猪细胞巨化病毒四川株MCP基因克隆及其编码蛋白的生物信息学分析

参照GenBank公布的仅有的日本株猪细胞巨化病毒较大衣壳蛋白（MCP）基因序列（登录号：AB051069）设计2对引物,采用分步克隆的方法,将PCMVMCP全序列克隆入pMD19-T载体进行测序,成功获得了pMD-MCP重组质粒,将所得序列录入到GenBank中（登录号：HQ025802）。测序结果表明,该MCP基因全长4017bp,共编码1338个氨基酸;与NCBI上公布的仅有的日本毒株MCP基因的核苷酸同源性为96．8％,氨基酸同源性为94．1％;进化分析显示：PCMVMCP基因与人疱疹病毒6型或7型的MCP基因亲缘关系较近;利用生物信息学软件对蛋白质结构特征进行分析,发现该蛋白含有59个潜在的磷酸化位点,潜在功能强大;亚细胞定位预测结果表明该蛋白主要存在于线粒体中和细胞质中并各占39．1％和26．1％,内质网占17．4％,高尔基体占8．7％,空泡和细胞核均占4．3％,表明PCMVMCP蛋白属于胞质蛋白,抗原区位集中于胞膜,有向胞质移动的趋势;另该成熟蛋白存在18个主要的抗原位点,将肽链经亲水性与抗原表位的共同分析,发现其肽链的c端极有可能分布有抗原决定簇。     

含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒的构建

将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因产物插入转移载体质粒pPI-2．EGFP中，构建了含PPV VP2基因及其EGFP报告基因的PRV基因缺失表达载体质粒pPI-2．EGFP．VP2。采用磷酸钙转染系统，将pPI-2．EGFP．VP2 DNA和PRV DNA共转染Vero细胞后通过直接荧光观察、Dot-blot核酸杂交筛选得到几株重组病毒，将其中一株（命名为SA215-B）DNA用BamHI酶切和Southern转印杂交进一步验证重组病毒构建成功，并通过SDS-PAGE电泳和Western免疫印迹检测表明PPV VP2基因在重组病毒内获得表达，产生大小约93ku的融合蛋白，同时融合蛋白中的PPV VP2结构蛋白仍然保持了原有的反应原性，表明成功构建了含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒。     

猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒在伪狂犬病病毒表达系统中的表达

利用PCR技术从猪细小病毒（PPV）SC1株基因组中扩增VP2全基因,并将其插入真核表达载体pPI-2.EG-FP中,构建转移载体pPI-2.EGFP.VP2。采用脂质体介导法将猪伪狂犬病病毒（PRV）SA215株DNA与pPI-2.EGFP.VP2DNA共转染Vero细胞,待出现细胞病变后收集病毒液。经空斑纯化,并同时采用检测PPV VP2基因的PCR方法筛选获得重组病毒PRV SA215/VP2株。以兔抗VP2的多克隆抗体建立的免疫荧光技术可检测到Vero细胞发出的特异性荧光,表明PPV VP2成功插入到PRV SA215基因组中,并获得表达。进一步电镜观察表明,感染PRV SA215/VP2的Vero细胞中可同时观察到PRV与PPV 2种类病毒样颗粒。结果表明,成功实现了利用PRV载体表达PPV VP2蛋白病毒样颗粒,为进一步研制PPV病毒样颗粒疫苗奠定了基础。     

裸根阔叶树大苗的移植

移植大苗绿化已经成为提高城市绿化效益的主要途径。在传统的大树移植中 ,多采用带土球移植 ,但许多地方由于土壤条件和交通条件的影响 ,带土球移植难度较大 ,只能采用裸根移植方式。1　裸根大苗移植方式裸根大苗移植是指胸径在 6ｃｍ以上的大树裸根移栽。通常采用去掉树冠 ,保     

猪肠道杯状病毒研究进展

猪的腹泻病一直困扰着养猪业.特别是病毒性腹泻危害最为严重,它可以引起仔猪的死亡,成猪的掉膘,降低饲料报酬率等。在我国,对于诺如病毒和札幌病毒研究还处于起步阶段,对该病毒的进一步研究有利于疾病的治疗和疫苗的开发研究。文章旨在简述其对流行病学、致病机理、诊断方法等总结。     

椰子织蛾转录组分析

为获取入侵性检疫害虫椰子织蛾的基因信息,利用高通量测序技术对该害虫进行了转录组测序。结果表明：经拼接共获得了37 416条unigenes,平均长度为803 bp,N50为1 415 bp;通过BlastX比对,有19 154条unigenes(51.19%)成功在Nr中被注释。在Nr中成功注释的unigene,与黑脉金斑蝶同源性最高,达到68.45%;在GO注释中,共有14 131(37.76%)条unigenes被成功注释到细胞组分、分子功能和生物过程3大类的54个分支;在COG数据库中,成功注释的8 606条unigenes被注释到26个分类;在KEGG中,共有6 171条(16.49%)unigenes被注释到5大类通路的260条途径上。基于构建的转录组数据库,鉴定得到3 248个微卫星。     

一例猪蓝耳病的实验室诊断及NSP2、ORF5基因序列分析

为诊断四川眉山某猪场暴发的疑似猪蓝耳病。利用RT-PCR方法对其进行分子诊断,在确认为阳性结果的基础上针对PRRSV的ORF5和Nsp2基因分别设计特异性引物,扩增基因片段进行测序然后对其进行遗传进化分析。结果表明,该疫情由PRRSV引起,遗传进化分析表明该PPRSV毒株的ORF5和Nsp2无明显变异,现有防控措施有效。     

猪圆环病毒2型CaP蛋白的表达及在ELISA中的初步应用

本研究旨在建立以PCV2 Cap蛋白为包被抗原的间接ELISA检测方法,构建猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因原核表达质粒pET32a-ORF2并转化至Rosetta菌,在1.0 mmol·L-1 IPTG和37℃条件下诱导下,Cap蛋白获得高效表达,Western blot检测证实其具有免疫反应活性,以纯化的蛋白为抗原建立了检测猪圆环病毒2型抗体的间接ELISA方法.结果表明抗原最适包被浓度为2.16μg·mL-1;血清最佳稀释度为1:40;抗原最佳包被条件为4℃过夜;最佳封闭条件为1%BSA 37℃1 h;血清反应时间为37℃30 min;酶标二抗最适作用时间为37℃45 min;底物最佳反应条件为37℃显色15 min.用该方法对四川省184份猪血清样品进行检测,总阳性率为80.98%(149/184),与商品化的PCV2 ELISA试剂盒得到的结果基本一致.本试验成功建立了PCv2血清抗体间接ELISA方法,具有较高的敏感性和特异性,可用于大规模的血清学检测.     

“5+5”工作法助力星级供电所建设

正为进一步加强乡镇供电所基层、基础、基本功工作,不断提高供电服务质量和管理水平,青阳县供电公司按照深化专业延伸、加强综合管理、促进业务融合的工作思路,立足自身工作特色,结合供电所发展实际,通过5+5工作法增压力、强动力、激活力、聚合力,促进星级乡镇供电所建设,2016年度公司丁桥供电所被国家电网公司命名为首批百家五星级乡镇供电所,陵阳供电所被国网安徽省电力有限公司命名为四星级乡镇供电所。     

新型城镇化进程中政府的“为与不为”——基于农业人口转移相关涉农政策弹性视角

政府作为新型城镇化政策的制定者和执行者,其功能越位或缺位都会对涉及其中的农业转移人口产生深远影响。在应对人口转移相关的系列涉农问题时,政府应该选择性地有所为有所不为：在面对种地主体缺失问题时不宜直接扶持外来规模经营主体,而要立足本地中农群体的培育;在面对小农生产方式落后问题时,不能简单消灭,而应壮大农业现代服务业对其改造升级;在面对农村家庭破碎化问题时不能将“以人为本”留驻口头,而应结合人口转移路径,做好保障政策供给;在面对村庄空心化问题时,不能只注重政策制定,而要从土地流转制度细化、公共精神塑造等多方面强化落实。