猪圆环病毒II 型 rep蛋白的亚细胞定位生物信息学析

从GenBank 发表的PCV-2全基因组序列,随机选择其中的32 个全基因序列,做序列比对和同源性比较,绘制系统进化树,在注释中找到ORF1编码的rep蛋白氨基酸序列, 用在线生物信息学工具对其进行亚细胞定位分析.结果基本符合"来自同一地区的基因序列同源性较高"的规律,表明了PCV的高度保守性, 亚细胞定位分析发现其rep蛋白定位于核区的指数为0.76,这与病毒在宿主细胞核内复制分不开.结果同时表明其定位于过氧化物酶体的指数显著不同于其他(过氧化物酶体平均0.36,可变,溶酶体、线粒体均为0.1不变)这可能与pcv的组织嗜性以及复制靶细胞(多为单核/巨噬细胞)的原因相关.     

H3N2亚型猪流感病毒NS1基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的建立

采用RT-PCR方法成功扩增了H3N2亚型猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)四川分离株(A/Swine/Sichuan/01/2006)的NS1基因,将其克隆于原核表达载体pET-32a(+)中,构建了重组质粒pET32-NS1.将该质粒转化进大肠杆菌RosettaTM,经终浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE电泳表明融合的NS1蛋白得到了大量的表达,该融合蛋白的相对分子质量约为43 500.Western-blotting结果显示该蛋白能与阳性血清发生特异性反应具有很好的免疫反应原性.结果表明,所建立的ELISA方法与几种常见猪群传染病病原无交叉反应,具有较好的特异性、敏感性和重复性,可进一步优化应用于临床SIV的检测.     

猪高致病性蓝耳病毒与猪圆环病毒混合感染的诊治

2016年6月四川九寨沟某藏香猪养殖基地母猪出现体温升高到41℃、食欲不振、泌乳量降低、返情率升高、个别食欲废绝,仔猪出现高稽留热、精神萎靡、消瘦、眼睑水肿、呼吸困难(呈腹式呼吸)、腹泻等临床症状。剖解发现全身淋巴结肿大,肺呈弥漫性间质性肺炎,表面凹凸不平,部分坏死。遂采集患病猪病料,以四川农业大学动物生物技术中心建立的病原RT-PCR和PCR方法进行检测,初步诊断为猪高致病性蓝耳病毒和猪圆环病毒混合感染。结合临床实际采取一定措施治疗后,病情得到有效控制。     

PRRSV感染致断奶仔猪肺脏和外周免疫器官的病理损伤

用PRRSV ATCC VR-2332株感染8头28日龄仔猪,同时设立2头健康对照猪.PRRSV单独感染猪分别于感染后7,17,25 d各剖杀2,3,3头,对照组于17,25 d各剖杀1头.剖杀后采集脾脏、肺脏和全身主要淋巴结(颌下淋巴结、肺门淋巴结、腹股沟淋巴结和肠系膜淋巴结)等免疫器官,用甲醛溶液固定,组织石蜡切片以观察显微病理变化.试验组猪的抗体和抗原检测结果均表明,感染后7 d血清PRRSV抗体和免疫器官组织PRRSV抗原部分呈阳性;剖检和石蜡切片结果均显示,试验猪于攻毒后,随着病程的发展,发生了不同程度的间质性肺炎及相应的显微病变,PRRSV单独感染能引起免疫器官以淋巴细胞及巨噬细胞变性坏死为特征的急性炎症变化,造成免疫损伤,进而引起免疫抑制.     

猪伪狂犬病基因缺失活疫苗(SA215)免疫母猪后仔猪母源抗体消长规律及首免日龄

在研究猪伪狂犬病基因缺失活疫苗 (SA 2 15 )免疫接种母猪所产仔猪母源抗体消长规律 ,并绘制其消长曲线的基础上 ,确定了仔猪首免日龄。对免疫母猪所产仔猪于不同日龄进行抗体检测结果表明 ,全部仔猪均获得了高水平母源抗体 ,7日龄高达 2 8.56 ,6 0日龄降至 2 2 .56 ;随着日龄增长 ,抗体水平呈逐渐降低趋势 ,2次大幅下降出现在 14～ 2 1日龄、30～ 6 0日龄。对免疫母猪所产仔猪分别于不同日龄免疫接种 1头份剂量疫苗 (SA2 15 ) ,7d后采血进行抗体检测 ,结果表明 ,7日龄、14日龄、2 1日龄免疫接种仔猪均未引起明显抗体水平升高 ,反而较同期仔猪略有降低 ,30日龄和 6 0日龄免疫接种仔猪则出现了抗体水平的升高 ,其中以 6 0日龄仔猪升高幅度为大。结合母源抗体消长规律 ,确定猪伪狂犬病基因缺失活疫苗 (SA2 15 )免疫母猪所产仔猪的首免日龄为 30日龄     

草地贪夜蛾的捕食性天敌昆虫研究进展

草地贪夜蛾是一种杂食性农业害虫,具有适应性强、繁殖力迅猛、危害严重等特点.自2019年1月侵入我国云南以来,快速在云南省、贵州省等省(区、市)传播,对我国农业生产和粮食安全构成严重威胁.汇总了草地贪夜蛾的捕食性天敌昆虫,涉及蝽、瓢虫、草蛉、蠼螋等5目12科58种,而不同目的捕食天敌对草地贪夜蛾的捕食行为存在一定差异.归...     

猪呼肠孤病毒SC-A株的分离鉴定及σ2基因的克隆与序列分析

通过在病毒培养液中添加胰酶的方法,从仔猪腹泻粪样中分离并鉴定了1株能在Vero细胞上稳定产生CPE,并以细胞颗粒增多、肿胀、漂落为特征的猪呼肠孤病毒SC-A株。在感染细胞中,病毒胞浆包涵体及特征性微管样结构明显,病毒粒子多呈典型的晶格状排列,大小约70 nm。S2基因的克隆测序结果表明,SC-A S2全基因(DQ396805)大小为1 331 bp,其开放阅读框编码一个由418个氨基酸组成,相对分子量约为47 140的σ2蛋白;与标准株T1L、T2J、T3D的核苷酸序列和推导氨基酸序列的同源性分别为86.9%、76.7%、85.4%及94.6%、93.3%、98.3%。以σ2氨基酸序列构建的进化树分析显示,标准株及野外分离株可被划分为A(T3)、B(T2)、C(T1)3个群;除T3C31外,其余3型野外分离株及SC-A株和所有血清1型均位于C群中。     

PRRSV SC-1株在人工感染仔猪体内的分布

为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在感染猪体内各器官组织的分布,用PRRSV SC-1株人工感染健康断奶仔猪,接毒后23 d,无菌采集试验猪器官组织,用RT-PCR检测其中病毒核酸分布情况。结果显示,心脏、脾脏、肺脏、肾脏、支气管淋巴结、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结、髂内淋巴结内有病毒核酸,在所有试验猪的肺脏、腹股沟淋巴结都检测到了病毒核酸。本研究结果为PRRS诊断及病毒分离鉴定提供了一定参考依据。     

猪环曲病毒套式RT-PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank中猪环曲病毒N基因设计合成2对特异性扩增引物,成功建立了猪环曲病毒的套式RT-PCR快速检测方法。为验证本方法的特异性,以猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、A群猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪嵴病毒、沙门菌及大肠杆菌作为阴性对照,结果显示只有在猪环曲病毒的核酸作为模板时才能扩增出预期的258bp和198bp 2条片段。敏感性试验显示,该方法能检测到的最低核酸含量为1pg。结果表明,建立的RT-PCR方法特异性强、灵敏度高,可用于猪环曲病毒的临床检测和流行病学调查。利用本方法对采集自四川省部分地区的50份临床样品进行检测,猪环曲病毒阳性率为30%。     

γ-聚谷氨酸增效尿素的淋溶特性及肥效研究

[目的]研究γ-聚谷氨酸增效尿素的淋溶特性及肥料效果。[方法]以制备的γ-聚谷氨酸增效尿素和常规尿素为氮肥,通过淋溶试验和盆栽试验,测定其对氮素淋失和小白菜生长的影响。[结果]淋溶试验表明,γ-聚谷氨酸增效尿素能使氮素缓慢释放,减缓氮的流失。盆栽试验显示,γ-聚谷氨酸增效尿素能显著提高小白菜的单株鲜重、单株干重和根长,分别提高了33.6%、48.4%和23.1%;能提高小白菜对氮、磷、钾营养元素的累积,小白菜的氮、磷、钾含量分别提高了16.7%、12.0%和9.9%;能提高土壤的有机质、碱解氮、有效磷、速效钾含量。[结论]γ-聚谷氨酸增效尿素的保肥效果和在小白菜上的应用效果显著,值得在小白菜种植中推广应用。