AsiaⅠ型口蹄疫病毒江苏分离株VP1基因的克隆与高效表达

【目的】实现牛口蹄疫病毒AsiaⅠ型江苏分离株VP1基因在大肠杆菌中的表达,为VP1蛋白的深入研究奠定基础。【方法】根据GenBank公布的AsiaⅠ型口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)核苷酸序列(登录号:AF030244),设计并合成1对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增出牛AsiaⅠ型FMDV江苏分离株VP1基因,将其连接入pMD18-T载体,测序后克隆入原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达载体pET-VP1。阳性重组质粒转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,收集表达产物并进行SDS-PAGE电泳,利用West-ern-blot分析表达蛋白的抗原性。【结果】牛AisaⅠ型FMDVVP1基因在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物的相对分子质量约为43 ku,并能被牛AsiaⅠ型FMDV阳性血清识别,有一定的生物学活性,表达量约占菌体蛋白总量的37.7%。【结论】牛AsiaⅠ型FMDVVP1基因表达成功,且表达产物具有一定的生物学活性。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)免疫效果及安全性试验

<正>高致病性猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株引起的。目前主要采取以疫苗免疫为主的综合性防控措施,对猪实施强制免疫。为了解高致病性PRRS活疫苗(JXA1-R株)在临床应用中的免疫效果与安全性,我们开展了该活疫苗的有关试验,为在全省推广使用提供基础数据。1材料与方法 1.1试验用疫苗高致病性PRRS活疫苗(JXA1-R株),生产批号为20120207,规格为10头份/瓶,由武汉中博生物股份有限公司提供。     

鸡痘弱毒苗几种免疫途径的安全性及免疫效果

取鸡痘弱毒苗分别以饮水、滴鼻、点眼、肌肉注射、刺翼等5种途径各免疫7日龄非免疫鸡10只，剂量为10羽份／只，免疫后观察14d，检查不同免疫方式对鸡只的安全性；同时，用1个羽份的鸡痘弱毒苗采用上述5种途径各免疫32日龄非免疫鸡20只，接种后28天，连同对照鸡只，用鸡痘强毒攻击，观察21d，比较不同免疫途径鸡痘弱毒苗对鸡只的保护效果。试验结果表明，5种途径免疫的鸡只均安全；饮水、滴鼻、点眼、肌肉注射、刺等5种途径对强毒的攻击保护率分别为60％，60％，50％，60％和100％。     

血清3型鸭甲型肝炎病毒TaqMan RT-qPCR检测方法的建立及初步应用

根据GenBank中已发布的血清3型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-3)基因序列,针对VP1基因序列的保守区域设计一对引物及一条特异性TaqMan探针建立了DHAV-3的TaqMan荧光定量检测方法(TaqManRT-qPCR)。通过对反应条件和反应体系的优化,建立的TaqManRT-qPCR方法在6.39×10^8~6.39×10^0拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,R2值为0.999。该方法能特异地检测出DHAV-3,与血清1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-1)及其他常见鸭病病原无交叉反应,且组内和组间重复性试验变异系数均小于1%。用普通RT-PCR方法和建立的TaqManRT-qPCR方法,对63份临床疑似鸭肝炎的肝组织样品进行检测,结果RT-PCR方法检出DHAV-3的阳性率是34.92%(22/63),TaqManRT-qPCR方法检出的阳性率是41.27%(26/63);对49份DHAV-3感染康复鸭的肛拭子样品进行检测,RT-PCR和TaqManRT-qPCR方法检出阳性率分别为22.45%(11/49)和85.71%(42/49);用TaqManRT-qPCR方法和鸡胚半数致死量法(ELD50)对DHAV-3(SD70株)鸡胚病毒含量进行检测比较,两种方法检测结果呈正相关。结果表明所建立的TaqManRT-qPCR检测方法特异性好,灵敏度高,为DHA-3快速诊断和流行病学调查提供技术手段。     

应用免疫胶体金试验对鸽禽Ⅰ型副黏病毒病的快速鉴别诊断

应用免疫胶体金试验，采取病死鸽棉拭子样品30分钟内即完成对一发病鸽群的快速鉴别诊断，排除禽流感病原，通过进一步病原分离与鉴定，结果该鸽群患的是禽Ⅰ型副黏病毒病。现将该病例诊断过程报告如下：     

鸡传染性法氏囊病抗体检测三种方法的比较

本文对传染性法氏囊病(IBD)抗体检测的三种方法——微量中和试验(TCVN)、间接ELISA、琼脂扩散(AGP)试验的敏感性、特异性和重复性及其临床效果进行比较。