狂犬病病毒糖、核蛋白基因疫苗的构建及在小鼠的免疫试验

分别以 p IRES1neo和 p VAX1为载体 ,构建了以狂犬病病毒糖蛋白和核蛋白为目的基因的基因疫苗单或双基因表达载体。以司苯 -甘油作为包裹剂 ,按 1μg DNA用 0 .5μL司苯 -甘油比例混合 ,将各表达载体制成 DNA疫苗 ,进行小鼠免疫试验。免疫共分 p IRES1neo、p IG- neo、p IN- neo、p IGN、p IG- neo p IN- neo、p VAX1、p VG、p VN和 p VGN9个试验组 ,每只小鼠于后肢胫前肌每侧接种基因疫苗 5 0μL (0 .5 g/ L ) ,共免疫 3次 ,间隔 14 d。通过间接 EL ISA和细胞中和指数测定分别检测免疫应答水平。结果显示 ,1免疫 3次后 ,所有试验组抗体阳转率 10 0 % ;2第 3次免疫后 14 d检测 ,抗体水平显著上升 ;3以 p IRES1neo为载体构建的基因疫苗免疫效果普遍优于以 p VAX1为载体构建的基因疫苗 ,其中含有糖蛋白 /核蛋白双基因共表达载体 p IGN免疫组的抗体水平均高于其他试验组 ;4以 7.5个 L D50 的 CVS强毒肌肉攻毒 ,保护率达 89%。通过以上试验证明 ,p IGN是用于本动物免疫试验的最佳 DNA疫苗。     

我国部分城乡犬狂犬病中和抗体水平调查

以国际兽疫局(OIE)推荐的荧光抗体病毒中和试验(FAVN)对随机采自广东、河北、北京等地区的573份犬血清进行了狂犬病病毒中和抗体效价的测定,以确定犬群中狂犬病的免疫状况。结果显示,在不同地区或不同城市的动物防疫区域中,犬体内狂犬病病毒中和抗体平均水平存在着明显的差异,城市犬的中和抗体水平较高,有的中和抗体保护水平(0.5IU/mL)阳性率高达100%,少数则达不到保护水平,不同防疫区域狂犬病中和抗体水平为(0.08±0.03)~(4.39±1.45)IU/mL,平均保护水平阳性率为46.3%;乡村看家犬病毒中和抗体水平普遍较低,大部分犬体内无中和抗体,只有个别犬体内存在水平较低的中和抗体,平均保护水平阳性率为1.8%。     

一种改进的简单快速的多位点突变方法

为了在 1个基因序列内同时实现多个位点突变 ,本试验以犬 2型腺病毒 E3区为突变目的基因 ,建立了一种以多个引物多聚酶链式反应为基础的简单快速的多位点突变方法。首先根据需要在 E3区不同位置设计了与同一条链互补的 4条突变引物 ,在 4条引物 (PBGL、PNCO、PBST、PNOT)中分别引入了 Bgl 、Nco 、Bst B 和 Not 位点 ,与模板链核苷酸序列相比 ,每条引物内均包含了 2～ 3个突变的碱基 ;然后以含 CAV- 2 E3区基因的质粒为模板 ,利用高保真 DNA聚合酶、d NTPs和 5′末端磷酸化的 4条引物 ,在同一个 PCR反应管内进行突变 PCR反应 ,最后以 Dpn 消化反应管内模板链 ,取少许电激转化 E.coli DH10 B感受态细胞获得转化子。经上述 4种内切酶对转化子 DNA的酶切鉴定 ,证明获得了存在多种突变组合的突变基因 ,为进一步研究 E3区不同缺失对外源基因表达的影响奠定了基础 ,也为其他类似研究提供了一种简单快速的突变方法     

PCR检测犬腺病毒方法的建立

利用人工合成的两条引物,对病犬肝脏和细胞培养物冻融上清中的1、2型犬腺病毒DNA进行多聚酶链式反应（PCR）检测;再将扩增产物进行同位素标记,与纯化病毒DNA进行打点杂交。扩增产物经电泳分析结果表明,其大小与设计的引物间的序列大小基本一致;扩增产物经标记后只与犬腺病毒DNA发生杂交反应,表明其为犬腺病毒特异性核酸片段。     

汉坦病毒长春分离株YZG-Changchus S基因片段克隆和序列分析

肾综合征出血热（Hemorrhagic Fever with RenalSyndrome，HFRS）和汉坦病毒肺综合征（Hantavirus Pulmonary Syndrom．HPS）是由布尼亚病毒科汉坦病毒属中的病原体引起的一种病情重、病死率高的自然疫源性急性传染病。目前发现汉坦病毒有20多种血清型，在我国主要流行汉滩病毒（Hantaan virus，HT-NV）和汉城病毒（Seoul virus，SEOV）2种型别病毒。     

人尿激酶原乳腺定位转基因小鼠的建立

人尿激酶原乳腺定位转基因小鼠的建立我们从已构建的人尿激酶原（Ｐｒｏ－ＵＫ）乳腺定位表达载体ｐＳＶＬ－β－Ｐｒｏ－ＵＫ中用ＳａｃＩ＋ＸｈｏＩ回收２．５ｋｂ的大鼠β－乳酪蛋白的启动子及Ｐｒｏ－ＵＫ片段，从ｐＳＶＫ３质粒中用ＳａｃＩ＋ＢａｍＨＩ回收ＳＶ４０...     

狮致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

从长春市某动物园送检的病死幼狮病变器官中分离出1株大肠杆菌,经对细菌的形态学观察、生化试验、血清型鉴定、动物致病性试验,确定本分离株为血清型O78的致病性大肠杆菌。通过药敏试验,证明本分离株对氨苄青霉素、环丙沙星、青霉素、头孢拉定产生耐药性,但对庆大霉素、链霉素、阿奇霉素高度敏感,可作为临床用药的参考。     

一种新的圆环病毒病—貂圆环病毒性肠炎

2013年10月,我们针对辽宁省大连大部分貂场存在的青年貂因发生红白痢而死亡的问题,在部分貂场开展了流行病学研究。根据貂场饲养管理人员介绍,在每年的8—10月份,水貂发生一种以红白痢、部分貂死亡为特征的传染病。患病水貂临床上初期表现食欲不佳、厌食、精神状况不好、被毛粗乱,粪便呈白色,但大部分康复,其中,7％～8％的水貂后期粪便从白痢逐渐变为黄痢、红痢,脓样（胶胨样）,继而出现黑色血便,口鼻苍白,最终死亡。但是成年貂相对症状较轻或不发病。本病在不同年龄水貂相互之间传播,貂群70％～80％的年轻貂感染出现临床症状,潜伏期不超过10d。     

1株非洲猪瘟病毒自然变异毒株的鉴定

非洲猪瘟(ASF)于2018年传入我国后已流行了2年有余,我国非洲猪瘟病毒(ASFV)毒株未曾出现较大变异.最近,针对我国ASF疫情放缓以及感染猪出现的低死亡率现象,我们在ASFV生态学研究中,从主动监测的样品中分离到1株源自湖北某地的ASFV自然变异株.经基因组测序发现,其EP402R基因(CD2v)和上游相邻的EP...     

伪狂犬病病毒TK-/gI-株PK基因转移载体的构建及LacZ基因表达

伪狂犬病病毒TK-/gI-株基因组经AscⅠ酶切获得含PK基因的8.7 kb片段,将此片段克隆入pPolyⅡ载体的AscⅠ位点,获得中间载体P8-AA,将LacZ表达盒插入其SphⅠ/NdeⅠ位点,构建重组转移载体P8AA-lacZ,将其与伪狂犬病病毒TK-/gI-株基因组共转染PK-15细胞,细胞出现病变后通过覆盖含有X-gal的营养琼脂进行蓝白斑筛选,通过蚀斑克隆方法分离到重组体PRV(rPRV),且经过连续传代的rPRV仍能稳定的表达β-半乳糖苷酶活性.通过对重组病毒PRV-LacZ和亲本株TK-/gI-株TCID50的试验表明,PK基因的缺失对病毒增殖无影响.