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51.
结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6、CFP10基因的克隆、鉴定及其原核表达 总被引:3,自引:0,他引:3
以人型结核分枝杆菌 H37RV株基因组 DNA为模板 ,应用 PCR法对 ESAT- 6和 CFP10基因进行扩增 ,产物经纯化后与载体 PMD18- T连接、转化及酶切鉴定 ,亚克隆到原核表达载体 PGEX- 6 P- 1,构建原核重组表达质粒 ,转化入大肠杆菌 BL2 1中 ,以 1mmol/L IPTG诱导 ,进行 SDS- PAGE电泳。结果表明 ,ESAT- 6和 CFP10基因表达的融合蛋白相对分子质量分别为 32 0 0 0和 36 0 0 0 ,与实测相符。重组结核杆菌分泌蛋白 ESAT- 6和 CFP10的成功表达为结核病诊断及重组疫苗的构建打下了基础 相似文献
52.
以猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型25-4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增外膜蛋白(OMP)5′末端保守区基因片段(OMPc),酶切及核苷酸序列分析鉴定后,与原核表达载体质粒pGEX-6P-1进行连接,构建成重组表达载体pGEX-OM-Pc,转入大肠杆菌BL21中,以IPTG进行诱导,SDS-PAGE电泳分析发现,转化了重组质粒的菌株所表达的融合蛋白相对分子量为34 kD,与实际预测相符,命名为GST-OMPc.GST亲和层析柱进行纯化,ELISA方法对纯化蛋白进行检测.结果表明:纯化蛋白GST-OMPc能够与兔抗猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型的阳性血清反应.OMPc蛋白的成功表达为其功能的研究打下基础. 相似文献
53.
54.
根据克隆的毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株微线蛋白-2基因(EnMIC-2(Gd))的cDNA序列设计特异性引物,用PCR方法扩增其阅读框架(ORF)后,克隆至质粒表达载体pET-32a( ),成功构建了重组表达质粒pET-32a( )-EnMIC-2。用CaCl2法将其转化至宿主细菌E.cliBL21(DE3),并用IPTG成功诱导了EnMIC-2重组抗原在大肠杆菌表达。表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的10.8%,其相对分子质量约为55000。重组蛋白经SDS-AGE分析后,用E.necatrix(广东株)感染鸡的高免血清进行Western Blotting分析,结果为阳性。 相似文献
55.
56.
本试验旨在研究不同蛋氨酸(Met)水平对13~16周龄京红商品代蛋鸡生长性能以及后续产蛋性能的影响。选用12周龄末体重胫长相近的750只京红商品代蛋鸡,随机分为5组,每组5个重复,每个重复30只鸡。对照组饲喂Met水平为0.18%的玉米-豆粕型基础饲粮,试验组在基础饲粮水平上用0.06%、0.12%、0.18%、0.24%的Met替代等量的膨润土,使其Met水平分别达到0.24%、0.30%、0.36%、0.42%,试验期4周。饲养试验结束后统一饲粮继续观察至27周。结果表明:Met水平对末体重、平均日增重、平均日采食量和耗料增重比无显著影响(P0.05);0.30%和0.42%Met组血清中总蛋白、白蛋白和球蛋白显著高于0.18%Met组(P0.05);饲粮Met水平对血清白球比、碱性磷酸酶活性、尿酸和血氨含量无显著影响(P0.05);0.42%Met组血清中游离Met含量显著高于0.18%、0.24%、0.30%Met组(P0.05);在后续观察中,0.36%Met组京红蛋鸡的体重均匀度最高,且显著高于0.30%Met组(P0.05),后期产蛋性能高于0.42%Met组。综合分析,京红商品代蛋鸡13~16周龄Met需要量为0.36%。 相似文献
57.
本试验通过研究不同含硫氨基酸水平对7~12周龄京红商品代蛋鸡生长性能和血清生化指标的影响,以确定其含硫氨基酸的需要量。选取6周龄末体重、胫长均匀一致的京红商品代蛋鸡750只,随机分为5组,每组5个重复,每个重复30只鸡。对照(A)组饲喂含硫氨基酸水平为0.42%的基础饲粮,试验B、C、D和E组在基础饲粮水平上用0.08%、0.16%、0.24%和0.32%的蛋氨酸替代等量的膨润土,使其含硫氨基酸水平分别达到0.50%、0.58%、0.66%和0.74%,试验期6周。结果表明:1)0.58%、0.66%、0.74%含硫氨基酸组蛋鸡末体重和平均日增重显著高于0.42%与0.50%含硫氨基酸组(P0.05),同时0.66%含硫氨基酸组料重比显著低于0.50%含硫氨基酸组(P0.05),且蛋鸡血清总蛋白、球蛋白含量也显著高于其他试验组(P0.05)。2)单斜率非线性折线回归分析表明,以末体重和平均日增重为指标,7~12周龄京红商品代蛋鸡含硫氨基酸推荐需要量为0.62%。综上,7~12周龄京红商品代蛋鸡饲粮含硫氨基酸需要量为0.62%~0.66%。 相似文献
58.
布鲁菌病(布病)是一种严重的人兽共患病。作为布病的病原,布鲁菌能够耐受宿主体内的各种杀菌机制并持续的生存。当布鲁菌侵入宿主体内后,必须适应抗体免疫的环境,而这依赖于布鲁菌对自身基因表达的巧妙调控。Hfq蛋白是一个RNA伴侣分子,对于介导sRNA的转录后调控发挥着重要的作用。在多种细菌中,对Hfq蛋白的功能都进行了深入的研究,目前已经发现该蛋白与细菌基因的表达调控、细菌对多种应激环境的适应能力以及致病菌的毒力均有着密切的关系。论文对Hfq蛋白的结构,对sRNA的调控功能,特别是布鲁菌Hfq蛋白调控功能的研究现状及在布病疫苗研发中的应用进行系统的介绍,为布鲁菌基因的表达调控和布病防控技术的研究提供参考。 相似文献
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60.