猪SLA-DQA一个新SNP的发现及其遗传效应的研究

 采用PCR-RFLP方法对新发现的一引起氨基酸改变的SNP位点(读码框第722位碱基)进行了检测，初步探讨了DQA基因作为影响经济性状候选基因的可能性。经在6个中国地方猪种及大白猪中PCR-RFLP检测，发现除小梅山和大白猪外，其它几个猪种均存在多态性,同时对6个地方猪种间的基因型频率的差异进行了χ2检验。在通城猪、长白猪、大白猪及其三元杂种猪长大通和达长通猪中检测了该位点的基因型，并运用GLM进行基因型与生长、胴体性状间关联分析，发现该SNP位点与平均背膘厚、6-7肋间背膘厚存在显著相关(P＜0.05)，与胸腰椎间背膘厚也接近显著性水平(P=0.06)，与内脂率、眼肌高、肌肉失水率亦存在显著相关(P＜0.05),但未发现与生长性状间的相关。     

藏山羊微卫星DNA复合扩增的条件探索

对微卫星DNA的复合扩增与同步扩增进行比较研究 ,结果表明通过优化微卫星位点引物组合 ,以及复合扩增反应体系中模板DNA浓度、引物浓度、Mg2 浓度、退火温度和检测时的电泳环境等一系列条件 ,其扩增产物量以及产物特异性虽然均有所下降 ,然而其扩增产物能准确反映结果 ,且具有方便、快捷、节省等优点     

山羊肝外胆道和十二指肠的解剖学研究

对１１只成年山羊的肝外胆道、十二指肠形态进行了解剖学研究。结果表明，山羊胆囊位于腹腔内右季肋部第９～１０肋间相对处，有２个副肝管开口于胆囊管。肝管和胆囊管合并为胆管，后者与胰管合并为胆总管，开口于十二指肠憩室。十二指肠可分３段。测量了胆道数值，并阐明了山羊肝外胆道外科手术最佳途径。     

猪MSTN前肽定点诱变载体在C2C12细胞中的表达

本研究旨在克隆通城猪含有第1个内含子的MSTN前肽基因,构建真核定点诱变载体,并通过转染C2C12细胞验证载体表达的有效性.以通城猪血液样品中提取的DNA作为模板,PCR扩增得到含第1个内含子的MSTN前肽基因,扩增产物进行克隆、测序.再将目的片段定向克隆到去除了EGFP基因的pEGFP-N1表达载体上.通过定点诱变方法将前肽编码序列第76位天冬氨酸突变为丙氨酸,获得定点诱变载体pEGFP(-)-N1-ProMstnD76A,并瞬时转染C2C12细胞.转染48 h后,通过RT-PCR和Real-time PCR方法检测目的基因的表达情况.结果表明:本研究成功克隆了通城猪含第1个内含子的MSTN前肽基因,并对该基因进行定点诱变修饰,构建了真核表达载体,转染后其前体mRNA能在C2C12细胞中进行正确剪接,目的基因mRNA表达水平较高.这为猪MSTN前肽基因在体内表达的研究奠定基础,并为制备转基因猪提供有用的分子材料.     

促黄体素β基因多态性及其与济宁青山羊产羔数的关系

为了解促黄体素β基因多态性与济宁青山羊产羔数的关系,采用PCR-SSCP技术检测促黄体素v亚基(Luteinizing hormone beta-subunit,LHβ)基因5'调控区和3个外显子在高繁殖力(济宁青山羊)、中等繁殖力(波尔山羊)和低繁殖力山羊品种(辽宁绒山羊和安哥拉山羊)中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对济宁青山羊高繁殖力的影响.结果表明:山羊与绵羊的LHB基因核苷酸序列相似性为98%.6对引物中,仅引物P1和P5扩增片段存在多态性.对于P1扩增片段,在4个山羊品种中均检测到AA、AB和BB 3种基因型;测序分析发现BB与AA基因型相比在5'调控区存在2处突变202C→A和210C→T;济宁青山羊3种基因型之间产羔数差异均不显著(P>0.05).对于P5扩增片段,在济宁青山羊中检测到CC、CD和DD 3种基因型,辽宁绒山羊中检测到CC和CD2种基因型,波尔山羊和安哥拉山羊中都只检测到CC基因型;测序分析发现DD与CC基因型相比在外显子2存在单碱基突变1124C→T;济宁青山羊CC、CD和DD基因型频率分别为0.38、0.44和0.18;DD和CD基因型济宁青山羊平均产羔数分别比CC基因型的多0.99(P<0.01)和0.87只(P<0.01).济宁青山羊在P1、P5两个座位上都处于哈迪-温伯格平衡状态(P1座位:X2=1.66,P=0.437;P5座位:X2=1.22,P=0.544).     

转基因小鼠的多重PCR快速检测技术

转基因检测技术的标准化可以为转基因法规的制定和转基因产品的标识提供技术支持.采用碱裂解法快速提取鼠尾基因组DNA,用PCR方法检测其中的外源基因结构如cytomegalovirus(CMV)启动子、hGH polyA终止子及目的基因跨膜蛋白66(Transmembrane protein 66,Tmem66),筛选到阳性样品.优化了多重PCR引物退火温度及缓冲液浓度,并探讨了扩增速率对多重PCR的影响.结果表明,此多重PCR方法可得到很好的扩增效果,可用于转基因小鼠外源基因的检测,同时为哺乳动物检测标准的建立提供参考.     

固始鸡免疫器官指数的发育规律研究

为研究固始鸡免疫器官指数的发育规律,应用大体解剖学方法,经过SAS(6.12)软件对数据分析处理,结果表明,雄性和雌性固始鸡活体重、免疫器官重量和指数之间存在差异(P<0.01),但免疫器官生长发育规律相似;1周龄～20周龄内,前期固始鸡活体重和免疫器官重量均呈上升趋势,后期活体重仍增加,而免疫器官重量维持较平稳水平.随着固始鸡的生长发育,不同免疫器官指数总体而言均呈下降趋势,免疫器官生长速度小于增重速度.     

可遗传与非可遗传构件应用与转基因动物食品安全评价介绍

近年来基因工程技术不断发展,转基因生物及其产品如雨后春笋般不断涌现,随之而来的转基因食品安全问题也逐渐引起关注和重视。可遗传与非可遗传构件的应用作为生产转基因动物的方法,其存在的潜在风险与巨大的发展前景共存。作者就可遗传与非可遗传构件应用及与转基因动物食品安全评价的关系进行了介绍和讨论,并对其未来的发展做出展望。     

固始鸡中枢免疫器官细胞和自然凋亡细胞超微结构研究

应用透射电子显微镜技术,对固始鸡17日龄胚胎、4周龄和19周龄固始鸡正常发育的中枢免疫器官超微结构进行了研究。结果表明,固始鸡胚胎胸腺和法氏囊超微结构不同于4周龄和19周龄固始鸡;在中枢免疫器官内免疫细胞存在着自然凋亡现象,主要表现为细胞核的变化,其次是线粒体增生。核质凝集为新月形、C字形、圆环形、花瓣状等多种形态,凋亡细胞裂解为凋亡小体,最后被巨噬细胞吞噬。     

CRISPR/Cas9介导的猪IPEC-J2细胞CD13基因敲除细胞系的建立

旨在利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术制备CD13基因敲除的IPEC-J2(猪空肠上皮细胞系)细胞,揭示细胞表面分化抗原13(cluster of differentiation 13, CD13)在肠道病原微生物感染肠道细胞中所起的作用。本研究在猪CD13基因第2外显子区域设计2个向导RNA(guide RNA, gRNA),命名为g3、g5,然后分别将g3和g5克隆到pX330-GFP和pX330-RFP载体骨架上,电转染IPEC-J2细胞,48 h后通过流式细胞术分选具有双荧光标记的细胞,培养并获得单克隆细胞,PCR扩增、测序,从而获得CD13基因纯合敲除的阳性细胞系。对获得的20个细胞单克隆进行PCR,并挑取部分克隆PCR产物测序,发现共有7个克隆发生了基因片段缺失,其中1个克隆为单等位基因片段缺失,3个克隆为双等位基因杂合片段缺失,3个克隆为双等位基因纯合片段敲除。本研究检测双等位基因纯合片段敲除细胞的蛋白表达水平,其结果显示,在该纯合敲除细胞中CD13蛋白几乎不表达,表明成功构建了CD13敲除的IPEC-J2细胞系。本研究获得的CD13基因敲除细胞系为探究CD13在猪肠道病原微生物感染肠道细胞中所起的作用奠定了基础。