CDK2和P53在细胞中心体复制与调控中的作用

中心体是真核生物重要的细胞器,其复制与调控异常可能是体外胚胎发育异常的重要原因,而CDK2和P53是调控中心体复制的关键且必要因子,在细胞中心体复制调控中起核心作用。作者简要介绍了中心体的功能和复制过程,重点综述了CDK2、P53及其相关因子在中心体复制调控中的作用,对研究体外受精胚胎和克隆胚胎的发育异常具有一定的理论意义。     

牛精子全蛋白二维电泳等电聚焦程序优化及染色方法的比较

以牛精子全蛋白为试验材料进行二维电泳试验研究,优化和改进了一向等电聚焦参数,比较了不同的染色方法,并运用Image Master 6.0软件分析了二维电泳图谱。结果表明,采用24 cm,pH3～10线性IPG胶条进行牛精子全蛋白二维电泳,等电聚焦80000 Vh和结合硝酸银染色方法可得到较多蛋白点和较高分辨率的二维电泳图谱。     

白藜芦醇对奶牛性控冻精品质和体外受精能力的影响

本研究旨在探究不同浓度白藜芦醇处理对奶牛性控冻精品质和体外受精能力的影响。在解冻后的奶牛性控冻精中分别添加0、10~(-3)、10~(-4)、10~(-5) mol/L的白藜芦醇,各组精子在受精液中获能孵育1.5 h后,测定精子质量和体外受精能力。结果表明:添加白藜芦醇均可有效降低性控冻精中活性氧(ROS)含量、提高顶体完整活精子比例(P0.05),其中10~(-3)、10~(-4) mol/L的白藜芦醇处理对降低ROS含量最为显著;10-4 mol/L的白藜芦醇处理可显著降低丙二醛(MDA)含量并提高性控冻精的卵裂率和囊胚率(P0.05)。综上所述,白藜芦醇作为一种外源性天然抗氧化剂,通过降低性控精液中过量的ROS水平、抑制精子脂质过氧化反应、保护顶体完整性,从而提高性控精子质量和体外受精能力。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对牛冷冻精液品质及受精能力的影响

本试验旨在探究牛冷冻-解冻精液中添加不同浓度表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对精液品质及受精能力的影响。在牛冷冻-解冻精液中添加不同浓度(0、5、10和20μmol·L~(-1))EGCG,38.5℃孵育1h后,检测精子动力学参数、结构完整性、精子中相关酶活力和体外受精能力。结果表明,10μmol·L~(-1)EGCG处理显著提高了精子活力(TM,%)和鞭打频率(BCF,Hz,P0.05);与对照组相比,5、10和20μmol·L~(-1)EGCG处理组精子质膜和顶体完整率显著升高(P0.05);5和10μmol·L~(-1 )EGCG处理组精子线粒体膜完整率显著升高(P0.05);10和20μmol·L~(-1 )EGCG处理能够显著提高精子中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力,10μmol·L~(-1 )EGCG处理降低乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA)含量(P0.05);10和20μmol·L~(-1 )EGCG处理显著提高了精子受精后早期胚胎卵裂率和囊胚率(P0.05)。综上表明,10μmol·L~(-1)EGCG处理牛冷冻-解冻精液能提高精液品质及受精能力。     

不同分割液对小鼠不同阶段胚胎分割效果的影响

本实验在保存液、PBS液、0.2 mol/L蔗糖PBS液和进口分割液中对不同发育阶段的小鼠胚胎进行徒手分割,分割后的胚胎进行体外培养,探讨不同分割液对胚胎分割效果的影响。结果表明:不加血清PBS液组显著低于保存液、0.2 mol/L蔗糖PBS液、进口分割液组(P<0.05);桑椹胚组显著低于囊胚组(P<0.05)。说明在0.2 mol/L蔗糖PBS液和进口分割液中分割胚胎的成功率比较高,半胚的发育率较理想。     

影响奶牛体细胞手工克隆技术因素的研究

旨在优化奶牛的手工体细胞克隆技术方案,本试验以牛卵母细胞为材料研究了2个半卵不同粘合交流电压、重构胚不同激活方法和不同的COCs采集方法对奶牛手工体细胞克隆胚发育的影响.结果表明,(1)降低2个半卵粘合交流电压能显著提高其随后的卵母细胞融合率(P<0.05);(2)A23187+6-DMAP组激活的无透明带重构胚分裂率和囊胚率显著高于Ionomycin+6-DMAP组(P<0.05);(3)真空蠕动泵抽吸法和刀片切割法获得的卵母细胞总数显著高于注射器抽吸法(P<0.05),而切割法获得的1和2级卵母细胞百分数显著高于其它2种方法(P<0.05).因此,采用真空蠕动泵抽吸法获得COCs,用较低的粘合交流电压进行半卵粘合,采用A23187+6-DMAP激活法进行融合后的激活能显著提高奶牛手工体细胞克隆效率.     

鲁西黄牛皮肤成纤维细胞分离与培养的研究

研究了鲁西黄牛耳皮肤成纤维细胞的分离与培养、纯化方法及生长特征,获得了传代培养的鲁西黄牛皮肤成纤维细胞和上皮细胞.鲁西黄牛耳皮肤细胞在体外培养时呈贴壁生长,其原代或早期传代培养物由上皮样细胞与成纤维细胞混合组成.传代培养混合生长的细胞用0.25%胰蛋白酶液37℃下消化处理3～4 min,脱壁悬浮的主要为成纤维细胞.采用反复消化法在传代过程中将二者逐步分离纯化,获得了可正常传代的鲁西黄牛耳上皮细胞系和成纤维细胞系.通过绘制生长曲线研究了鲁西黄牛耳皮肤成纤维细胞的增殖规律.传代培养至12代的鲁西黄牛皮肤成纤维细胞染色体倍性正常.利用第6代成纤维细胞作核供体克隆试验结果证明重构胚体外发育正常,囊胚发育率为27.3%.     

PCR法鉴别哺乳动物胚胎性别的研究(上)

本研究的目的是建立一种应用PCR技术快速鉴别多种哺乳动物胚胎性别的方法,并用其来鉴定猪10～11天雌、雄胚胎直径是否存在明显的差异。先用猪染色体DNA建立PCR反应条件,然后用其它种类的哺乳动物染色体DNA做试验。