大麦黄矮病毒缺失复制酶基因植物表达载体的构建及转基因小麦的获得

以大麦黄矮病毒GPV株系的RNA为模板,采用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法,扩增出1134bp的缺失复制酶基因。将扩增的片段克隆到pUC19的SmaI位点上并进行了序列测定,获得正向插入的重组质粒pUC19D。以KpnI和XbaI从pUC19D上切下此基因并插入质粒pEmu-mcs-N得到植物表达载体pPPI8。应用花粉管通道法转化普通小麦品种陇鉴127、陕160和晋麦47,通过卡那霉素抗性筛选、PCR和PCR-Southern检测,3个品种均获得了转基因小麦植株。     

杏和李树啤酒花矮化类病毒的检测与序列分析

 从无明显症状表现的24个杏样品, 37个李样品的1年生枝条表皮中抽提低分子RNA进行DIG-cDNA斑点杂交、RT-PCR、正反向聚丙烯酰胺凝胶电泳(Return-PAGE) 和生物学检测。结果表明: 杏有3个样品, 李有6个样品带有啤酒花矮化类病毒(Hop stunt viroid, HSVd) 。从这9个样品中选a5、a17、p6、p16 进行克隆和测序分析。所得序列与GenBank中已报道的HSVd序列同源性达99.0% ～99.7% , 且序列变异与地域、寄主等无明显相关性, 说明HSVd的序列是比较保守的。     

利用内标为基础的多重RT-PCR技术检测草莓斑驳病毒和草莓轻型黄边病毒

草莓斑驳病毒(SMoV)和草莓轻型黄边病毒(SMYEV)分布较广,危害较重。应用CTAB法提取草莓总RNA,以优质的草莓总RNA为模板,结合扩增内标的检测体系,建立了SMoV和SMYEV的多重RT-PCR检测体系,可以对草莓田间植株和试管苗进行快速稳定的病毒检测。     

应用#+(32)P同位素标记的PGP178质粒DNA分子探针检测携带大麦黄矮病毒（BYDV）的单头蚜虫

快速测定单头蚜虫带毒率是小麦黄矮病综合防治中起关键作用的—个难题,长期以来得不到解决, 直接影响到病害流行的预测预报准确性。 病毒的互补DNA(cDNA)分子探针检测技术是一种灵敏度较高,专—性较强的分子生物学方法。我们以大麦黄矮病毒核酸为模板,以小牛胸腺DNA为引物,在反转录酶和dNTP存在下,成功地合成了cDNA的第一条链,再用缺口翻译法合成第二条链,然后采用加装BamH1人工接头的方法将双链cDNA插入到质粒戴体pUC8中,重组质粒于大肠杆菌JM-83中进     

转猪轮状病毒VP6基因烟草植物的获得

根据GenBank中轮状病毒VP6序列设计1对引物，从pGEM—T—VP6质粒中扩增VP6PCR产物。将VP6克隆到PBI121质粒中，转化根癌农杆菌LBA4404，挑取阳性菌落的质粒进行酶切鉴定。用叶盘法转化烟草，获得再生苗，用RT—PCR、PCR和PCR—southern杂交方法进行鉴定，结果表明，VP6基因已成功地转入烟草中。     

苹果锈果类病毒的几种提取方法及RT-PCR检测灵敏度的比较

以感染苹果锈果类病毒的苹果枝条为材料,利用不同的方法抽提,进行RT-PCR检测。比较了6种RNA的提取方法,结果发现:LiCl法、RNeasy plant mini kit和NA-PEX法检测效果较佳。RNeasy plant mini kit可检测到10-2,NA-PEX可检测到10-1;RNeasy plant mini kit检测效果好于NA-PEX,但价格比较贵,需要研磨;NA-PEX法组织无需液氮研磨,试剂便宜,耗时短,适合检测大批量的样品。     

NPTⅡ基因和GUS基因在小麦遗传转化中的应用

对小麦遗传转化上常用的选择标记基因NPTⅡ的选择剂及GUS基因在幼胚愈伤组织中的转移进行了研究。结果表明用G418作为选择剂,浓度为20-30mg／L较为合适。幼胚愈伤组织与农杆菌共培养3d后,即可检测到GUS基因的瞬时表达。农杆菌LBA4404由500 mg／L羧卞青霉素抑制;EHA105、AGLI由500 mg／L头孢霉素抑制。而不能用卡那霉素。     

影响小麦RAPD稳定性的试验技术研究

随着PCR和PAPD技术在生物学业领域的广泛应用，人们在实验中遇到的问题也越来越多，其中PAPD的可重复性差是最主要的一个问题，也是该技术最难克服的特点。作者在利用RAPD技术标记进行小麦的抗病毒基因研究中，对影响扩增结果的模板、底物、引物和扩增程序等进行了实验探索，结果表明：模板的浓度、dNRP浓度、引物浓度及反应程序均对RAPD扩增结果有明显影响。     

应用农杆菌介导法获得转大麦黄矮病毒GPV株系复制酶基因ORF2小麦植株

以生产用5种基因型小麦为材料,利用农杆菌介导法将大麦黄矮病毒GPV株系复制酶基因ORF2转化愈龄40d的幼胚愈伤组织,经过G418筛选后,共再生出9株抗性植株,拓宽了小麦农杆菌转化的受体基因型。PCR及Southern杂交分析证实大麦黄矮病毒复制酶基因ORF2已经整合到小麦基因组中。初步抗病性检测结果显示转基因植株对GPV株系具有抗性。研究结果还表明,受体基因型、外植体的生理状态对农杆菌侵染起着至关重要的作用。     

小麦黄叶病研究初报

 小麦黄叶病是我国北方麦区新发现的一种病毒病。1980年以来山西、陕西、甘肃、河北和北京等地均有发生。