禽多杀性巴氏杆菌C48—1成熟外膜蛋白H重组亚单位疫苗免疫效果的研究

将融合表达禽多杀性巴氏杆菌成熟外膜蛋白H（OmpmH）的重组菌pGEX—ompmH／BL21大量培养，在最佳诱导条件下诱导表达，表达产物经蛋白酶剪切及亲和层析纯化，得到OmpmH基因的原核表达产物，将其与弗氏完全佐剂混合制成油乳剂亚单位疫苗，用该疫苗肌肉注射接种5周龄鸡，首免后每周采血检测抗体，二免后第2周用10LD50禽多杀性巴氏杆菌强毒菌株C48-1进行攻击。结果显示，OmpmH具有良好的免疫原性，能诱导鸡体产生特异性抗体，可抵抗强毒菌株C48-1的致死性攻击，免疫效果优于禽多杀性巴氏杆菌弱毒疫苗。     

甘肃省梨主要病虫害综合防治技术规程

为促进甘肃省梨产业健康高效发展,根据国家及行业标准,结合多年试验和生产实践,从适用范围、规范性引用文件、防治原则以及农业防治、物理防治、生物防治、化学防治等方面总结制定了甘肃省梨主要病虫害综合防治技术规程。本规程的制定将为甘肃省梨树病虫害的综合防控提供了有力的技术支撑,进而促进甘肃梨产业高质量绿色标准化生产。     

三元杂交猪IL-18全基因的序列测定及分析

白细胞介素-18（IL-18）又称γ干扰素诱导因子（IGIF）,研究表明IL-18是一种重要的新型免疫佐剂分子。为探讨猪IL-18的免疫佐剂作用,该研究根据已发表的猪IL-18基因序列,设计并合成1对特异性引物,从猪脾脏中直接扩增得到猪IL-18全基因,并进行克隆和序列测定、分析。     

青藏高原地区青稞茎基腐病病原菌的群体遗传多样性、毒素化学型及其地理分布

为明确青藏高原沿线甘肃省甘南藏族自治州和青海省青稞茎基腐病燕麦镰孢菌Fusarium avenaceum的群体遗传多样性、毒素化学型及其地理分布,采用SSR分子标记法对6个地理种群91株燕麦镰孢菌菌株的遗传多样性进行分析。结果表明,6对SSR引物在91株燕麦镰孢菌中共检测到等位位点数14个,多态性位点数13个,多态性条带百分率为92.86%。6个地理种群的平均等位基因数为1.82,有效等位基因数为1.55,Nei’s基因多样性指数为0.32,Shannon信息指数为0.47,多态性位点数为11.50,多态位点百分率为82.15%。6个地理种群的Nei’s遗传相似度为0.83～0.99,遗传距离为0.01～0.18。种群间的遗传距离和地理距离、遗传相似度与海拔差距无显著相关性。燕麦镰孢菌地理种群聚为3个大类群,Group Ⅰ由甘肃省临潭县、合作市和卓尼县种群组成,Group Ⅱ由青海省互助土族自治县和刚察县种群组成,Group Ⅲ由青海省海晏县种群组成。燕麦镰孢菌种群的遗传变异主要来自种群内部,占总变异的93.63%。燕麦镰孢菌毒素化学型分为NIV、DON、3-AcDON三大类,没有15-AcDON毒素化学型,其中DON毒素化学型在6个地理种群中均有分布。表明燕麦镰孢菌地理种群的遗传多样性高。     

甘肃中西部旱区宽行密株梨园水肥一体化管理技术

水肥一体化技术是宽行密株模式梨园的重要土肥水管理措施。甘肃省农科院林果花卉研究所梨育种与栽培团队以节水、节肥、高效为目标,总结优化了适用于本地区主栽梨品种的水肥一体化技术方案,针对土壤和气候类型,明确阐述了灌溉和施肥时期,给出了灌水量和施肥量,以此作为生产实践指导,也可为其他地区推广应用此项技术提供依据和参考。     

甘肃省主要产区梨树腐烂病发生和防治调查

对甘肃省5个梨主产区14个村25个果园的梨树腐烂病的发生及防治情况进行了调查.结果表明,梨树腐烂病总体发病率高达62.1％,病情指数为34.4.不同产区间差别较大,景泰县和甘州区的发病株率分别高达92.0％和80.8％,而静宁县发病率最低,为27.2％.随着树龄的增大,发病株率提高,5～8年生梨树发病株率为6％,9～1...     

关于灵芝改善睡眠功能的研究

通过直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间、提高戊巴比妥钠阈下催眠剂量实验和缩短巴比妥钠睡眠潜伏期实验,观察灵芝提取物对睡眠的作用。结果:经口给予小鼠不同剂量的灵芝提取物30天,对照组及3个剂量组在给予受试物60分钟内,均未发现有直接睡眠效应。与对照组比较,灵芝提取物在45.0mL/kg.bw剂量组时能延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间(P<0.01)、提高戊巴比妥钠阈下剂量小鼠入睡动物发生率(P<0.05)、缩短巴比妥钠睡眠潜伏期(P<0.05),即灵芝提取物具有改善睡眠的功能。灵芝提取物对小鼠体重增长无影响。     

三元杂交猪IL-18全基因的序列测定及分析(英文)

[Objective] To clone the porcine interleukin-18(IL-18) cDNA and explore the immunological effectiveness of porcine IL-18 as an adjuvant of genetic vaccine. [Method] The spleen lymphocytes were isolated from Henan three-way cross-breeding pigs. According to the porcine IL-18 gene in GenBank, a pair of specific primers was designed. The full length cDNA of porcine IL-18 was amplified by RT-PCR. Subsequently, porcine IL-18 cDNA was cloned into pGEM-T vector and sequenced and analyzed. [Result] The porcine IL-18 gene demonstrated an open reading frame of 579 bp encoding an inactive precursor protein with 192 amino acids. The precursor protein had no typical hydrophobic signal peptide and cleaved by interleukin-1 beta (IL-1β) converting enzyme (ICE) in caspase-1 splice site; the porcine mature protein had biological activity. After comparing with other porcine IL-18 genes, the nucleotide sequence homology was over 96% and the deduced amino acid homology was more than 98%. [Conclusion] A full length procine IL-18 gene was gained. It lays the foundation for porcine IL-18 as an adjuvant of genetic vaccine.     

洋葱贮藏期干腐病致病镰刀菌的鉴定及室内药剂毒力测定

【目的】明确洋葱贮藏期干腐病致病镰刀菌的病原菌.【方法】采用形态学与分子生物学方法对洋葱干腐病病原种类进行了鉴定,在CLA培养基上对两株典型菌株的菌落形态和培养特征进行了观察和描述.【结果】rDNA-ITS序列测定和同源性比对结果表明,两菌株的ITS序列分别与GenBank数据库已知尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)的同源性均达99%,其片段大小分别为519bp和521bp.致病性测定结果表明,两种菌均能引起洋葱干腐病,其中尖孢镰刀菌的致病力强于层出镰刀菌.室内药剂毒力测定结果表明,43%戊唑醇对两种镰刀菌的抑菌效果最好.【结论】尖孢镰刀菌(F.oxysporum)和层出镰刀菌(F.proliferatum)是洋葱贮藏期干腐病的病原菌,由层出镰刀菌引起的洋葱干腐病属首次报道.     

重组伪狂犬病病毒介导的siRNA对高致病性PRRSV N蛋白基因表达的抑制作用

构建表达HP-PRRSV河南分离株HN1 N蛋白基因的siRNA重组伪狂犬病病毒3株,将其感染PK-15细胞,在细胞水平上评价重组伪狂犬病病毒介导的siRNA对N蛋白表达的抑制效果.PCR扩增带CMV-siRNA-poly(A)片段和新霉素基因,通过酶切将CMV-siRNA-poly(A)片段和新霉素基因分别插入伪狂犬病病毒转移载体pUSKBH中,构建重组伪狂犬病病毒通用转移载体pUsiRNA.分别用BamH Ⅰ和HindⅢ酶切pUsiRNA,回收后与HP-PRRSV河南分离株HN1 N蛋白基因的3个siRNA分子连接,构建表达N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒表达载体.将鉴定正确的重组伪狂犬病病毒表达载体与伪狂犬病病毒DNA共转染PK-15细胞,经同源重组及噬斑纯化获得表达N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒株,应用PCR及Southern blot鉴定重组病毒.将HN1株N蛋白基因的真核表达质粒pAcGFP1-N转染PK-15,经筛选获得稳定表达N蛋白基因的细胞.将鉴定正确的表达N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒接种于稳定表达N蛋白基因的细胞,利用绿色荧光蛋白基因及半定量RT-PCR检测重组伪狂犬病病毒介导的N蛋白基因siRNA对N蛋白表达的抑制效果.结果显示,PCR扩增到的CMV-siR-NA-poly(A)片段约为0.7kb,新霉素基因约1.5kb.经酶切、PCR及测序鉴定,构建了表达siRNA的通用伪狂犬病病毒转移载体pUsiRNA.经PCR及Southern blot检测,获得了3株表达HP-PRRSV河南分离株HN1 N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒gG-/siRNAN1、gG-/siRNAN2和gG-/siRNAN3;经荧光显微镜观察和半定量RT-PCR检测表明,重组伪狂犬病病毒介导的N蛋白基因siRNA能够显著抑制N蛋白在PK-15细胞中表达,其中gG-/siR-NAN2抑制效果最好.这为深入研究N蛋白基因siRNA抑制HP-PRRSV复制奠定基础,并为HP-PRRSV的防制提供新的思路.