泰勒焦虫重组蛋白 TaSP-Tams1-SPAG1间接ELISA 检测方法的建立

以真核表达的焦虫表面抗原重组蛋白 TaSP-Tams1-SPAG1作为 ELISA 板包被抗原,通过方阵实验确定抗原包被浓度,探索抗原包被时间、温度、一抗及二抗血清稀释度及作用时间,建立牛环形泰勒焦虫表面抗原重组蛋白 ELISA 方法.结果得出 TaSP-Tams1-SPAG1的最佳包被浓度为10μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100, ELISA 阳性反应的临界值为 OD 492nm ≥0．348,重复试验变异系数小于12％,所建立的 ELISA 方法不与牛巴贝斯虫及牛瑟氏泰勒虫血清发生反应.TaSP-Tams1-SPAG1为抗原建立的 ELISA 方法特异性强,敏感度高,重复性好,为牛环形泰勒焦虫病的准确检测及防治提供技术支持.     

泰勒虫重组抗原Tams1-spag基因原核表达与纯化

为了在低成本的情况下,得到高浓度、高纯度的环形泰勒虫表面重组抗原的融合蛋白,设定表达过程中不同的OD600nm、IPTG浓度与诱导时间,探索最佳表达条件。通过KCl染色法切胶后分别经透析袋电洗脱法与快速离心法回收目的蛋白。对上述试验的蛋白样品进行SDS-PAGE和Western blot检测。结果表明,在OD600nm=1时加入浓度为1mmol/L IPTG,过夜诱导时,重组蛋白的表达量最大。在KCl染色法切胶回收目的条带的基础上,电洗脱法与快速离心法均能得到同等浓度的高纯度目的蛋白,经Western blot检测重组蛋白的生物活性没有改变,仍具有良好的反应原性。     

IPTG诱导浓度、时间对Asia I型口蹄疫病毒VP1蛋白表达的影响

将口蹄疫病毒VP1基因插入原核表达载体pET-28a中,转化至大肠杆菌BL21。用不同的IPTG浓度与不同诱导时间诱导菌株表达VP1蛋白,分析不同IPTG浓度及不同诱导时间对蛋白表达量的影响,以确定最佳表达条件。结果表明,在一定范围内,随IPTG浓度的增高,表达量并不会随之增大;而在菌体对数生长期内,随诱导时间的延长,表达量会随之增大。最后确定当IPTG浓度为3 mmol/L,诱导表达到最长时间9 h时,VP1蛋白表达量最大。     

环形泰勒虫表面抗原Tams1-Spag1串联表达及其蛋白的生物信息学分析

为了研究环形泰勒虫表面抗原特性,以原核表达系统串联表达表面抗原Tams1-Spag1基因,并对其蛋白进行生物信息学分析。通过PCR技术扩增Tams1-Spag1基因片段后构建重组质粒p ET-28a-Tams1-Spag1,IPTG诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE与Western-blot检测显示,得到大小与预期分子量相当的目的蛋白;生物信息学分析发现,此串联重组蛋白Tams1-Spag1具有219个氨基酸,属于非分泌型亲水性蛋白,分别具有13个与11个可能的糖基化与磷酸化位点,存在两个低复杂性的结构域,一个NOT的结构域,预测有6个B细胞表位优势区段与10个T细胞表位优势区段,存在两段交叉反应性表位肽。本研究为深入探讨串联重组蛋白的免疫原性提供理论依据。     

资源县着力做大做强水果产业

本刊讯 近年来,广西资源县以培育和发展原生态农产品为着力点和切入点,依托优越的自然环境、独特的气候、肥沃的土壤、优质的水源和无工业＂三废＂污染等资源优势，大力发展特色优质水果产业，取得了显著成绩。     

资源县红提产业快速发展

<正>本刊讯广西资源县境内土壤肥沃,水质优良,空气清新,无工业"三废"污染,是发展无公害和有机农产品种植的天然宝地。该县于2002年在中峰乡大庄田村建立了红提种植示范点10.67hm2,2003年试挂果即获得极大成功,从而吹响了全县快速发展红     

资源县大力发展红阳猕猴桃产业

2004年，在广西区农业厅和桂林市政府的支持下。资源县利用招商引资的方式。引进了香港日升发展有限公司在当地投资建立红阳猕猴桃出口生产基地。示范种植13．33hm2。红阳猕猴桃属中华猕猴桃。是野生猕猴桃实生单株选育而成的稀有优良品种。其突出特证是果实横切后沿果心呈放射状，鲜红色，犹如红太阳，十分美观，肉质细嫩，口感鲜美，味如蜜，香气浓，富含维生素C、葡萄糖、果糖、柠檬酸和氨基酸等多种营养物质；     

资源县大力发展红阳猕猴桃产业

<正>本刊讯2004年,在广西区农业厅和桂林市政府的支持下,资源县利用招商引资的方式,引进了香港日升发展有限公司在当地投资建立红阳猕猴桃出口生产基地,示范种植13.33hm2。红阳猕猴桃属中华猕猴桃,是野生猕猴桃实生单株选育而成的稀有优     

狂犬病病毒SRV9株N、P、G和L蛋白基因的克隆及表达载体构建

以狂犬病病毒RNA为模板,采用RT-PCR方法克隆获取N、P、G及L蛋白编码基因核苷酸序列,应用定向克隆技术,构建真核表达载体 pcDNA3.1-N、pcDNA3.1-P、pcDNA3.1-G及pcDNA3.1-L.经测序鉴定证实获取的N、P、G及L蛋白区全长核苷酸序列与文献报道的一致,并成功构建了其真核表达载体.     

资源县进一步打造优质葡萄产业

去冬今春，广西壮族自治区资源县新种葡萄面积达266．67hm^2余，该县的优质葡萄产业已经成为当地农民增收致富、建设社会主义新农村和科技富民强县的一大支柱产业。