猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的研制

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)JYC株全病毒作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,融合后经间接ELISA进行杂交瘤筛选,共获得4株能分泌针对PRRSV单克隆抗体(简称单抗)的杂交瘤细胞株,分别命名为2G7、6G7、7F2和7E8,其亚类均为IgG1;单抗腹水的间接ELISA效价分别为10×215、10×211、10×215、10×214;间接ELISA试验结果表明,4株单抗与实验室保存的江苏地区临床分离的12株PRRSV以及VR-2332均发生特异性反应,而与猪常见其他病毒如猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(HCV)、猪圆环病毒2(PCV2)均无反应性;间接荧光试验表明,4株单抗与Marc-145细胞感染的PRRSV均呈特异性的荧光反应。因此这些单抗均可用于ELISA方法以及间接荧光试验,从而为建立快速、敏感的PRRSV的抗原检测方法奠定了基础。     

鸭源H5亚型禽流感全禽源分子标记疫苗候选株的构建

为了开发用于南方水禽且适合血清学监测的H5亚型禽流感疫苗,作者通过反向遗传技术,删除A/mallard/Huadong/S/2005(H5N1,S株)病毒HA编码多碱性氨基酸序列,使之成为低致病特征,分别与A/duck/England/1/1956(H11N6,E株)和A/Chicken/Shanghi/F/98(H9N2,F株)的NA组合,再以本室禽源高产病毒F株的6个内部片段为骨架,构建全部基因都来自禽流感的疫苗株.成功拯救出2株重组病毒,分别命名为rH5N6/F和rH5N2/F,并引入分子标记N6和N2.重组病毒在鸡胚和MDCK细胞上均具有较好的繁殖能力,且rH5N6/F更适合在鸡胚中生产,对SPF鸡和鸡胚无致病性.重组病毒在clade2.3.4毒株中具有很好的抗原代表性,引入的分子标记有利于血清学监测的区分,为防控水禽H5亚型禽流感提供了良好的疫苗候选株.     

鲢鱼致病性嗜水气单胞菌的分离与鉴定

目的：利用实验室诊断技术对某鲢鱼养殖厂发病鲢鱼进行诊断,以期为该场发病鲢鱼的治疗和预防提供技术支持。方法：运用细菌分离培养、生化鉴定对该发病养殖场随机挑取发病鲢鱼进行诊断,利用药敏试验进行治疗药物的筛选。结果：从鲢鱼中分离菌株19株,其中13株为嗜水气单胞菌菌株,检出率为68．4％。药敏试验结果筛选出的药物为该病治疗和预防提供了参考依据。     

H5N1亚型禽流感病毒进化的研究进展

H5N1亚型禽流感病毒是重要的人兽共患病病原,其基因组为分节段的负股单链RNA,这种特殊的基因组结构使得流感病毒的进化机制跟其他病毒有所不同。本文对流感病毒的进化机制、H5N1亚型禽流感病毒的进化规律和生物信息学在流感病毒进化中应用等方面的研究进展予以综述。     

检测鸭呼肠孤病毒抗体间接ELISA方法的建立

RT—PCR扩增鸭呼肠孤病毒（Duckreovirus,DRV）的dB基因,克隆到pET-32a（＋）表达载体,再转化大肠杆菌Transetta（DE3）;含有重组质粒pET—σB的大肠杆菌经IPTG诱导,获得大小为55000的以包涵体形式表达的σB重组蛋白。Westernblotting显示,σB重组蛋白能够与兔抗DRV多抗血清特异性结合。以高亲和NI—NTA树脂在变性条件下纯化、梯度尿素复性的σB重组蛋白为包被抗原,建立了检测DRV抗体的间接ELSIA方法。分别以间接ELSIA方法和血清中和试验对DRV感染鸭血清和SPF鸭血清进行检测,两者的符合率为100％。该间接ELSIA方法对鸭瘟病毒、鸭病毒性肝炎病毒和禽流感病毒阳性血清均无交叉反应。     

绵羊包虫病的ELISA诊断试验

在屠宰场通过肝脏观察采集健康的和疑似感染棘球蚴的绵羊血清通过ELISA试剂盒诊断．对ELISA试剂盒的准确性和敏感性进行了评估．发现越是感染后期它的敏感性越高，而在活体中对细粒棘球蚴或多头棘球蚴正确的免疫诊断却比较困难。     

3种抗菌药对沙门氏菌的体外联合抑菌试验

采用2倍稀释法测定氟苯尼考、氧氟沙星及TMP等3种抗菌药物对沙门氏菌的最小抑菌浓度(MIC),再用棋盘法测定3种抗菌药物的两两联合对沙门氏菌的体外抑菌效果。试验结果显示:氟苯尼考、氧氟沙星、TMP对沙门氏菌最小抑菌浓度MIC分别为8μg/mL、1μg/mL、256μg/mL;氟苯尼考与TMP联合表现为协同作用,氟苯尼考与氧氟沙星为无关作用,氧氟沙星与TMP为拮抗作用,表明氟苯尼考和TMP可联合应用于治疗畜禽的沙门氏菌感染。     

河南省四种猪病的血清学监测与分析

河南农业大学牧医工程学院疫病检测中心实验室从河南省88个规模化猪场采取血清样品1095份,采用5套试剂盒检测了猪瘟(HC)、猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)、伪狂犬病(PR)、猪Ⅱ型圆环病毒病(PCV-Ⅱ)4种引起猪繁殖障碍综合征的传染病。其中对24个场进行猪瘟抗原检测,并对包括这24个场在内的64个猪场病例的血清样品618份进行猪瘟、猪繁殖与呼吸障碍综合征、伪狂犬病及圆环病毒病的抗体检测。结果表明,猪瘟抗原检出率是27.8%,抗体检测阳性保护率达81.3%;使用猪繁殖与呼吸障碍综合征疫苗的猪场血清阳性率是85.7%,未使用此疫苗的猪场,阳性率高达69.5%;使用伪狂犬病毒基因缺失苗的猪场抗体阳性率33.8%;圆环病毒抗体阳性率高达73.5%。同时HC、PRRS、PR及PCV-Ⅱ的混合感染也较严重,阳性率分别为18.1%、35.7%、44.7%、78.5%,圆环病毒的阳性率最高。     

一株广西新型鸭肝炎病毒的分离与初步鉴定

从广西南宁疑似鸭病毒性肝炎（DVH）的发病鸭群中分离到1株鸭肝炎病毒（DHV）,命名为GX—NN201201株,其鸭胚半数致死量（ELD50）为10-4.5／0．2mL。对分离毒株GXNN201201进行了DHVRT—PCR诊断、部分片段基因的克隆、序列测定与动物回归试验,结果表明：分离病毒的核酸能被韩国新型DHV特异性引物扩增,而不能被DHV-1的特异性引物扩增。GXNN201201分离株与韩国新型DHV及其他类韩国新型DHV之间的核苷酸序列同源性高达94．0％～98．9％,而与DHV-1疫苗毒株及台湾新型DHV之间的同源性则较低。遗传进化关系分析结果进一步表明该分离株与韩国新型DHV分布在同一分支上,并且与国内类韩国新型DHVGD株的遗传关系最近,属于基因C型DHV。人工感染的病死鸭可见典型的DVH临床特征,与临床发病表现相似。因此,初步确定GX—NN201201为广西新型DHV。     

罗非鱼嗜水气单胞菌的分离鉴定

北京某鱼场饲养的罗非鱼陆续发病死亡,其体表鳞片局部出血,肝、胰、脾脏肿大坏死,肠腔积水等,从病死及濒死罗非鱼的肝、胰脏中分离到 ４ 株细菌,经形态学、生理生化特性及血清凝集试验,鉴定为嗜水气单胞菌。４ 株细菌均能致死小鼠和鲢鱼。药敏试验表明,４ 株细菌对环丙沙星、蒽诺沙星高度敏感,而对青霉素和红霉素不敏感。