棉花黄萎病拮抗细菌7-30菌株的筛选与鉴定

[目的]筛选大丽轮枝菌的拮抗芽孢细菌,并对其进行生理生化鉴定。[方法]以棉花黄萎病痛原菌大丽轮枝菌（Verticillium dahliag）V-190为测试菌,筛选对其具有拮抗作用的芽孢细菌。通过初筛及复筛,得到1株具有较强抑菌活性的拮抗细菌7-30菌株,并对该菌株进行了形态特征观察和生理生化鉴定。[结果]通过初筛从各地的土样中分离到84株拮抗细菌菌株,再对其中拮抗能力较好的18株进行了复筛,得到抑菌圈达18．9mm的强抑菌活性的拮抗细菌7-30菌株,结合其形态特征和生理生化特征综合考察,初步判断其为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。[结论]获得了大丽轮枝菌的拮抗芽孢细菌7-30菌株。     

棉花黄萎病生防芽孢杆菌 Z-5 菌株发酵培养基的优 化简

 在农用微生物菌剂中芽孢杆菌菌剂产品多采用芽孢作为有效成分,因此产芽孢条件的优化对棉花黄萎病生防细菌的工业生产有着重要意义。本文通过单因素试验分析了8种碳源、8种氮源和6种无机盐对Bacillus malacitensis Z-5菌株芽孢产量的影响,采用Plackett-Burman试验设计确定了影响芽孢产量的主要因素,用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法确定主要影响因素的最佳条件。结果表明,单因素试验筛选出3种碳源（玉米粉、麸皮、葡萄糖）、3种氮源（豆饼粉、花生饼粉、酵母粉）和2种无机盐（MnSO₄·H₂O、CaCl₂）;Plackett-Burman试验确定Z-5菌株生产芽孢最适碳源、无机盐和氮源分别为玉米粉、MnSO₄·H₂O和豆饼粉,最陡爬坡路径法获得此3种因子的最适浓度范围为：玉米粉1.0%~2.0%、MnSO4·H2O 0.05%~0.09%、豆饼粉为1.0%~2.0%。响应面法得到芽孢产量与玉米粉、MnSO4·H2O和豆饼粉含量的回归方程。最终确定优化培养基组合为玉米粉1.66%、豆饼粉1.30%、MnSO₄·H₂O 0.07%、NaH₂PO₄·2H₂O 0.2%、Na₂HPO₄·2H₂O 0.4%,优化后芽孢产量达到1.9⁷×10⁹ mL^-1,与理论值基本相符。     

枯草芽孢杆菌JA-14菌剂对肉鸡粪便中氨气释放量的影响

为了降低肉鸡粪便中氨气的释放量,净化鸡舍内环境,提高肉鸡的生产性能,向肉鸡基础日粮中添加枯草芽孢杆菌JA-14菌剂(基础日粮组为对照组),采用纳氏比色法测定肉鸡粪便中氨气的释放量,并测定粪便的蛋白酶活力、总氮和氨态氮含量、pH值及水分含量。结果显示,与对照组相比,添加JA-14菌剂组粪便中氨气释放量下降了24.88%,蛋白酶活力提高了23.25%,总氮和氨态氮含量分别下降了35.72%和63.80%,pH值和含水量分别下降了6.31%和25.66%。可见,枯草芽孢杆菌微生态制剂能够提高肉鸡肠道蛋白酶活力、减少氨气排放量。     

特异腐质霉来源漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

漆酶是一种含铜的多酚氧化酶,在有机农药残留和木质素的降解方面具有潜在的工业价值。从特异腐质霉Y1(Humicola insolens Y1)中分离到了漆酶基因Lac1,其全长1 803 bp,编码600个氨基酸,与NCBI蛋白数据库比对结果表明,与来源于Chaetomium globosum CBS 148.51(XP_001228806)的多酚氧化酶序列相似性最高为71%,表明是一个新的漆酶基因。将其克隆入毕赤酵母表达载体pPIC9r中,通过PCR和SDS-PAGE检测证实基因已经整合入酵母基因组中且能分泌表达。在3 L发酵罐中,重组Lac1蛋白表达量达到3.79mg/mL发酵液,酶活性达到1.3 U/mL发酵液。酶学性质分析结果显示,漆酶的最适作用温度为65℃,最适反应pH为4.5,且在pH 6～11的范围内酶的相对活力均在70%以上。     

棉花黄萎病拮抗细菌DS45-2菌株在土壤和棉花根内的定殖

通过盆栽试验,对棉花黄萎病拮抗细菌DS45-2菌株在土壤和棉花根际、根内的定殖情况进行了分析。结果表明,在自然条件下,拮抗细菌DS45-2菌株能够在土壤及棉花根际、根内定殖。拮抗菌株DS45-2施到土壤中后的45d内,其定殖数量在开始25d内显著下降,但随后下降缓慢并逐渐趋于稳定,维持在106个·g-1土左右。接菌后45d,DS45-2在棉花根内的定殖菌量达2.35×104个·g-1根,在棉花根际的定殖菌量达97.4×106个·g-1土,且重新分离出的拮抗菌株保持较高的拮抗活性。DS45-2菌株在灭菌土中的定殖数量高于自然土中的数量。随土层深度的增加,定殖菌量呈下降趋势,但变化不明显。     

产乳酸芽孢杆菌RS-1菌株的分离及鉴定

为了得到可以产乳酸的芽孢杆菌,通过加热富集培养及特异性MRS培养基结合溶钙圈的方法,从发酵制品、土样及腐烂水果等样品中分离纯化出15株具有产乳酸能力的芽孢杆菌。将这些菌株进行纯化培养,利用纸层析法和EDTA定钙法进行定性和定量研究,筛选出1株产乳酸能力较高的菌株,命名为RS-1。并对其进行形态鉴定,生理生化鉴定及16S rDNA全序列分析,最终鉴定此菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

棉花黄萎病内生拮抗细菌的分离及LC-04菌株的鉴定

从棉花根、茎、叶部组织中分离到19株对棉花黄萎病菌大丽轮枝菌有枯抗作用的细菌,其中抑菌圈直径大于20mm的菌株1株.直径10～20mm之间的菌株5株,直径小于10mm的菌株13株.分离自棉花叶部组织的LC-04菌株对大丽轮枝菌V-190菌株生长的抑制作用最强.通过时LC-04菌株菌体形态、菌落特征的观察和一系列生理生化试验分析,该菌株鉴定为类芽孢杆菌属细菌.     

一株大丽轮枝菌拮抗细菌7-47菌株的分离与鉴定

 从全国各地棉田采集土样,筛选对棉花黄萎病致病菌大丽轮枝菌（Verticillium dahliae Kleb.）具有拮抗作用的芽孢杆菌菌株。通过初筛得到具有拮抗作用的菌株68株,复筛选出1株拮抗活性较高的菌株7-47,并通过生理生化试验,形态特征的观察及16S rDNA的序列分析对其进行了鉴定,认为菌株7-47属于漠海威芽孢杆菌（Bacillus mojavensis）。     

病毒宁体外抗单纯疱疹病毒药效评价

采用细胞培养法评价中药制剂"病毒宁"对Ⅰ型单纯疱疹病病毒(HSV-Ⅰ)致细胞病变的影响。结果显示:"病毒宁"最大无毒浓度(TD_0)为1.5 g/L,无环鸟苷最大无毒浓度(TD_0)为62.5 mg/L,二者都能抑制单纯疱疹病毒的复制和增殖,且"病毒宁"优于无环鸟苷。二者对100半数感染剂量(TCID_(50))HSV-Ⅰ与10 TCID_(50) HSV-Ⅰ致细胞病变作用有显著差异(P<0.05),对1000 TCID_(50)HSV-Ⅰ抑制作用不明显(P>0.05)。"病毒宁"MIC为0.08 g/L,无环鸟苷MIC为9.2;无环鸟苷TI为8.0,"病毒宁"TI为36.9,是无环鸟苷的4.6倍,表明"病毒宁"是一种细胞毒性小、治疗指数高的有效抗HSV-Ⅰ药物。     

超级人工体外瘤胃——秸秆发酵生产高蛋白饲草技术

由河北农业大学朱宝成教授和他的研发团队经过多年潜心研究研制成功的一种新型的农作物秸秆处理技术——发酵秸秆生产高蛋白饲草技术,经媒体报道后引起业内的广泛关注(我刊于上期也做了相关报道)。据了解,这项技术主要是模拟瘤胃微生物的发酵原理,在外部环境中通过降解秸秆中的纤维素产生挥发性脂肪酸,转化利用外源无机氮合成菌体蛋白,对饲草进行饲喂前的加工,从而提高秸秆的利用率,节省饲料用粮。经大量的试验证明,采用秸秆发酵生产高蛋白饲草技术,能够使作物秸秆中粗蛋白含量提高8~10个百分点,中性洗涤纤维降解率达到40%以上。有业内人士预言,本项技术的研发成功,将在我国秸秆利用技术上掀起一场新的革命,从根本上解决了我国长期以来秸秆资源得不到有效利用的问题。为了让广大读者更加详尽地了解朱宝成教授和他的研发团队的这一科技创新成果,本期我们将全文刊登朱教授撰写的文章《超级人工体外瘤胃——秸秆发酵生产高蛋白饲草技术》,敬请分享。