斑节对虾鳃Na^＋／K^＋—ATPase的活性

研究了培养介质的Na^ 、K^ 和Mg^2 浓度、Na^ ：K^ 比、pH值，培养温度以及培养时间和底物ATP-Na2量对斑节对虾 锶Na^ /K^ -ATPase活性的影响，培养介质中Na^ 浓度为50-100mM、K^ 浓度为25-30mM、Mg^2 浓度为8-20mM、Na^ :K^ 比在10：1-2：1、pH7.0-7.5时，Na^ /K^ -ATPase活性较高，Na^ /K^ -ATPase活性随着培养温度升高而增大，Na^ /K^ -ATPase反应时释放出的无机磷（Pi)累积量与培养时间呈直线性增加，底物ATP-Na2浓度达到1.04mM时，Na^ /K^ -ATPase反应时释放出的无机磷（Pi)累积量与培养时间呈超级一性增加，底物ATP-Na2浓度达到1.04mM时，Na^ /K^ -ATPase活性达到最高，随着ATP-Na2量的增多，Na^ /K^ -ATPase活性并未增大。     

不同盐度对中国对虾血淋巴渗透浓度和离子浓度的影响

1、中国对虾生活在盐度为4．5—35．5‰海水(渗透浓度为114—1178mOsm／kg)中，其血淋巴渗透浓度变化范围为587—797mOsm／kg。当海水渗透浓度为602mOsm／kg时，其血淋巴与海水等渗；当海水渗透浓度低于602mOsm／kg时，中国对虾表现为强高渗调节，高于602mOsm／kg时为中等低渗调节。2、中国对虾血淋巴中Na^ 离子在低盐度时为高离子调节，高盐度时为低离子调节。在试验盐度范围内，K^ 和Ca^2 均为高离子调节，Mg^2 为低离子调节。3、中国对虾对盐度突变有较强的适应能力。从盐度15‰海水转移到盐度7‰和28‰海水中，转移后分别在6和24小时中国对虾血淋巴渗透浓度基本能达到稳定。     

异育银鲫肝微粒体体外恩诺沙星N-脱乙基酶酶促反应动力学初步研究

建立了异育银鲫肝微粒体体外孵育恩诺沙星(enrofloxacin,EF)的酶促反应体系,应用RP-HPLC法检测其主要代谢产物环丙沙星(ciprofloxacin,CF),以间接反映恩诺沙星N-脱乙基酶的活性。采用二氯甲烷提取、正已烷去脂提取有效成分,样品回收率均大于81.4%,含CF或EF的肝微粒体样品能在4℃下稳定至少72 h,日内变异系数不超过3.51%,日间变异系数不超过3.71%,EF和CF准确度分别小于8.1%、6.5%,检测限(信超比为3)分别为0.15μmol/L、0.3μmol/L。恩诺沙星在银鲫肝微粒体中代谢符合一级消除方程C=140e-0.072t,消除速率常数(K)为0.072/h,消除半衰期(T1/2)为9.627 h。用Origin Lab软件的Hyperbl模型进行拟和,以方程y=P1.x/(P2+x)表示米氏常数Vmax、Km两者的关系,求得Vmax为0.2602±0.0147nmol/mg.min,Km为53.8985±10.2257μmol/L,内在清除率(Clint)约为0.0048 mL/(min.mg)。恩诺沙星消除率和环丙沙星转化率的研究结果提示,恩诺沙星在银鲫肝微粒体中的代谢以N-脱乙基反应为主,提示可能还通过其它途径生成另外代谢产物。而酶动力学研究数据(Vmax,Clint值)表明,恩诺沙星N-脱乙基酶与底物结合力不强,酶促反应强度处于中等水平。据此,笔者推测恩诺沙星在银鲫肝微粒体中的代谢速度较为缓慢。     

环境因子和生物自身因子对中国明对虾渗透浓度和离子浓度的影响

本文检验了环境因子和生物自身因子对中国明对虾渗透浓度和离子浓度的影响。研究结果表明:①盐度变化对中国明对虾血淋巴渗透浓度有极显著影响;对血淋巴中钠、氯离子浓度有显著影响,而对钾离子浓度影响不显著。②在同一生长期,性别、体长、体重等自身因子对中国明对虾血淋巴渗透浓度和钠、钾、氯离子浓度均无显著影响。③水温对中国明对虾血淋巴离子调节能力有显著影响,但对血淋巴中钠、氯离子浓度的影响还受到盐度的制约。     

毒死蜱胁迫下WSSV对凡纳滨对虾的致病性

为了评价养殖水环境中毒死蜱对凡纳滨对虾生存的危害性,开展了毒死蜱胁迫下白斑综合征病毒(WSSV)对凡纳滨对虾致死实验,分析了毒死蜱胁迫下凡纳滨对虾鳃组织WSSV含量和肌肉组织乙酰胆碱酯酶活性变化。通过急性毒性实验测定了毒死蜱对凡纳滨对虾的半致死浓度(LC₅₀),随着暴露时间的延长,LC₅₀值显著下降,存在着浓度-反应的正向关系,96 h LC₅₀为0.758 μg/L(0.521～0.987 μg/L)。在此基础上,确定了毒死蜱胁迫实验浓度为0.2 μg/L,此浓度下药浴4 d后对凡纳滨对虾注射WSSV,结果显示:毒死蜱胁迫下注射WSSV组的对虾死亡率(83.33?Ee4.7%)极显著高于乙醇-WSSV组(40.00?Ee0.9%);对虾鳃组织WSSV荧光定量PCR检测结果显示:感染72 h后,毒死蜱-WSSV组WSSV含量约是乙醇-WSSV组的4倍;感染96 h后,毒死蜱-WSSV组WSSV含量显著增加,约是72 h毒死蜱-WSSV组的4.9倍,是96 h乙醇-WSSV组的5.9倍。毒死蜱胁迫下,对虾肌肉组织乙酰胆碱酯酶(AchE)活性低于对照组20%左右。由此可见,毒死蜱胁迫下,WSSV增殖速率加快,导致对虾死亡率升高。     

K^＋,SO^2—4和碳酸盐碱度对大银于仔鱼存活的影响

本试验观察了Ｋ＾＋,ＳＯ＾２－４和碳酸盐碱度对大银鱼仔鱼存活的影响。大银鱼仔鱼在Ｋ＾＋浓度１０－３０２．４ｍｇ／Ｌ中９６ｈ成活率为９５－１００％,在ＳＯ＾２－４３８４－１９２０ｍｇ／Ｌ中９６ｈ成活率为１００％〉资助它们能正常生长,碳酸盐碱度低于１４ｍｅ／Ｌ时９６ｈ成活率为１００％,当碱度升到２２ｍｅ／Ｌ时其成活率为８０％。     

黄芩等中药提取物对异育银鲫肝微粒体CYP1A和CYP3A的抑制作用

通过肝微粒体体外孵育实验,研究黄芩、柴胡、连翘、吴茱萸和野菊花5种中药提取物对异育银鲫肝微粒体CYP450的影响。体外给药测定IC₅₀以及相关酶动力学参数,并推测其可能的作用机制。结果显示, 5种中药对7乙氧基异吩唑酮-O-脱乙基酶(EROD) (CYP1A标志酶)的抑制程度为黄芩>连翘>野菊花>柴胡≈吴茱萸,半抑制浓度（₅₀）依次为0.27,2.88,7.62,16.20和16.42 mg/mL,酶促反应动力学常数V_max 和K_m为（83.33±11.32） pmol/(min·mg)和（3.05±0.89） μmol/L。据此计算黄芩、连翘、野菊花、柴胡和吴茱萸的抑制常数分别为0.16、0.39、0.61、0.40和0.59 mg/mL;黄芩、连翘和吴茱萸对红霉素N-脱甲基酶（ERND）（CYP3A标志酶）有很弱的抑制作用,IC₅₀分别为90.9,70.8和43.5 mg/mL。柴胡和野菊花未检测到对ERND有抑制作用。结果表明,这5种中药对CYP酶的影响因亚型不同而差别较大,对CYP1A的抑制均较显著,而对CYP3A的抑制则不明显。进一步研究它们对CYP1A的抑制机制,推测黄芩、柴胡和吴茱萸对EROD的抑制为竞争性抑制,野菊花和连翘则是反竞争性抑制。建议这5种中药与其他渔药合用时,要注意其引起其他渔药的药动学的变化,使疗效发生改变。     

蛭弧菌海水菌株Bdh5221裂解特性及生长影响因子研究

对利用双层琼脂平板法分离纯化获得的蛭弧菌海水菌株Bdh5221裂解特性及生长影响因子进行了初步研究,为其在生物防治上应用提供理论依据。研究结果表明,蛭弧菌海水菌株Bdh5221对嗜水气单胞菌、副溶血弧菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌、大肠杆菌、荧光假单胞菌、迟钝爱德华氏菌等革兰氏阴性菌有较好的裂解作用;对八叠球菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌等革兰氏阳性菌的裂解能力较弱;对木糖葡萄球菌和啤酒酵母菌不裂解;可在超声波破碎后的G+菌和酵母菌上生长。蛭弧菌Bdh5221在宿主菌浓度106~109cfu/ml下均可正常生长,高浓度宿主菌更有利于蛭弧菌生长;Bdh5221最适生长的pH在7.0~7.5之间,盐度为20~30左右;Bdh5221增殖速度与起始接种浓度影响不大,起始接种浓度101~103pfu/ml下经过5~7d生长可增殖104左右。     

金鱼温和气单胞菌的分离鉴定及药敏试验

2006年7月从上海奉贤某一养殖基地的发病金鱼中分离出一株细菌,对它的形态、生理生化特征及16S rRNA基因序列进行了研究.结果表明,该菌为革兰氏阴性杆菌,具极生单鞭毛,发酵葡萄糖产酸不产气,氧化酶、接触酶阳性,VP阳性,生长无需NaCl,在TCBS平板上生长缓慢,对O/129弧菌抑制剂不敏感.结合16S rRNA基因序列分析结果,该菌与温和气单胞菌的亲缘关系最近,因此将该菌鉴定为温和气单胞菌(Aeromonas sobria).同时,用20种药物对该菌进行了药物纸片扩散法抑菌试验,其中,庆大霉素、氟派酸、氯霉素、妥布霉素、卡拉霉素、壮观霉素、菌必治的抑菌效果最佳.     

蛭弧菌Bdh5221对银鲫肠道菌群和非特异性免疫指标的影响

将360尾体重为50 g左右的银鲫Carassius auratus gibelio随机分为3个组,每个组设立3个平行,每个平行40尾鱼.将蛭弧菌Bdh5221菌液以0、104 、107 CFU/g(饲料)的浓度喷洒于基础饲料上投喂银鲫,于第7、14、21、28天时检测银鲫肠道蛭弧菌Bdellovibrio sp.数量的变化.在两个试验组蛭弧菌数量基本达到稳定(即第28天)时,测定蛭弧菌Bdh5221对银鲫肠道菌群和血清中非特异性免疫指标的影响.结果表明:两个试验组的大肠杆菌、气单胞菌数量显著少于对照组(P<0.05),而乳酸杆菌数量极显著大于对照组(P<0.01),双歧杆菌数量有上升的趋势,拟杆菌变化不明显;溶菌酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、酚氧化酶及107CFU/g组的超氧化物歧化酶活性显著或极显著高于对照组(P<0.05或P<0.01).由此表明,在饲料中添加蛭弧菌具有改善银鲫肠道菌群和提高免疫相关酶活性的作用.