩介幼虫未附着阶段腹面有钩,附着阶段侧面观半椭圆型,壳腹缘无钩,有稍突出的嵴和两片与腹缘相连的薄翼,嵴和翼表面分布小而密的棘刺,未形成大而粗壮的钩;在此阶段幼虫足丝消失,内部器官逐渐形成.     

池蝶蚌与三角帆蚌及其杂种F1的同工酶鉴别

通过对外来种池蝶蚌(C)、三角帆蚌(S)及其正反杂种F1的肝脏同工酶进行垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳,分析了肝脏的SOD和EST同工酶谱带。结果表明,这两种蚌及其正反杂种F1同工酶的表达既呈现出一些相似的特征,又有明显差异。这四种蚌中分别有2~5个SOD位点,其中SOD-1为一强带且仅见于F1SC中,SOD-2在F1SC中为强带,但在F1CS中较弱,而其双亲中则无该带;SOD-3为一强带均保守的见于四种蚌中,SOD-4为一强带但仅在杂种F1SC中无表达,SOD-5为一强带但仅在池蝶蚌中未检到;在两亲本与其杂种F1中分别检测到4~6个EST同工酶位点,其中EST-4仅见于杂种F1SC中,EST-5在杂种F1CS中无表达,其余均有不同强弱的表达。     

长江刀鲚性腺的细胞学观察

在长江南通如皋江段和安徽安庆江段分两个时期野外采集刀鲚样本，通过对其性腺发育的观察发现：长江刀鲚种群无论是从体长还是体重方面都呈下降趋势，越靠近上游的个体越小。刀鲚性腺成熟程度与体长、体重等生物学指标没有必然联系，与所处长江江段关系不大，而与洄游时间及水温度密切相关，4月洄游群体性腺发育程度分别为Ⅱ、Ⅲ期，6月上旬洄游群体的性腺发育程度为Ⅳ、Ⅴ期。越晚洄游进入长江的刀鲚，其产卵场可能越处于下游，越接近长江口。     

乐清湾和三沙湾缢蛏群体遗传多样性的微卫星分析

利用微卫星标记分析了我国浙江乐清湾翁垟(ZWY)、乐成(ZYC)、南岳(ZNY)、南塘(ZNT)、清江(ZQJ)、湖雾(ZHW)、坞根(ZWG)、海山(ZHS)和芦浦(ZLP)9个群体和福建三沙湾漳湾(FZW)、梅田(FMT)、三都(FSD)、渔江(FYJ)、白招(FBZ)、霞塘(FXT)、长春(FCC)、沙江(FSJ)和溪尾(FXW)9个缢蛏群体的遗传多样性和遗传分化,以期评价乐清湾和三沙湾内缢蛏群体的遗传结构差异,为我国缢蛏主要原产地种质资源保护和遗传育种提供基础资料。遗传多样性结果表明,浙江乐清湾和福建三沙湾内的缢蛏群体中各位点平均有效等位基因数Ne变化范围分别为8.146~10.457和7.457~9.947,平均期望杂合度He分别为0.872~0.909和0.846~0.894,Nei’s基因多样性指数分别为0.863~0.899和0.836~0.886,显示乐清湾和三沙湾缢蛏群体的遗传多样性仍处于较高水平。群体间遗传分化指数(FST)结果表明,缢蛏各群体间FST为0.000 1~0.052 3。基于Nei’s遗传距离(DA)构建非加权组平均法(UPGMA)系统树结果显示,18个群体聚类为2支,除Z...     

金鱼红白虎头和红白蝶尾及其杂交F1代的体色和体型的分析

用金鱼Carassius auratus var红白虎头（HH）和红自蝶尾（DD）两个品种进行繁殖及杂交,获得了4个F1代组合HH、DD、HD（HH♀×DD♂）、DH（D♀×HH♂）,并观察F1代的受精率、孵化率、体色分离和体型差异。结果表明：1）反交F1代（DH）的受精率最低,为64．58％。2）4个F1代的体色均出现分离,分化出青灰色、白色、全红和红白色个体。3）4个组合间,DD组和DH组的全长／体长差异不显著,其余各组之间差异为极显著（P〈0．01）;HH、HD组与DD、DH组之间的头长／体长差异显著（P〈0．05）;HH、HD组与DD、DH组间的体高／体长差异极显著（P〈0．01）;DD组与DH、HD组之间的体宽／体长存在极显著差异（P〈0．01）,HH、DH组与HD组之间的体宽／体长存在极显著差异（P〈0．01）。4）聚类分析结果表明,4个组合在部分形态特征上表现出明显差异,其中DD组与DH组,HH组与HD组差异显著指标较少,DD组和HH组之间的遗传距离最大。5）用主成分分析法构建了两个反映形态特征信息的综合性指标——主成分1、主成分2,两者的贡献率分别为59．876％和29．297％,分析结果显示,DD与DH组、HH组与HD组之间差异不显著（P〉0．05）。     

不同月龄三角帆蚌幼蚌内外壳色相关性分析

供片贝内壳色显著影响所育珍珠颜色,成为珍珠贝重要遗传改良性状,但内壳色度量难度较大,严重限制了选育效率。选用4~8月龄紫色品系和白色品系三角帆蚌幼蚌为实验材料,评价三角帆蚌幼蚌内壳色与外壳色的相关性,结果表明:紫色品系三角帆蚌同时期内外壳颜色参数a^*最大相关系数为0.537(P<0.01),出现在6月龄,颜色参数b^*最大相关系数为0.724(P<0.01),出现在5月龄;紫色品系三角帆蚌5月龄外壳颜色参数a^*和4月龄外壳颜色参数b^*分别与8月龄内壳颜色参数呈现最大相关性,分别为0.414(P<0.01)和0.327(P<0.01);白色品系三角帆蚌5月龄外壳颜色参数a^*和b^*与8月龄内壳颜色参数a^*和b^*均呈现最大相关性,分别为0.424(P<0.01)和0.326(P<0.05)。综合上述结果,5月龄是通过三角帆蚌外壳色间接评价内壳色的最佳时期。揭示了三角帆蚌幼蚌外壳色与内壳色具有相关性,对指导三角帆蚌内壳色早期选育具有重要意义。     

三角帆蚌生长和壳色性状早期复合选择的优化研究

本研究以三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)‘申紫1号’F1为研究对象,在幼蚌壳色透明期,根据目标性状的选择顺序和中选率,设置了7种依次选择法。壳长(SL)为第1选择性状,贝壳深紫色(PN)为第2选择性状,设定3种中选率,选择方法分别为SL 50% × PN 20% (Ⅰ)、SL 30% × PN 33%(Ⅱ)、SL 20% × PN 50%(Ⅲ);贝壳深紫色(PN)为第1选择性状,壳长(SL)为第2选择性状,设定3种中选率,选择方法分别为PN 50% × SL 20%(Ⅳ)、PN 30% × SL 33%(Ⅴ)、PN 20% × SL 50%(Ⅵ);另外1组经验选择法SI 10%(Ⅶ)作为对照组,选择内壳色深紫色和体型大的个体,每种方法的综合中选率均为10%。经过300 d养殖后,通过比较分析选留三角帆蚌的生长和壳色性状表现,对这7种方法的早期选择效果进行综合评价。结果显示,不同选择方法,早期选择效果不同,方法Ⅳ和方法Ⅵ选留个体的生长性状表现最佳,方法Ⅱ最差;方法Ⅰ~方法Ⅲ对于壳色的选择效果最佳,方法Ⅳ对于壳色的选择效果较差;传统选择方法选留的三角帆蚌性状表现不突出。以贝壳深紫色为第1选择性状的方法,对于生长性状的早期选择效果优于以壳长性状为第1选择性状的选择方法;以壳长性状为第1选择性状的方法,对于壳色的早期选择效果优于以贝壳深紫色为第1选择性状的选择方法,说明选择顺序对于选择效果影响显著。更加关注的目标性状,在依次选择中,最后选择效果更佳;中选率影响选择效果,但受到复合选择的影响。