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<正>近几年,随着营养水平的提高和管理的改善,我国奶牛的单产逐步提高,全国每年平均奶牛单产在6.5t以上,但奶牛的繁殖率却有下降的趋势。不孕症仍是当前影响奶牛健康发展的四大疾病(乳房炎、不孕症、蹄病、代谢病)之一,不但影响到奶牛数量增加,而且使产奶量大幅下降,给奶牛养殖场、户带来巨大经济损失。无论是散养户还是大型奶牛场,都不可避免地遇 相似文献
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新现猪Delta冠状病毒RT-PCR检测方法的建立及其应用 总被引:2,自引:0,他引:2
【目的】猪Delta冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus, PDCoV)是近年来新发现的可引起猪只,特别是新生仔猪腹泻的冠状病毒,其引发的腹泻具有较高的发病率和死亡率,是造成新生仔猪死亡的重要原因之一。试验拟建立新现PDCoV RT-PCR检测方法,并调查当前江西腹泻猪群中PDCoV的感染情况。【方法】通过对GenBank数据库中PDCoV全基因组序列的比对分析,找出保守序列,用Primer 3.0在线软件设计1对扩增PDCoV核衣壳(N)蛋白基因片段的特异性引物,基于该引物建立PDCoV RT-PCR检测方法;用建立的方法检测腹泻猪粪便及肠道样品,挑选阳性扩增产物进行克隆、测序;用本试验获得的PDCoV序列与其他国家或地区的PDCoV序列以及猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)共同构建进化树,分析PDCoV各毒株及其与PEDV和TGEV之间的进化关系;以PEDV、TGEV、猪库布病毒(PKoV)、猪星状病毒(PAstV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及猪瘟病毒(CSFV)RNA为模板验证引物的特异性;构建PDCoV核衣壳蛋白基因片段重组质粒,并以系列稀释的重组质粒为模板确定所建立的PDCoV RT-PCR方法的敏感性;应用建立的RT-PCR方法调查249份2012-2015年江西省猪群腹泻样品中PDCoV的存在情况,随机抽取一定数量的RT-PCR阳性扩增产物进行克隆、测序进一步验证反应的特异性。【结果】①以腹泻猪粪便样品RNA为模板,应用所设计的特异性引物扩增出了329 bp的单一条带,与预期目的片段大小一致,扩增产物经克隆后测序,将获得的序列与NCBI GenBank数据库序列进行比对,比对结果表明试验所获得的序列与数据库中PDCoV序列的同源性高达99.1%,证明所扩增的序列属于PDCoV;②将8条本试验获得的PDCoV N基因片段序列与18株其他国家或地区的PDCoV毒株以及PEDV、TGEV的相应N基因片段序列构建进化树,结果表明26条PDCoV序列属于同一个分支,而PEDV和TGEV则分别属于不同的分支。试验获得的PDCoV序列与韩国PDCoV毒株KNU14-04亲缘关系最近,同源性高达99.1%;与两株香港毒株HKU 15-44和HKU 15-155亲缘关系相对较远;③本试验建立的RT-PCR方法特异性强,仅能扩增出PDCoV,而对PEDV、TGEV、PKoV、PAstV、PRRSV及CSFV核酸无交叉扩增现象;④所建立的RT-PCR方法灵敏度高,将含扩增片段的重组质粒以1.0×106拷贝/μL为起始浓度依次10倍稀释至1.0×101拷贝/μL作为模板验证方法的灵敏度,结果表明所建立的方法对PDCoV最低可检出量为1.0×103拷贝/μL;⑤应用建立的RT-PCR方法检测了249份2012-2015年采集自江西省各地区的腹泻母猪粪便及腹泻仔猪粪便/肠道样本,结果显示腹泻样本中PDCoV的检出率为31.33%(78/249),母猪粪便中PDCoV的检出率(27.78%)稍低于仔猪粪便及肠道样品PDCoV的检出率(31.92%),最早可从2012年的样品中检测出PDCoV。【结论】试验成功建立了检测新现PDCoV的RT-PCR方法;应用所建立的RT-PCR方法检测了249份2012-2015年江西地区猪群临床腹泻样品中PDCoV存在情况,结果表明PDCoV是一种普遍存在于腹泻猪群中的病毒;研究建立的RT-PCR方法对猪群PDCoV的临床诊断和流行病学调查等具有应用价值。 相似文献
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黄菠萝树体高大,树高可达22m。萌枝力强、抗逆性强。树冠卵圆形,树姿美观大方,是理想的园林绿化和行道绿化树种。玛纳斯平原林场1972年进行黄菠萝引种驯化和进行适应性栽培研究。目前已推广到乌鲁木齐、独山子、克拉玛依、乌苏、博乐及和田等地,黄菠萝大规格苗木已为多家绿化公司首选树种。黄菠萝对土壤、水分等生长因子要求较严,以往大规格苗木移栽成活率较低,为提高大苗移栽的成活率,我们多次实验摸索出一些相应的技术措施,总结如下,供大家参考。 相似文献
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SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟疫苗病毒含量 总被引:1,自引:0,他引:1
为建立一种能够快速定量检测猪瘟兔化弱毒疫苗病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法。对GenBank登录的25株猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株基因组全序列进行比较分析,在其高度保守的5′端非编码区设计1对针对猪瘟兔化弱毒疫苗的特异性引物,扩增片段为245 bp,且不与牛病毒性腹泻病毒以及其他猪源病毒发生非特异性反应。应用实时荧光定量RT-PCR法对16份猪瘟脾淋苗和细胞苗进行定量检测,结果表明,102拷贝/μL的总RNA即能得到特异性扩增,在107~102拷贝/μL线性范围内有良好的扩增曲线,并与兔体定型热反应有良好的相关性。该法具有敏感性、特异性、重复性好等优点,可望取代传统的兔热法用于猪瘟疫苗生产过程中的效价测定及指导疫苗的配制,也为猪瘟病毒分子生物学研究提供一种新的有效工具。 相似文献
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动物防疫监督案件中的笔录制作 总被引:2,自引:0,他引:2
证据是当事人用来证明其诉讼请求或进行答辩的主要手段,也是人民法院用来查明案情、作出裁判的主要手段和依据。《行政诉讼法》31条规定,证据可分为书证、物证、视听材料、证人证言、当事人陈述、鉴定结论和勘验笔录、现场笔录7种。在动物防疫监督案件中运用最多的是勘验笔录、现场笔录。下面就动物防疫监督案件中如何作好现场调查询问笔录,保证案件的准确性、可靠性,谈一下个人粗浅的认识。现场笔录是专指行政机关及其工作人员在执行职务过程中,在实施具体行为时,对某些事项当场作的能够证明案件事实的记录,又称为当场笔录。在动物防疫监督… 相似文献
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为了更准确地了解燃驱压缩机的性能参数,提出一种定量分析及预测可控参数对燃气驱压缩机组有效功率影响程度的方法。结合中国某天然气储气库燃驱三级往复式压缩机的实际运行情况,分析进出口压力、进口温度等参数对有效功率的影响程度。研究发现:第一级入口压力、末级出口压力及第一级入口温度对有效功率影响最大,并对这些参数进行了预测。通过与变工况热力学复算以及相似试验结果对比分析,验证了该方法的准确性,论证了调节参数可以进一步提升运行中压缩机组的性能,为燃驱压缩机组的有效功率研究提供了参考。(图3,表3,参20) 相似文献
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采用水热法制备了氧化锰八面体分子筛(K-OMS-2),对其进行了XRD,FT-IR,N2-低温物理吸附和SEM表征,并考察了其对甲苯气相氧化制苯甲醛反应的催化性能.研究结果表明,所制备的K-OMS-2具有纳米纤维状形貌(直径约为30 nm、长度大于1 μm).相对于固相法和热回流法,水热法制备的K-OMS-2催化剂上苯甲醛选择性和收率更高. 相似文献