宿州市干线公路应急保障能力建设

宿州市位于安徽省最北部,气候适宜、平原广袤、物产丰富,农业经济发达,是淮海经济协作区的核心城市,其重要的经济地位和快速的农业发展与当地较好的公路建设状况是分不开的。介绍了宿州市应急保障能力建设现状,分析了应急能力建设出现的问题,并提出了提高公路应急保障能力的对策建议,主要包括：加大灾害防治工程投入;健全完善应急预案,加强监测预警机制;加强队伍建设和设备物资保障,提高应对自然灾害的保通能力;加强公路网应急职能联动机制;发挥党组织的战斗堡垒作用,为抢险救灾提供强大的精神动力等。     

鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白与幽门螺杆菌铁蛋白基因融合PCR扩增及其真核表达载体的构建

为获得高活性的鸡传染性法氏囊病病毒（infectious bursal disease virus,IBDV）VP2蛋白的重组蛋白,本试验对IBDV VP2蛋白基因与能进行自我组装的幽门螺杆菌（Hp）铁蛋白基因进行融合PCR扩增,获得其融合基因。根据成熟VP2蛋白基因cDNA序列和Hp铁蛋白基因的碱基序列,设计合成2对引物,应用融合PCR技术扩增获得融合基因片段VP2-Fe。将目的基因克隆至pMD18-T载体筛选阳性重组克隆质粒,然后将目的基因亚克隆至真核表达载体pPICZaC后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选获得阳性表达质粒。结果显示,通过两轮PCR扩增出长度为1 824 bp的融合基因VP2-Fe,亚克隆至pMD18-T载体,测序结果显示,融合基因无任何碱基的突变,筛选的阳性质粒命名为pMD-VP2-Fe。双酶切回收目的基因大小为1 824 bp,亚克隆至pPICZaC,PCR和双酶切鉴定出现预期大小的片段,将获得的阳性表达质粒命名为pPICZaC-VP2-Fe。本研究为后期利用真核表达载体获得其融合重组蛋白奠定基础。     

鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白及其疫苗的研究进展

传染性法氏囊病病毒(IBDV)是鸡传染性法氏囊病(IBD)的病原。近年来IBDV变异毒株和超强毒株的流行,严重威胁着世界养鸡业的发展,传统疫苗已不能控制IBDV的流行,迫切需要研制新型疫苗。IBDV VP2蛋白是重要的结构蛋白,能诱导机体产生中和抗体,因此,利用VP2蛋白制备IBDV重组疫苗成为国内外研究的热点。综述了IBDV VP2蛋白的作用及在不同表达系统中用VP2蛋白制备疫苗的研究进展,以期为IBDV新型疫苗的开发提供参考。     

犬瘟热病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及初步应用

[目的]建立一种犬瘟热病毒(CDV) RT-nested PCR检测方法.[方法]根据CDV弱毒株Onderstepoort 的核衣壳蛋白(NP)基因序列设计套式引物,进行特异性、敏感性、重复性实验.[结果]特异性试验表明,该方法可以特异扩增出CDV NP基因片段,但从RNA病毒狂犬病病毒(RV),DNA病毒犬细小病毒(CPV)以及正常Vero细胞中均未扩增出该条带.敏感性试验表明,RT-PCR可以扩增10-3稀释度的病毒RNA,而建立的RT-nested PCR可以扩增10-6稀释度的病毒RNA,后者的敏感性明显高于前者.重复性实验表明,不同情况下的3次重复实验,结果相同.用RT-nested PCR对石河子地区疑似感染CDV的病料进行检测,结果表明,该研究建立的RT- nested PCR不仅能有效的检测CDV感染,而且能够检测不同组织的样品.[结论]建立的RT-nested PCR检测方法,适用于动物CDV的快速诊断和流行病学调查.     

猪α-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达和下游工艺的研究

通过小量发酵、摇瓶发酵、大量发酵,研究猪α-IFN在毕赤酵母中表达的下游工艺,微量细胞板法测猪α-IFN体外抗VSV、PRRSV、TGEV的活性.猪α-IFN抗VSV的活性达到4.04×10~6IU/L,在PK15上抗TGEV的活性为10~7～10~8IU/L,在Mare 145上抗PRRSV的活性为10~6～10~7lU/L.30℃诱导培养96 h、甲醇添加1%、pH值6.0、DO 20%、0.25%～0.4%甲醛灭活,获得高活性的、安全的IFN.仔猪免疫后临床症状正常,未出现病理学变化.猪α-IFN体外抗病毒活性高,发酵后的抗病毒活性未下降,免疫动物未产生临床症状和病理变化,可用于临床治疗病毒性疾病.     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因抗原区的原核表达及鉴定

本研究以鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)S1基因为研究对象,设计特异性引物扩增S1抗原集中区目的基因,长度为198 bp,亚克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,构建重组原核表达质粒pGEX-6P-1-S1,转化至宿主菌Rosetta(DE3)后进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示,表达获得1条特异性蛋白条带,其分子质量大小为33.0 ku,与预期蛋白大小一致。可溶性分析结果表明目的蛋白以包涵体形式存在。Western blotting结果显示,重组蛋白能与IBV鸡阳性高免血清反应,被GST标签单抗识别,结果表明该融合蛋白正确表达并具有良好的抗原性。本研究为制备IBV单克隆抗体奠定了抗原基础。     

猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及优化

以原核表达、纯化的猪瘟病毒(CSFV)E2主要抗原区蛋白为目标检测物,通过对各反应条件的筛选和优化,建立了检测CSFV抗体的间接ELISA检测方法。结果表明,本研究的最佳抗原包被浓度和最佳血清稀释度分别为1.0 μg/mL和1:200;最佳抗原包被条件和最佳封闭时间均为37 ℃ 1 h;最佳酶标二抗稀释度和作用时间分别为1:10 000和37 ℃ 45 min;阴性临界值判断标准为当D450nm<0.30时猪血清样品为CSFV抗体阴性;批内和批间重复试验变异系数分别为4.8%和6.9%,表明该检测方法具有较高的稳定性;特异性试验结果表明,间接ELISA方法与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪细小病毒(PPV)阳性血清均无交叉反应;应用该间接ELISA方法随机检测80份猪血清样品,与进口阻断ELISA试剂盒相比其阳性符合率为83.58%,阴性符合率为76.92%,总体符合率为80.25%。结果表明本试验建立的间接ELISA方法具有很好的临床应用价值。     

四平市社会主义新农村建设现状及推进建议

社会主义新农村建设的一项重要内容是推进全市＂百村示范、千村提升＂工程,加快城乡经济社会和人居环境一体化格局的形成。为探讨加快推进新农村建设工作的思路,笔者随调查组对全市新农村建设情况进行了调查,查找出了影响新农村建设的问题症结所在,并提出有建设性的建议。     

几种检测猪弓形虫病ELISA诊断试剂盒的对比

以人工感染弓形虫的猪阳性血清及感染前的阴性血清为样品,比较3个国产(A、B、C)和2个国外(D、E)ELISA试剂盒检测猪弓形虫病的敏感性。用这5种ELISA试剂盒,检测人工感染弓形虫的猪阳性血清42份及感染前的阴性血清45份,并参考PCR扩增结果,比较这5种ELISA试剂盒检测猪弓形虫病的敏感性。5种试剂盒中,1种国产试剂盒的检测结果与PCR结果完全一致,其余4种试剂盒的检测结果都与PCR检测结果差别较大。结果表明,国产试剂盒A的检测效果最佳,国外试剂盒与部分国内试剂盒的检测结果相当,临床选用试剂盒时,可选择检测效果最佳的试剂盒A,不必盲目选择国外试剂盒。     

豫北地区致病性鸡大肠杆菌的分离鉴定

笔者于2004年9月至2005年7月从豫北地区采集病料,通过对所采集的88份样品进行分离鉴定,最终确定出该地区主要的血清型是O1、O2、O78、O111。1材料与方法1.1材料1.1.1标准菌株购自中国兽医药品监察所。1.1.2病料采集于新乡市畜牧兽医工作站,河南科技学院兽医院等的病鸡中共采集到88份样本。1.1.3培养基三糖铁琼脂,购自北京奥博星生物技术责任有限公司;麦康凯琼脂,购自北京双旋微生物培养基制品厂;伊红美蓝琼脂,购自杭州微生物试剂厂;邓亨氏蛋白胨水溶液、葡萄糖蛋白胨水溶液,Simmons氏固体柠檬酸盐等培养基均按常规方法制备。1.1.4生化试剂…