虾苗场3种重要病原同步定量PCR检测技术的建立

白斑综合征病毒(white spot syndrome virus, WSSV)、虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei, EHP)和虾虹彩病毒(decapod iridescent virus 1, DIV1)为近年来凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)育苗场内的主要生物性危害因素,其中2种或3种病原共感染的现象也较为常见,快速、准确地检测和鉴别这3种病原是大型苗场生物安保体系构建和无特定病原虾苗生产的迫切需求。基于SYBR Green I染料法,建立了同步扩增3种病原的定量PCR检测技术。结果显示,该同步方法对3种病原的标准曲线相关系数(R~2)均大于0.99,且检测限可低至10 copy·μL~(-1),尤其是WSSV,在低至1 copy·μL~(-1)时仍能保持较好的组内和组间重复性。熔解曲线分析显示,该同步定量PCR技术对对虾样品的扩增产物只在78.4℃、79.7℃、83.5℃处出现3个尖锐峰,分别与3种病原(DIV1、EHP和WSSV)扩增产物的T_m值相对应。以上结果表明,建立的同步定量PCR检测技术具有较高的检测灵敏度和良好的病原特异性,可以在50 min内同步完成对3种病原的快速鉴定和组织内病原含量的确定,既可用于对虾育苗场内对这3种病原的监测,也适用于对养殖对虾病原感染与病害发生的风险预测。     

锯缘青蟹血细胞的形态及分类

对锯缘青蟹（Scylla serrata）血细胞染色的抗凝剂、染色方法进行筛选。蟹样品体质量约250g。采用亚甲基蓝、瑞氏法染色后，在Olympus油镜下观察、记数、测量，再结合电镜超薄切片观察结果对锯缘青蟹血细胞进行分类。根据血细胞质中颗粒的有无、大小、折光性、染色特性及细胞的大小、核质比等，将锯缘青蟹血细胞分为4种：（1）无颗粒细胞，细胞质中无颗粒；（2）小颗粒细胞，细胞质中有深蓝色小颗粒；（3）中间型细胞，细胞质中既有深蓝色小颗粒，又有折光性红色大颗粒；（4）大颗粒细胞，细胞质中充满了具有折光性的红色大颗粒。4种血细胞的大小顺序从小到大依次为无颗粒细胞、小颗粒细胞、中间型颗粒细胞、大颗粒细胞；核质比则相反，分别为54．01％、37．13％、25．37％、17．49％；其数量百分比分别占20．92％、40．30％、19．39％、19．39％。根据伪足的多少。对4种血细胞在机体的免疫防御机制中所起的不同作用进行了简单探讨。     

渔用抗菌药临床使用效果的影响因素分析

正细菌性疾病是我国水产养殖的重要疾病之一,其危害种类多,鱼虾蟹贝等海淡水养殖动物都有发病;流行性广,不分季节、不分养殖模式,因此往往造成巨大的经济损失,长期威胁着水产动物养殖的健康发展。细菌性疾病的防控措施已成为水产养殖生产的重要环节。然而,在我国水产动物疫苗研究和产品应用远远滞后于产     

五种中药提取物对拟穴青蟹肝微粒体CYP1A的抑制作用

利用肝微粒体体外孵育体系,通过酶促反应动力学研究黄芩、柴胡、连翘、吴茱萸和野菊花5种中药提取物对拟穴青蟹(Scylla paramamosain)肝微粒体CYPIA的抑制作用.方法:5种中草药提取物分别与拟穴青蟹肝微粒体共同孵育,荧光分光光度法测定探针药物7-乙氧基异吩唑酮代谢产物试卤灵的生成量,来反映中药提取物对CY...     

新型安全、高效、广谱、环保水产专用杀虫剂的研制——阿维菌素水乳剂

随着水产养殖规模的不断扩大,高密度集约化养殖的应用推广,养殖池塘自身有机污染和环境污染的加剧,造成近年来我国水产养殖病害发生日趋严重,尤其是养殖鱼类的寄生虫病危害十分普遍。     

K↑（+）对中国明对虾幼虾生存及耗氧率、窒息点的影响

采用单因子静态急性毒性实验方法,研究盐度为6的海水中不同K 浓度对中国明对虾(Fenneropenaeue chinensis)幼虾存活率的影响,并测定中国明对虾幼虾在不同K 浓度水质中的耗氧率及窒息点。结果表明:(1)K 含量过低或过高,均会成为影响中国明对虾幼虾生存的限制因子,中国明对虾幼虾对K 的生存适宜范围为16.00-165.80 mg/L,K 质量浓度低于16 mg/L时,中国明对虾幼虾的存活率随K 浓度的增加而上升;而当K 质量浓度高于165.80 mg/L时,中国明对虾的存活率随K 浓度的增加而下降。(2)水中不同K 浓度会对中国明对虾幼虾的耗氧率产生影响,在K 质量浓度分别为20 mg/L6、0 mg/L和120 mg/L,水温为(18.5±0.5)℃条件下,中国明对虾幼虾5 h平均耗氧率分别为(0.801±0.059)mg/g.h、(0.719±0.057)mg/g.h、(0.828±0.047)mg/g.h。(3)不论是低K 浓度组还是高K 浓度组,中国明对虾幼虾窒息点均明显高于正常海水K 浓度组,当水温为(19.4±0.1)℃,中国明对虾幼虾在K 质量浓度为20 mg/L、60 mg/L和120 mg/L时的窒息点分别为(1.469±0.006)mg(O2)/g、(1.350±0.005)mg(O2)/g、(1.496±0.006)mg(O2)/g。     

碳酸盐碱、pH对中国对虾幼虾的致毒效应

实验结果表明,ｐＨ为８．６、９．０、９．３和９．５时,中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）幼虾２４ｈ半致死碱度（ＬＣ５０）分别为２２．００、１１．６６、６．５７和３．２８ｍｍｏｌ／Ｌ;随着碱度、ｐＨ的升高,中国对虾幼虾的存活率下降。碱度和ｐＨ对幼虾的致毒效应应具综合作用,ｐＨ８。６～９．０时,ＨＣＯ３＾－、ＣＯ３＾２－共同影响幼虾的存活率;ｐＨ９．０～９．５时,ＯＨ＾－协同ＣＯ３＾２－影     

凡纳滨对虾乙酰胆碱酯酶组织分布及对有机磷农药敏感性分析

采用改进的ELLMAN法测定凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）脑神经节乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AChE）活性,确定其适宜测定条件,并在此基础上测定对虾不同组织AChE活性,比较毒死蜱、敌敌畏、辛硫磷和乙酰甲胺磷4种有机磷农药对凡纳滨对虾脑神经节AChE活性的影响。结果表明,温度35 ℃,磷酸缓冲液pH 7.5时,凡纳滨对虾的AChE活性最高,保温时间对酶活性影响很小;对虾AChE活性存在着明显的组织分布差异性,脑神经节AChE活性最高,为（49.73±8.42） nmol/(min·mg),分别是鳃、肌肉和肝胰腺的3倍、15倍和19倍;对虾AChE 对敌敌畏最为敏感,IC₅₀为0.19 μg/mL,对毒死蜱和辛硫磷敏感性较强,IC₅₀ 分别为7.20 μg/mL和9.39 μg/mL, AChE对乙酰甲胺磷敏感性最弱,IC₅₀ 为136.77 μg/mL。由此可见,对虾养殖中应注意防范敌敌畏、毒死蜱和辛硫磷等有机磷农药的毒性危害。     

斑节对虾鳃Na~ /K~ -ATPase的活性

研究了培养介质的Na 、K 和Mg2 浓度、Na ∶K 比、pH值、培养温度以及培养时间和底物ATP -Na2量对斑节对虾鳃Na /K ATPase活性的影响。培养介质中Na 浓度为 5 0～ 10 0mM、K 浓度为 2 5～ 30mM、Mg2 浓度为 8～ 2 0mM、Na ∶K 比在 10∶1～ 2∶1、pH 7.0～ 7.5时 ,Na /K ATPase活性较高 ,Na /K ATPase活性随着培养温度升高而增大。Na /K ATPase反应时释放出的无机磷 (Pi)累积量与培养时间呈直线性增加。底物ATP Na2 浓度达到 1.0 4mM时 ,Na /K ATPase活性达到最高 ,随着ATP Na2 量的增多 ,Na /K ATPase活性并未增大     

高效液相色谱技术在食品检测中的应用

概述了高效液相色谱技术在食品检测,如在食品添加剂、营养成分和食品污染物中的应用情况。