用PCR法检测猪繁殖-呼吸综合征病毒和猪圆环病毒混合感染病例研究

根据已发表的猪繁殖-呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)的核苷酸序列设计特异性引物，应用PCR方法对从福清市某养猪场病猪采集的淋巴结、肺、脾等器官组织病料进行检测，发现该猪场病猪病料的检测结果PRRSV和PCV-2同时为阳性，从而证实了PRRSV和PCV-2在该病猪体内混合感染。     

鸡传染性喉气管炎病毒的分离和TK基因鉴定

从临床表现以呼吸困难、喉头出血为主要特征的某蛋鸡场患鸡喉头和气管等组织分离到一株病毒。该分离毒无血凝特性,应用检测ILTVTK基因的PCR能从分离毒中扩增出大小为427bp的特异性目的片段。测序结果与GenBank收录的ILTV不同毒株序列的同源性为100%。结果初步表明该分离毒为鸡传染性喉气管炎病毒(命名为ILTV-FJ)。     

猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR检测方法的建立和应用

根据GenBank上发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)基因序列,针对TGEVN基因全序列设计合成了一对引物,以TGEV疫苗株为模板,建立了检测TGEV的RT-PCR方法。应用该方法对TGEV疫苗株RNA进行扩增,获得与预期大小相符,长度为1168bp的特异性目的片段;测序结果与已报道的TGEV不同毒株的序列同源性达到95%～97%;敏感性测定该RT-PCR可扩增到18pg的TGEV-N-cDNA;对猪传染性胃肠炎(TGE)的病料进行RT-PCR鉴定,可检测出TGEVN基因片段。结果表明建立的RT-PCR方法对TGEV的检测敏感性高、特异性强,可用于TGEV感染的诊断和流行病学调查。     

蛋鸡混合型鸡痘的诊断与防治

2011年6月福州市罗源县某蛋鸡场蛋鸡出现产蛋下降,咳嗽、喘气,皮肤出现痘状干酪样物,喉气管有黄色干酪样物附着为主要特征的疫病。死亡率达10％。先后用强力霉素、恩诺沙星等抗生素治疗,但效果不明显。我们分别取发病蛋鸡和自然病死蛋鸡的皮肤痘状干酪样物、喉气管组织鉴定为鸡痘病毒感染,通过疫苗和药物治疗相结合控制了该病。     

MDRV和H9 AIV共感染对番鸭免疫反应的抑制作用

8日龄番鸭人工感染番鸭呼肠孤病毒（MDRV）和/或H9亚型禽流感病毒（H9AIV）,探讨病毒感染对番鸭免疫反应的影响。结果显示,H9AIV感染组番鸭发病率低（10%）,无死亡;显著抑制番鸭淋巴细胞增殖反应,抑制法氏囊和胸腺的发育,脾脏肿大,但不影响生长。MDRV单独感染番鸭发病率75%,病死率45%,对番鸭淋巴细胞增殖...     

番鸭呼肠孤病毒感染对禽流感疫苗免疫抗体应答的影响

1日龄番鸭感染番鸭呼肠孤病毒(MDRV)后,应用MTT法测定番鸭血液、脾脏和胸腺的B淋巴细胞增殖功能,应用血凝抑制方法检测禽流感疫苗免疫后抗体变化规律,探讨MDRV对B淋巴细胞功能的影响。结果显示:免疫组番鸭禽流感疫苗二免后H5和H9 AIV-HI抗体效价上升,二免后14 d HI效价最高,随后抗体效价维持在7.5 log2以上。MDRV组番鸭二免后抗体缓慢上升,二免后21 d HI效价最高,随后抗体效价维持在6.0 log2以下,HI效价与对照组差异极显著(P0.05)。1日龄番鸭人工感染MDRV后,免疫后7 d外周血T淋巴细胞增殖指数与对照组相比明显下降(P0.05)。免疫后14~28 d与对照组相比显著下降,差异极显著(P0.01),表明MDRV感染抑制了B淋巴细胞增殖功能。以上结果表明MDRV感染能抑制抗体应答和番鸭外周血和免疫器官中B细胞的增殖功能作用,造成B细胞功能抑制。     

猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)福建分离株核衣壳蛋白基因(N)的克隆与表达分析

猪传染性胃肠炎(swine transmissible gastroenteritis,TGE)是一种高度接触性肠道传染病,是我国法定检疫的疫病。为研究福建省猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)核衣壳蛋白基因(N)的分子特征及其原核表达产物的抗原性,参照GenBank中的TGEV全基因序列,设计合成一对扩增TGEV福建(FJ)分离株N基因的特异性引物,进行克隆和序列分析,结果表明,TGEV-FJ株N基因全长1149bp,编码382个氨基酸(GenBank登录号JQ700302),与国内外23株TGEVN基因的核苷酸同源性,氨基酸同源性进行比较分析,N基因核苷酸的同源性为95.4%～99.8%,氨基酸同源性为96.1%～100%。TGEV-FJ株N基因克隆至原核表达载体pET-32a中,并转化到大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)中进行表达。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白约为68kD,与预期分子量一致;Western blot分析表明,重组蛋白能与抗TGEV阳性血清反应出现特异性条带;以纯化的重组TGEVN蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性,送检20份猪(Sus scrofa)TGEV阳性血清样本中检出16份阳性结果、10份阴性血清样本中检出9份阴性结果。利用纯化的TGEV重组N蛋白免疫Balb/c小鼠,杂交瘤技术制备单克隆抗体,获得了1株特异性好并能稳定分泌抗TGEVN蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为1-27),间接免疫荧光试验证明,该单抗能特异性识别TGEV全病毒抗原。TGEVN蛋白的单克隆抗体制备为建立TGEV免疫学检测方法提供了基础资料。     

伪狂犬病病毒囊膜蛋白ISCOMs免疫原性测定

应用伪狂犬病病毒囊膜蛋白与Quil A结合制备囊膜蛋白免疫刺激复合物(PRV-ISCOMs)，并通过ELISA、血清中和试验和淋巴细胞转化试验(Brdu-ELISA法)测定其诱导小鼠体液和细胞免疫应答水平。结果如下：1)小鼠分别接种3、7、10ug的PRV-ISCOMs后，于接种后PI7d血清中可测出ELISA IgG而抗体，随后抗体水平逐渐升高。间隔21d加强免疫后，FLISA IgG抗体水平进一步提高，且中和抗体效价均在1：22以上，而未加佐剂的囊膜蛋白对照组均无中和抗体；2)淋巴细胞转化试验初步结果表明PRV-ISCOMs能诱导小鼠的细胞免疫应答。3)免疫保护力测定显示免疫鼠能抵抗强毒攻击。上述结果表明PRV-ISCOMs具有良好的免疫原性，能诱导小鼠的体液免疫和细胞免疫应答。     

温棚番茄灰霉病的发生与综合防治

<正>近几年以来,随着保护地蔬菜种植面积的迅速扩大,蔬菜灰霉病由原来的次要病害上升为主要病害。该病除危害番茄外,还可侵染茄子、黄瓜、韭菜、莴苣、甜椒、菜豆、西葫芦等,发生早、传播快、危害重。1症状番茄幼苗和成株期均可受害,可危害植株的叶、茎、花和果实,但以花器和幼嫩果实受害最重。1.1苗期症状苗期多从子叶和下部叶片开始发病,一般叶片先从叶尖开始,形成大型"V"字形病斑,向内扩散,病斑初期成水浸状,边缘     

应用RT-PCR检测人工感染番鸭体内番鸭呼肠病毒的动态分布

应用RT-PCR技术检测番鸭呼肠病毒在人工感染番鸭体内的动态分布情况.结果显示,1日龄感染番鸭呼肠病毒MW9710株,3 d后就可以从肝、脾等组织中检出病毒RNA,直到32 d不能从组织样品中检测到病毒RNA,检出高峰期为感染后7 d～14 d.在6种不同组织中均不同程度地检测到病毒核酸,其中以肝脏组织检出率最高(68.9%),其次为脾脏(62.2%)、心(48.9%)、肾(46.7%)和胰(35.6%);肛门棉拭子的检出率最低(17.8%),显示了番鸭呼肠病毒在感染机体内的动态分布情况.