软枣猕猴桃"寒玉1号"组培技术研究

[目的]探索软枣猕猴桃"寒玉1号"适宜组培方法。[方法]以新生腋芽为外植体,筛选最佳消毒方法,并对影响其生长的NAA、6-BA等生长调节物质的浓度进行筛选。[结果]以5%NaClO 8 min+0.1%HgCl_26 min或9 min,5%NaClO 10 min+0.1%HgCl_26 min为适宜消毒方法,污染率和褐化率均较低;腋芽在WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L培养基中增殖效果最佳,增殖系数可达5.6,株高3.9 cm;丛生芽在WPM+NAA 0.3 mg/L培养基中诱导生根效果最佳,生根率可达100%,平均根条数为4.4条,平均根长为5.2 cm。[结论]软枣猕猴桃"寒玉1号"可采用组织培养的方法进行快速繁殖。     

基于宏基因组学的鸭源样本中坦布苏病毒检测方法的建立

利用二代高通量测序技术建立检测鸭源样品中坦布苏病毒的方法。首先将样品过滤和经核酸酶处理,再利用等温链位移扩增(SPIA)技术快速制备样品总cDNA,最后经磁珠纯化和文库构建后,通过Ion Torrent进行高通量测序获得基因组信息。结果显示,通过SPIA扩增和核酸文库制备的优化,可从微量病原样本中获得327pmol/μL的核酸文库样本。Ion Torrent测序共获得1 725 436条reads,约6.2M数据,平均109bp。数据拼接并Blast发现,病原样品的核酸序列可注释鸭坦布苏病毒全部基因组数据,与首次发生在我国的鸭坦布苏病毒BYD-1株参考序列的同源性为100%。将所测病毒序列与其他5种黄病毒科成员进行同源性比对,发现与近3年发生在我国的鸭坦布苏病毒同源性最高,在98%以上。且NS基因进化树分析与鸭坦布苏病毒处于同一分支上,符合鸭坦布苏病毒特征。本研究建立的基于未知病原SPIA扩增结合高通量测序检测方法,可同步获知坦布苏病毒基因的核酸信息。     

应用复合PCR方法检测沙门菌的研究

参照文献报道的沙门菌Repeat se和hisJ基因片段的引物序列，设计并合成了2对引物，对沙门菌属和非沙门菌属的标准菌株及分离菌株进行了复合PCR扩增反应。结果，沙门菌PCR产物均出现199bp与495bp的特异性DNA扩增条带．而非沙门菌均未出现扩增条带，证明这2对引物具有沙门菌属特异性。将提取的沙门菌DNA做梯度稀释，测定该复合PCR体系的敏感度。结果表明，此体系可检出10^3CFU／mL菌液提取的DNA模板。应用上述方法，对进境鱼粉阳性样品进行了检测，均出现阳性结果。本研究表明，复合PCR是一种特异、敏感、快速的沙门菌检测方法，可应用于口岸系统鱼粉、肉骨粉的日常检测。