跨膜蛋白66生物信息学分析及其突变体转基因小鼠构建

跨膜蛋白66(TMEM66)是与细胞凋亡以及癌症发生密切相关的重要功能基因,为了在个体水平研究其生物学功能,我们进行了TMEM66基因突变体(TMEM66V)转基因小鼠的构建。本研究通过原核注射法进行转基因操作,将获得的312个受精卵移植到13只代孕母鼠中,运用PCR、Southern blotting对出生的小鼠进行转基因鉴定,对于转基因阳性小鼠通过传代试验研究外源基因是否稳定整合,并通过反向PCR方法研究外源基因的整合方式。结果显示在出生的55只小鼠中有6只为转基因阳性,其中3只转基因小鼠可以稳定传代,表明这些小鼠中外源基因发生了稳定整合。反向PCR检测结果发现外源片段是以串联重复的方式整合到转基因小鼠的基因组中。本研究成功构建了TMEM66基因突变体转基因小鼠,为进一步研究TMEM66基因的功能奠定了基础。     

长链非编码RNA(H19)在小鼠骨骼肌生长发育过程中的表达

本试验旨在研究长链非编码RNA(H19)在骨骼肌发育和损伤修复过程中表达量的变化,为研究H19在小鼠骨骼肌发育中的作用机制奠定基础。以C2C12细胞系和ICR小鼠为试验素材,通过生物信息学方法分析H19的非编码特性和在物种间的低保守性,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测H19在C2C12细胞分化,ICR小鼠骨骼肌发育不同时期和成体小鼠骨骼肌损伤修复过程中表达量的动态变化。结果表明,H19在小鼠骨骼肌中的表达量随出生后日龄的增长逐渐下降;在诱导C2C12细胞分化过程中,H19的表达量先是逐渐升高,进而在较高水平维持不变;在肌肉损伤模型中修复的第4~6天,H19的表达量维持在较高水平。鉴于上述H19在C2C12细胞分化和肌损伤修复过程中的表达特点,推断H19可能具有促进肌纤维形成和成体骨骼肌损伤后修复的功能。     

NMDA对培养的大鼠腺垂体细胞分泌生长激素影响的研究

应用细胞培养、结合放射免疫测定法探讨了 N-甲基 -D-天冬氨酸 (NMDA)对培养的大鼠腺垂体细胞分泌生长激素 (GH)的影响。结果表明 :在腺垂体细胞培养中 ,试验组 (分别添加1 0 - 8、1 0 - 6 、1 0 - 4M NMDA)培养液中的 GH比对照组分别提高了 67.92 % ,87.46% ,1 0 0 .67% ,差异显著 (P <0 .0 5)。试验表明 NM-DA能直接刺激离体腺垂体细胞分泌 GH,并与NMDA呈剂量依赖关系     

IGF2荧光定量PCR方法建立及其在中外猪胚胎骨骼肌中的表达

胰岛素样生长因子2（IGF2）基因对骨骼肌的生长发育起着非常重要的调控作用。实验建立了猪IGF2基因的SYBR-Green荧光定量PCR方法,并利用此方法分析该基因在通城猪（脂肪型）和长白猪（瘦肉型）妊娠33、65和90d胚胎骨骼肌中的表达。结果表明,建立的SYBR-Green荧光定量方法可以有效地用于IGF2的表达分析。IGF2基因在两品种中都以妊娠65d时表达水平最高,呈波浪式表达模式。在所研究的3个胚胎时期,IGF2的表达在通城猪中均高于长白猪。     

GnRHR基因多态性及其与小尾寒羊高繁殖力关系的研究

设计8对引物,应用聚合酶链式反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）技术检测促性腺激素释放激素受体（gonadotropin releasing hormone receptor, GnRHR）基因外显子1、外显子2和外显子3在高繁殖力品种（小尾寒羊和湖羊）和低繁殖力品种（南非肉用美利奴、考力代和中国美利奴绵羊）中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对小尾寒羊高繁殖力的影响。结果发现引物P4和P7扩增片段具有多态性,其余6对引物的扩增片段都不存在多态性。对于P4扩增片段,在湖羊中检测到AA和BB基因型,在其余4个绵羊品种中只检测到AA基因型,BB型与AA型相比在外显子1有5个突变（+692G→A、+706T→A、+747T→C、+748A→T和+802T→A）,并引起氨基酸改变（Gly→Ser、Asp→Glu和Leu→Pro）。对于P7扩增片段,在小尾寒羊和湖羊中都检测到CC和DD基因型,在低繁殖力的3个绵羊品种中均只检测到CC基因型,DD型与CC型相比在外显子2有+50A→G和+101A→C两个突变,并引起氨基酸改变（Glu→Gly和Gln→Pro）;小尾寒羊CC和DD基因型频率分别为0.87和0.13,突变纯合型（DD）小尾寒羊平均产羔数比野生型（CC）多0.81只（P<0.01）。     

IGF2基因在通城猪和长白猪胚胎骨骼肌中的表达研究

IGF2基因对骨骼肌的生长发育起着非常重要的调控作用。为了研究IGF2对猪胚胎骨骼肌生长发育的调控,本文建立猪IGF2基因的SYBR-Green荧光定量PCR方法,并利用此方法分析该基因在通城猪（脂肪型）和长白猪（瘦肉型）妊娠33天、65天和90天胚胎骨骼肌中的表达规律。结果表明,建立的SYBR-Green荧光定量方法可以有效地用于IGF2的表达分析。IGF2基因在两品种中都以妊娠65天时表达水平最高,呈波浪式表达模式。有趣的是,在所研究的三个胚胎时期,IGF2的表达在通城猪中均高于长白猪,其原因值得深入研究。     

猪α-1岩藻糖转移酶基因多态性检测及与性状关联的研究

此研究采用PCR-RFLP方法检测通城、鄂西黑、英国大白、瑞典长白纯种猪和大长通、长大通三元杂种猪的α-1岩藻糖转移酶(FUT1)基因编码区第307位的多态性,并进行FUT1基因型与部分生长性状、胴体性状、肉质性状和免疫性状间的关联分析。多态性检测结果发现,鄂西黑、长白、大白、大长通和长大通中该位点存在多态;通城猪中该位点呈单态分布,只有易感的GG基因型。关联分析结果表明,AA基因型猪在内脂率上低于AG和GG基因型猪,而在眼肌面积、腿臀肉骨率和红细胞数上高于AG和GG基因型猪;AA基因型猪的失水率低于GG基因型猪、板油率高于AG基因型猪;且差异均达到显著水平(P<0.05)。     

3个地方品种猪血液生化指标分析

为了解中国地方猪种的血液生化指标,试验用Monarch660全自动生化分析仪检测了通城猪、陆川猪和宁乡猪3个地方猪种24项血液生化指标,统计结果表明,3个品种间有6项指标差异极显著(P＜0.01),通城猪和宁乡猪间有4项指标差异不显著(P＞0.05),陆川猪和宁乡猪间有3项指标差异不显著(P＞0.05)。通过3个地方猪品种间同一指标的比较,以及与人参考值、中国小型猪品种、其他地方猪品种和国外引进猪品种比较,为中国地方猪品种资源的合理保护和利用提供科学依据。     

浙江省病死动物无害化处理现状与对策建议

正2013年3月,上海黄浦江漂浮死猪事件引起了社会的广泛关注,病死猪处理问题一直成为人们关注的热点。做好病死动物无害化处理工作是有效防止动物疫病传播,确保畜牧业健康发展,保障广大群众身体健康和维护公共卫生安全的重要工作。1病死动物无害化处理现状据调查,2012年浙江省生猪和家禽饲养量分别为3272.7万头和36597.3万羽。如果生猪按正常死     

近交系五指山小型猪消化器官的解剖学研究

本研究采用大体解剖学的方法观察了近交系五指山小型猪消化器官的解剖学特征，并对其消化器官的解剖学常数进行测量。结果显示：4月龄较2月龄五指山小型猪近交系部分消化器官的解剖学数据与人的更相似，小肠、大肠和胰腺的形态与人存在较大差异。表明4月龄五指山小型猪近交系部分消化器官比2月龄更适合用于异种移植，但其中一些器官在形态学上不适合整个器官的移植，可能适用于细胞的移植。本试验为比较医学和异种器官移植的研究提供基础资料。