大鲵低聚糖肽对小鼠免疫功能调节作用的研究

按体质量将清洁级昆明种小鼠分成对照组(0g/kg.bw)以及低(0.01g/kg.bw)中(0.05g/kg.bw)高(0.1g/kg.bw)3个剂量组,分别以不同剂量的大鲵低聚糖肽饲喂小鼠8d后,测定小鼠血清中IgG含量、吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数以及T淋巴细胞活性。结果显示,与对照组相比,低、中、高各剂量组小鼠血清中IgG含量、吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数以及T淋巴细胞活性均显著提高。表明大鲵低聚糖肽可以有效提高小鼠的免疫功能。     

转基因烟草植株的检测

对采用叶盘法以质粒PBLGC为介导转化烟草的3个品种。经Kan抗性筛选获得的119株转化的烟草再生植株分别以启动子CaMV35S、几丁质酶基因和β—1，3-葡聚糖酶基因的引物进行PCR检测，分别获得91、72、47株阳性植株。其中，同时具有几丁质酶基因和β-1，3-葡聚糖酶基因的植株有36株。对部分转化植株进行PCR—Southern杂交实验的结果表明，外源基因的转化频率与植物品种、外源基因片段的大小有关。又对4株转基因植株后代(T1)进行了PCR、PCR—Southern杂交，结果发现，几丁质酶基因和β-1，3-葡聚糖酶基因已经稳定地遗传给后代，但二者的遗传传递率不同，β—1，3-葡聚糖酶基因似乎比几丁质酶基因更易于传递。另外，对转化植株T0代几丁质酶活力检测结果表明，转基因植株中几丁质酶活力显著增强，含有几丁质酶基因和β-1，3-葡聚糖酶基因的植株内切几丁质酶活力最强。     

观察长穗偃麦草(Thinopyron elongatum)体细胞染色体制片的好方法

观察二倍体长穗偃麦草的染色体一直是个难题,以二倍体长穗偃麦草种子(Thinopyron elongatum =E.elongata,2n=14 EE)为实验材料,对实验方法进行了改进,发芽前浸种处理24 h,将发芽时间和促芽生长时间分别延长至90～96 h,并对第一轮未萌发的种子进行二次萌发,使种子萌发率达到97%以上.取上述萌发处理后的种子进行根尖染色体制片,结果表明染色体中期分裂相多,染色体分散良好,形态特征清晰,显然,这是一种开展长穗偃麦草细胞学研究的有效方法.     

菜豆几丁质酶基因的克隆、序列分析及其表达

根据GenBank中收录的菜豆几丁质酶基因mRNA序列设计一对引物,以菜豆品种五常油豆总DNA为模板,通过PCR扩增获得一个约1.1kb的DNA片段Bchi,将其克隆入pUC18载体.测序和序列分析结果表明,该序列全长1088bp,含有一个981bp的完整开放读码框,无内含子,编码327个氨基酸,编码产物在结构上具有Class Ia几丁质酶的结构特征:N-端具有一个26个氨基酸的信号肽,其后是富含8个半胱氨酸、长41个氨基酸的几丁质结合区和由249个氨基酸组成的高度保守的催化区,C-端为由11个氨基酸组成的液泡定位多肽.序列与结构上的同源性分析表明Bchi基因是菜豆Class Ia几丁质酶基因.此序列已在GenBank中注册,登录号为AY357300.以pQE-30为原核表达载体,构建成pQE-Bchi重组表达载体,转化表达受体菌E.coliM15,经IPTG诱导后表达出一个约35kD的蛋白,与推测的Bchi基因编码产物的大小一致,表明Bchi基因在大肠杆菌中能够表达,是一个具有表达功能的基因.     

菜豆几丁质酶基因Bchi的克隆及其在转基因烟草中的表达

本文根据GenBank中公布的菜豆几丁质酶基因cDNA序列设计引物,通过RT-PCR得到一个菜豆几丁质酶基因家族基因Bchi.该基因编码一个327个氨基酸的多肽,其结构包括信号肽、几丁质结合区、铰链区、催化区和液泡定位多肽,属于Class Ia类内切几丁质酶.构建该基因的植物表达载体pMHL7133-Bchi,并通过发根农杆菌R1000介导转化烟草,经PCR和Southern blot鉴定获得了4株转基因烟草株系.几丁质酶活性分析表明,转基因烟草几丁质酶活力明显高于对照.抗真菌实验结果显示,转基因烟草的叶片基本无病斑产生,表明Bchi基因在烟草中高水平的表达显著提高了烟草对真菌病害的抗性.     

羊栖菜酵素对小鼠肠道菌群结构和粪便差异代谢物的影响

为探究羊栖菜Sargassum fusiforme酵素对小鼠肠道菌群结构及粪便差异代谢物的影响,每日一次使用剂量为0.2 mL/10 g(体质量)的羊栖菜酵素对体质量为(25±2)g的雄性小鼠连续灌胃45 d后,同时设灌胃相同剂量生理盐水的空白组,收集2组小鼠粪便,采用16S rRNA高通量测序技术对各组小鼠肠道菌群进行分析,同时采用UPLC-TOF-MS代谢组学对小鼠粪便代谢产物进行分析,确定代谢通路,并研究羊栖菜酵素与肠道微生物菌群之间的关系.结果表明:基于Illumina MiSeq平台,与灌胃生理盐水的空白组相比,羊栖菜酵素灌胃组小鼠粪便中乳杆菌属Lactobacillus、双歧杆菌属Bifidobacterium等有益菌丰度升高,拟杆菌属Bacteroides、幽门螺杆菌属Helicobacter等有害菌丰度降低;采用UPLC-TOF-MS代谢组学分析确定了正负离子模式下,有14个与羊栖菜酵素灌胃相关的粪便显著差异代谢物,涉及7个主要相关代谢通路,分别为嘌呤代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,嘧啶代谢,半乳糖代谢,精氨酸和脯氨酸代谢通路,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,精氨酸的生物合成,其中对前5个代谢通路的影响最为显著.研究表明,小鼠肠道中有益菌与致病菌比例在两组之间差异显著,羊栖菜酵素组中有益菌群比例均大于空白组,代谢产物也存在明显差异,羊栖菜酵素对小鼠的肠道菌群多样性具有调节作用.     

rd29A启动子的克隆及提高烟草抗逆性的研究

根据GenBank上公布的rd29A基因序列(D13044),利用PCR方法从拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组DNA中扩增得到了rd29A基因的启动子片段.序列分析表明,该片段与D13044有99%的同源性,它包括了DRE等4种完整的顺式作用元件.与GUS基因融合构建双元植物表达载体pBI-rd.转基因烟草的GUS活性组织染色分析及Northern杂交分析均表明,3种胁迫处理均可诱导GUS基因大量表达.其中,15%PEG和0.5%NaCl胁迫处理的转基因烟草比0℃低温处理的转基因烟草的GUS表达量高,而未经胁迫处理的转基因烟草的GUS基因只有少量表达.这些结果表明,rd29A属胁迫诱导型启动子,当植物遭受逆境胁迫时,rd29A启动子可以驱动下游目的基因超量表达,这就为通过基因工程途径提高植物抗逆性奠定了基础.     

刺参蛋白胰蛋白酶解产物生物活性的研究

用胰蛋白酶对刺参蛋白进行水解,研究其酶解液所具有的抗氧化活性及其对肠道菌群的作用。通过测定刺参蛋白酶解液清除DPPH(二苯基苦基苯肼)自由基、Feton体系产生的羟基自由基和邻苯三酚自氧化体系产生的超氧阴离子自由基的能力。同时,研究了刺参蛋白酶解液体外对肠道菌群生长的影响。结果表明,刺参蛋白胰蛋白酶解液具有抗氧化活性和促进乳酸杆菌生长、抑制大肠杆菌和产气杆菌生长的作用。     

海参肽果汁复合饮料的研制

以诺维信复合蛋白酶酶解海参获得的海参肽为原料,研制一种海参肽果汁复合饮料。对海参肽制备工艺和海参肽果汁复合饮料制备工艺进行了详细研究。结果表明,海参肽的最佳制备工艺条件为:在pH为6、酶解5h、温度为40℃以及加入重量百分比为0.5%诺维信复合蛋白酶条件下进行酶解溶于40mL水的2g海参粉。由感官评价得到的海参肽果汁复合饮料的最佳配比为:蜂蜜4.5g,柠檬汁3.0mL,海参肽粉0.03g,蓝莓果汁:红提果汁比例为1∶3。制得的海参肽果汁复合饮料呈深蓝色、酸甜适中、有浓郁的水果清香。     

海绵(Craniella australiensis)凝集素抗HIV活性研究

利用病毒合胞体抑制试验考察海洋无脊椎动物海绵（Craniella australiensis）凝集素的抗HIV活性。结果表明,海绵凝集素（Craniella australiensis lectin, CAL）对人类T淋巴细胞系C8166急性感染HIV-1_IIIB形成细胞合胞体具有较好的抑制作用。CAL在16.41 μg·mL^-1浓度时,对HIV诱导细胞病变的抑制达50%。不同时间加入凝集素对合胞体的抑制率结果表明,在0.5 h以内加海绵凝集素CAL可以有效地阻断C8166细胞合胞体形成。