诱导表达猪生长激素pGH载体系统构建及其在PK15细胞中表达验证

为实现外源生长激素(GH)基因在特定时间、空间的可控表达,本研究构建四环素(TET-ON)表达载体系统,并在细胞水平对该载体系统进行诱导活性验证。结果表明:(1)成功构建了重组载体pTRE-GH12;(2)筛选建立了可诱导表达GH的细胞系;(3)利用强力霉素(doxycycline,DOX)诱导阳性细胞克隆并检测外源GH的表达,QRT-PCR结果表明,实验组细胞在DOX诱导后表达活性是诱导前264.481倍;对照组细胞在DOX诱导前诱导后表达无明显变化,实验组和对照组细胞间差异极显著(P<0.01),实验组DOX诱导前后差异极显著(P<0.01);(4)Western杂交后灰度分析结果和QRT-PCR趋势一致,实验组和对照组细胞间GH蛋白表达量差异极显著(P<0.01),实验组DOX诱导前后GH蛋白表达量差异极显著(P<0.01)。研究结果提示,四环素(TET-ON)诱导猪生长激素(GH)表达系统实现了可控表达,为以后制备可诱导表达GH的转基因动物提供了技术基础。     

用像素法测定猪眼肌面积的研究

本研究建立了用像素法测定猪眼肌面积的基本步骤,编制了自动计算数字相片中眼肌横截面积的VisualBasic程序。通过长白、大白、通城猪及其三元杂交后代性能测定过程中拍摄的眼肌横截面数字相片,利用像素法对眼肌横截面的真实面积进行了测定。结果表明:像素法和经验公式法存在明显差异,像素法测定的眼肌面积平均值较经验公式法测定的眼肌面积平均值高,标准差亦更大。从数据分布情况来看,像素法测定结果更符合正态分布。t检验结果也证明两种测定方法确实存在统计学上的极显著差异,因而两种测定方法不可相互替代。     

28亩土地转手难掩交易“黑幕”

为使土地“开发利用”，副镇长和支书联手“倒地”。合同标价40万元．实际给付150万元。     

植物花色素合成的转录调控研究进展

花色素是由植物类黄酮代谢途径产生的次生代谢产物,决定了花、果实和种子的颜色。随着类黄酮代谢途径的研究不断地深入,多种植物编码合成花色素的结构基因也已得到克隆,并研究证明花色素合成结构基因与转录因子(MYB、 bHLH和WD40)有着极其复杂的相互作用模式。本文主要对花青素合成相关的MYB、bHLH和WD40转录因子及其在调节结构基因表达和花青素合成中的作用进行了综述。     

基于CRISPR/Cas9技术的Wip1基因敲除ST细胞的建立

旨在采用CRISPR/Cas9编辑系统获得Wip1基因敲除的猪睾丸（swine testis,ST）细胞,为后续在细胞水平上探究Wip1基因对ST细胞增殖、凋亡的影响奠定基础。本研究将实验室已有的靶向Wip1基因第一外显子的两条sgRNA（sgWip1-1和sgWip1-2）分别连接到pX330-GFP和pX330-RFP载体,然后共转染ST细胞（从80~90日龄的猪胚胎睾丸组织中分离出未成熟的支持细胞）。利用流式细胞仪收集红绿双荧光阳性的ST细胞,以用于单克隆细胞挑选。对得到的30个单克隆细胞进行基因型鉴定,并将PCR产物进行T-A克隆。结果显示,有29个单克隆细胞出现了基因片段敲除,Wip1基因的片段敲除效率为96.7%。其中单等位基因片段敲除的有5个,纯合双等位基因片段敲除的有8个,杂合双等位基因片段敲除的有16个。本研究高效地构建了Wip1基因敲除的ST细胞,不仅为后续研究Wip1基因对ST细胞增殖、凋亡的影响提供了细胞模型,也为研究Wip1基因对公猪繁殖性能的影响奠定了基础。     

猪胚胎骨骼肌LongSAGE文库的构建

基因表达系列分析(SAGE,serial analysis of gene express)技术(Velculescu et al.,1995)是一种高通量基因表达分析技术,目前已在人、动物、植物、微生物等许多研究领域广泛应用(Renu and Narendra,2004)。LongSAGE是Saha et al.(2002)对原始SAGE技术的进一步改良。本研究将该技术用于猪骨骼肌转录谱分析,成功地构建通城猪胚胎骨骼肌LongSAGE文库。     

应用微卫星标记对中国10个品种猪遗传变异的研究

对我国7个地方猪品种(二花脸、通城、清平、阳新、皖南花、赣东黑、万安)和3个引进品种(长白、大白、杜洛克)的4个微卫星位点的多态性进行了检测，并对品种内和品种间的遗传变异进行了群体遗传学分析。结果初步表明，地方品种中二花脸、赣东黑、通城的品种内遗传变异较高，万安的品种内遗传变异最低。除万安猪外，其它地方品种的品种内变异均大于引进品种。品种间的聚类结果基本符合品种的地缘分布。     

石河子地区奶牛临床瘫痪和站立困难疾病的病因调查

2004-2006年调查了石河子地区15267头奶牛，奶牛临床瘫痪和站立困难疾病总发病率为3．38％（517／15267），有13种之多。春季发病率最高，依次为春季〉冬季〉秋季〉夏季；发病率最高为生产瘫痪，占发病数的32．88％（170／517），其次为风湿性轻瘫21．27％（110／517），创伤性网胃心包炎所引起的站立困难为13．35％（69／517，）产后截瘫为11．41％等。主要原因与饲养管理粗放、营养不良和代谢性障碍、运动不足及继发慢性消耗性疾病有直接关系。