微孢子虫感染三疣梭子蟹的肌组织病理及其免疫相关酶活性

梭子蟹肌孢虫（Ameson portunus）是感染三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）的常见病原之一,该研究以其SSU rRNA基因为靶标建立了SYBR Green I实时定量PCR检测方法。结果显示：该方法扩增效率为101.45%,检测灵敏度下限可达2.0×10¹ 拷贝·μL^-1,特异性、组内重复性和组间重复性均好。利用该荧光定量PCR方法对一批来自“牙膏病”流行区的养殖三疣梭子蟹样品进行检测,梭子蟹肌孢虫检出率为82.35%。检测结果显示,活蟹的每毫克肌肉平均带虫量大幅低于死蟹,表明该地区梭子蟹的死亡与肌孢虫的感染密切相关,而且,当梭子蟹肌孢虫载量达到1.0×10⁹ 拷贝·mg^-1时三疣梭子蟹存在暴发疾病甚至死亡的风险。另外,通过对比检测发现,梭子蟹肌孢虫套式PCR方法对这批样品的检出率为64.71%,表明该研究建立的荧光定量PCR方法具有更高的灵敏度。

     

养殖水体主要化学因子对蛭弧菌Bdh5221生长的影响

研究了养殖水体中NO-3N、NO-2-N、NH 4-N、PO-4-P和S2-等主要化学因子对蛭弧菌海水菌株Bdh5221生长的影响,为蛭弧菌在生物防治上的应用提供理论依据.试验结果发现,NO-3-N的浓度在O～10 mg/L之间、NH 4-N的浓度在0～5 mg/L之间,NO-3-N、NH 4-N的浓度越高越有利于蛭弧菌Bdh5221的生长;NO-2-N的浓度在0～0.5 mg/L之间,随着浓度的增高,对蛭弧菌Bdh5221的生长有一定的抑制作用;PO3-4-P的浓度在0～10 mg/L之间、S2-的浓度在0～5 mg/L之间,未见它们对蛭弧菌Bdh5221的生长有影响.     

高效液相色谱/串联质谱法研究溴氰菊酯在中华绒螯蟹体内的富集消除规律

本研究建立了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)体内溴氰菊酯残留的液相色谱/串联质谱检测方法,并选择溴氰菊酯对中华绒螯蟹的安全质量浓度0.66μg/L,在(20±1)℃下,对中华绒螯蟹进行浸浴,研究溴氰菊酯在中华绒螯蟹体内的富集消除规律。样品经乙腈提取,采用电喷雾正离子源(ESI~+)和多重反应监测(MRM)模式测定,基质匹配标准曲线定量。结果表明,溴氰菊酯标准曲线在0.1～50.0μg/L质量浓度线性关系良好,决定系数为0.999 8,检测限为0.035μg/L。0.10μg/kg(μg/L)、10.00μg/kg(μg/L)、20.00μg/kg(μg/L)和50.00μg/kg(μg/L)添加水平下,溴氰菊酯回收率为82.63%～101.00%。各组织对溴氰菊酯的富集能力不同,其中血淋巴和鳃富集能力较强。血淋巴、肝胰腺和鳃等组织中药物质量浓度同时达到峰值,达到峰值时间(T_(max))为0.5 h,峰值质量浓度或质量分数(C_(max))分别为2.780μg/L,0.567μg/kg和1.165μg/kg。为了最大限度地避免溴氰菊酯残留对人体造成的危害,除了选择中华绒螯蟹重要的可食组织肝胰腺作为检测对象外,还应选择血淋巴等组织进行进一步的药残检测。     

氨氮和亚硝基氮共同胁迫对凡纳滨对虾感染WSSV的影响

为了评价养殖水环境中氨氮和亚硝基氮对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的危害性,开展了氨氮和亚硝基氮共同胁迫对凡纳滨对虾感染WSSV后的死亡率、WSSV在患病对虾体内增殖速率和对虾主要免疫相关酶活性影响的研究。实验设置氨氮(NH+4)和亚硝基氮(NO-2)的共同胁迫浓度均为20 mg·L-1,分别注射10-4和10-5稀释度的WSSV提取液。结果显示,胁迫下感染10-4WSSV的凡纳滨对虾144 h死亡率达到100%,显著高于无胁迫组(76.67%),相同实验条件下高浓度病毒感染组死亡率高于低浓度组。对虾鳃组织WSSV荧光定量PCR检测结果显示,氨氮和亚硝基氮共同胁迫下凡纳滨对虾体内WSSV的增殖加快,感染48 h后胁迫组病毒量是无胁迫组的1.6倍,72 h时病毒量达到无胁迫组的2.0~3.7倍。此外,免疫相关酶活性结果显示,氨氮和亚硝基氮浓度突变会促使对虾血清中酚氧化酶(PO)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)活性先短暂升高然后降低。由此可见,氨氮和亚硝基氮共同胁迫会加快WSSV在患病凡纳滨对虾体内的增殖,导致更高死亡率,这可能是因为胁迫造成了对虾免疫相关酶活性的降低和抗病原感染能力下降所致。     

海水养殖动物源弧菌喹诺酮类药物耐药表型与基因型分析

采用琼脂稀释法测定121株海水养殖源弧菌对喹诺酮类药物(恩诺沙星、诺氟沙星和环丙沙星)的敏感性,利用PCR方法检测其质粒介导的喹诺酮类耐药基因(qnrVC、qnrS、qnrA和qnrB)、外排泵耐药基因(oqxA、oqxB、acrR、marR和soxR)和整合子(Int1、SXT和ISCR1),同时研究4种外排泵抑制剂(甲基吡咯烷酮,NMP;利血平,RSP;羰基氰氯苯腙,CCCP;苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺,PAβN)对弧菌恩诺沙星、诺氟沙星和环丙沙星最小抑菌浓度的影响。在121株弧菌中,恩诺沙星耐药菌株31株(25.6%),诺氟沙星耐药株21株(17.4%),环丙沙星耐药株22株(18.2%);4种质粒介导喹诺酮类耐药基因仅检测到qnrA(2株)和qnrVC(30株),5种喹诺酮类外排泵基因仅在溶藻弧菌352菌株中检测到oqxB;121株弧菌中检测到39株菌携带Int1、42株菌携带SXT、44株菌携带ISCR1;在NMP、RSP、CCCP和PAβN作用下,分别有22株、25株、31株和7株弧菌对恩诺沙星的敏感性下降,分别有6株、5株、9株和4株弧菌对诺氟沙星的敏感性下降,分别有17株、13株、5株和14株弧菌对环丙沙星的敏感性下降。研究结果表明,弧菌对喹诺酮类药物耐药表型与基因型存在较大的不一致性,外排泵抑制剂对弧菌喹诺酮类药物的耐药性具有显著影响,预示弧菌对喹诺酮类药物耐药存在着新的机制。     

盐碱地水产养殖技术100问(三)

28 如何改善底质? 改善虾池底质,首先在放苗前必须做好彻底清除池底淤泥.在养殖过程中,可以根据养殖需要适时投放光合细菌、硝化细菌等微生态制剂及沸石粉等改善底质.在淤泥较厚的池底,也可采用生石灰和铁矿(渣)进行改善.     

“脊尾白虾肌肉微孢子虫病”的病原和病理分析

江苏启东海水养殖脊尾白虾出现肌肉白化症状,虾腹部、头胸甲、步足、尾扇等部位病变明显,通过活体压片镜检发现肌肉中存在大量球形包囊,利用超显微技术对病原的形态和结构进行分析,确定其为微孢子虫,并对脊尾白虾的病变组织进行了病理分析。结果表明：该微孢子虫具包囊结构,包囊大小为（5.40±0.55） μm,一个包囊内含8个孢子,成熟孢子呈椭圆形,孢子长为（2.30±0.25） μm,孢子宽为（1.50±0.19） μm,孢内极丝一般环绕9~10圈。病理分析显示,脊尾白虾的鳃、胃、肠和肌肉内均发现微孢子虫寄生和不同程度的病变。其中,肌肉组织病变最严重：原肌纤维存在的空间被大量的球形包囊占据,肌纤维断裂,空泡数量增多,线粒体消失;鳃细胞膨大呈空泡状,鳃膜坏死,核质、细胞质和细胞器消失;胃细胞胞浆基质电子密度增大,孢子寄生在结缔组织中脂滴附近;肠外膜上皮细胞核质皱缩,部分肌层消失,孢子寄生在肠粘膜层和肌层之间。     

恩诺沙星在异育银鲫体内和体外肝微粒体中代谢产物分析

采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱法(UPLC/Q-TOF MS)对恩诺沙星在异育银鲫体内和体外肝微粒体中代谢产物进行定性分析。结果表明,异育银鲫血浆中除以恩诺沙星原形药物为主外,还可检测到少量N-去乙基代谢产物环丙沙星、葡萄糖醛酸结合物;而在肝微粒体体外孵育体系中除检测到原形药物外,只有少量N-去乙基代谢物环丙沙星。无论是体内还是体外,代谢产物生成量都很少。推测恩诺沙星在异育银鲫体内代谢反应主要是脱乙基反应和葡萄糖醛酸结合反应,而在体外肝微粒体恩诺沙星代谢反应主要是脱乙基反应。     

模拟生态系统中恩诺沙星在沉水植物体内蓄积、代谢和消除规律

为评价沉水植物对去除养殖尾水中残留抗菌药的作用,改进了QuEchERS前处理方法,建立了沉水植物中恩诺沙星和环丙沙星含量HPLC检测方法,采用模拟生态研究了恩诺沙星残留在沉水植物体内蓄积、代谢和消除规律。优化了不同提取液、萃取盐和提取时间对回收率的影响,考察了不同净化剂的净化效果。以外标法进行定量,沉水植物中恩诺沙星和环丙沙星回收率分别为79.60%～110.15%和57.26%～102.00%,检测限分别为0.003μg·g^-1和0.005μg·g^-1。在模拟生态系统中,以终浓度200μg·L^-1的恩诺沙星单次泼洒用药后,苦草(Vallisneria natans)、伊乐藻(Elodea nuttallii)和轮叶黑藻(Hydrilla verticillata)均在24 h吸收恩诺沙星至最大值,分别为0.82μg·g^-1、0.86μg·g^-1和2.34μg·g^-1;采用梯形法计算曲线下面积,分别为192.06(μg·g^-1)·h、...     

渔用阿维菌素水乳剂的安全性和药效评价

采用半静态法研究了渔用新制剂阿维菌素水乳剂(EW)对鲢(Hypophthalmichthys molitrix)、银鲫(Carassius auratus)和麦穗鱼(Peudorasbora parva)的急性毒性实验及其对患病草鱼(Ctenophayngodon idellas)、银鲫体表锚头鳋的药效实验,且二者均以相同阿维菌素含量的乳油(EC)为参照进行对比,旨在评价水产养殖用阿维菌素水乳剂对养殖鱼类的安全性及其驱虫效果.结果显示, 2%阿维菌素水乳剂对鲢、银鲫和麦穗鱼的96 h-LC50分别为2.15 mg/L、 1.15 mg/L和1.83 mg/L,安全浓度分别为0.22 mg/L、0.12 mg/L和0.18 mg/L;而对应乳油96 h-LC50为0.98 mg/L、0.57 mg/L和1.08 mg/L,安全浓度为0.09 mg/L、 0.06 mg/L和0.1 mg/L.对患锚头鳋的草鱼、银鲫施用0.05 mg/L 2%阿维菌素水乳剂后6 h的校正防效分别为96.27%、91.88%, 24 h即达到100%、96.15%;施用0.025 mg/L 2%阿维菌素水乳剂后6 h的校正防效分别为43.65%、68.58%, 24 h达到91.56%、90.80%;而施用0.05 mg/L 2%阿维菌素乳油对应的校正防效分别为47.31%、77.46%和95.69%、 91.62%,可见相同含量的水乳剂驱虫效果优于乳油.