传染性法氏囊病安徽近期毒株VP2基因在昆虫细胞中的表达

为真核表达传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因,将2007年12月从安徽境内发生的传染性法氏囊病(IBD)免疫预防失败的病鸡法氏囊组织中克隆的IBDV VP2基因插入到pFastBac1供体质粒中,转化E.coilDH10Bac感受态细胞,经抗性筛选,获得重组杆状病毒表达质粒rBac-VP2,用脂质体法转染SD细胞.对rBac-VP2感染的Sf9细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光;用western blot分析,在50 ku处出现1条特异蛋白条带;电镜观察重组VP2蛋白能够自组装成病毒样颗粒.本实验为研制针对近期流行IBDV的新型病毒样颗粒疫苗和新型检测试剂奠定了基础.     

牛羊养殖业者谨防布鲁氏菌病

正布鲁氏菌病是由布鲁氏杆菌引起的一种人畜共患传染病,通常被称为布病。在实际生产中,牛羊养殖业者是布病的高发人群,如何做好牛羊布病防控工作成为公共卫生安全的重要内容之一。1深入了解布鲁氏菌病防控知识在饲养牛羊之前,牛羊养殖业者要全面掌握牛羊易感染疫病情况,了解其流行病学特点以及防控政策,便于在实际养殖中做好防控。     

新城疫病毒F48E9株M和NP基因的原核表达

根据新城疫病毒（NDV）F48E9国内标准强毒株编码序列设计了2对特异性引物,分别用于扩增M和NP基因。经序列测定,将其克隆到原核表达载体pET-30a（＋）上,转化E．coliBL21（DE3）,筛选表达NDVF48E9株M蛋白和NP蛋白的菌株。IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析结果表明,NDVM蛋白在E．coliBL21（DE3）内以可溶形式存在,而NP蛋白以包涵体的形式表达。用纯化的M和NP蛋白免疫鸡制备超免疫血清,进行Western-blot分析;结果,它们可以与真核表达系统表达的M和NP蛋白以及NDV发生特异性反应,表明,原核表达系统表达的NDVM和NP蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。     

猪李氏杆菌病症状及治疗

正李氏杆菌病是一种人畜共患病的散发性传染病,猪李氏杆菌病的主要特征是脑膜炎、败血症和流产,有的单核细胞增多。本病是一般散发,发病率低,但病死率很高。易发于冬季和早春,各种年龄的猪均可感染,但怀孕母猪和仔猪较易感染。结合当地养殖情况提出了有效的预防和治疗措施,为广大养殖户提供参考。1主要症状猪李氏杆菌病的症状很不一致,可分为败血型、脑膜炎型和混合型,而常见的是混合型,多见于哺乳仔     

家禽免疫副反应的发生原因及预防措施

<正>免疫接种是预防和控制家禽传染病,降低家禽死亡率的主要措施。但在接种疫苗过程中,由于受到疫苗质量、接种时间、免疫接种技术及家禽有机体健康状况等多种复杂因素的影响,一些家禽在免疫接种后出现症状轻重不等免疫接种是预防和控制家禽传染病,降低家禽死亡率的主要措施。但在接种疫苗过程中,由于受到疫苗质量、接种时间、免疫接种技术及家禽有机体健康状况等多种复杂因素的影响,一些家禽在免疫接种后出现症状轻重不等     

禽白血病A亚群病毒引起的淋巴细胞性白血病诊断

采用病理组织学方法和分子生物学技术对某肉种鸡场的感染鸡进行实验室诊断,在肿胀的肝、肾和法氏囊组织切片中观察到成淋巴细胞增生病变。针对禽白血病病毒(ALV)群特异性抗原P27基因进行RT-PCR扩增,肾、肺、肝、脾病料样本中ALV病原核酸的检出率分别为100%、100%、90%和50%。将扩增的目的基因序列与GenBank公布的ALV参考毒株相应序列进行比较,核苷酸序列的同源性达到93.6%~97.7%。取ALV囊膜糖蛋白gp85基因的扩增产物进行酶切分析,扩增的目的片断中存在BglⅡ和SspⅠ酶切位点,BamHⅠ不能切割PCR产物。试验结果证实本次疫病是由ALV-A亚群病毒引起的淋巴细胞性白血病。     

O型、A型及Asia1型3个型口蹄疫病毒通用套式RT-PCR检测方法的建立

为了建立针对流行于我国及周边国家主要口蹄疫病毒(FMDV)血清型的检测方法,本实验设计2对特异性引物,通过对反应条件的优化,建立了能够同时扩增O型、A型及Asia1型FMDV VP1全基因的套式RT-PCR (RT-nPCR)方法.该方法能特异性检测O型、A型和Asia1型FMDV,对其它相关动物病毒的检测结果均为阴性;比FMDV多重RT-PCR商品试剂盒敏感约1 000倍.利用该方法对10份FMDV样品进行扩增检测,结合扩增产物的克隆测序技术,对所检样品进行了准确定型.实验结果表明,该方法通用型强,可用于3个血清型FMDV的检测和分子流行病学调查.     

鸡新城疫病毒强弱毒株RT_PCR鉴别诊断方法

本研究通过对大量不同毒力ＮＤＶ Ｆ基因核苷酸序列分析,根据毒力和序列间的相关规律,分别设计合成了两组引物,建立一个可以迅速鉴别ＮＤＶ强、弱毒株的ＲＴ－ＰＣＲ方法,对强毒株可扩增出１３３ｂｐ的特异性片段的３６２ｂｐ的通用片段,弱毒株可以扩增出２５２ｂｐ的特异性片段的３６２ｂｐ的通用片段。只需一个ＲＴ－ＰＣＲ反应,整个实验过程可在５小时内完成。敏感性测定结果表明该方法的最低检出量不低于５００ｐｇ的ＤＮＶ ＲＮＡ。为了增加方法的实用性,我们进一步建立了直接从组织病料中检测并鉴别强弱毒株的方法。     

mRNA差异显示技术及其改进

分子生物学的首要任务之一就是比较不同细胞间或同一细胞不同时间与空间基因表达的差异。在多种基因检测技术中 ,mRNA差异显示技术作为研究细胞、组织在不同条件下 ,基因表达水平差异的重要手段 ,以不可替代的优势已被广泛用于生物学领域。该技术与传统的消减杂交等方法进行比较具有简便、快捷、灵敏、高效等优点 ,但也存在假阳性率高、易污染等缺点。为了克服以上缺点又不断涌现出一些改进技术。文章对该技术的原理、优势与不足及主要改进进行了综述     

奶牛饲料配方优化模型的研究

本研究通过对奶牛饲料特性和营养需要模型分析,实现了以线性规划的两阶段法为主要方法配合奶牛饲料配方的优化算法.本程序时单纯形法计算过程中的数据处理加以改造,提高了运算速度.